中国生物化学与分子生物学报

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熊瑜琳，张长江，王小红

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 587-592.

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丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）是单股正链的RNA 病毒，全长为9.6 kb，包括1个大的开放阅读框（ORF）和两侧的5′，3′非编码区（UTRs）.核糖体通过进入HCV 5′UTR 端的内部核糖体进入位点（IRES）,将HCV基因组翻译成1个聚蛋白前体.前体聚蛋白被宿主和病毒的蛋白酶共同切割成为若干个具有独立功能的HCV蛋白，根据功能的不同分别命名为C、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A 和NS5B，它们不但在HCV的生活史中发挥着重要的作用，也影响着宿主细胞的信号传导、凋亡及物质代谢等一系列生化过程.近年来，随着HCV体外细胞摸型的不断发展，其病毒分子生物学方面的研究取得了很大的进展.本文从基因组结构及其编码的蛋白功能等方面阐述了HCV病毒的研究进展，为致病机理的研究及抗HCV药物的开发和疫苗研制等提供理论基础.

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MicroRNA调控造血干细胞发育

孙建国;廖荣霞;周度金

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 593-596.

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造血干细胞是目前研究最为深入的成体干细胞，是极富应用前景的研究领域，然而其维持自我更新以及多向分化潜能的分子机制尚不明.MicroRNA (miRNA)是一类崭新的调控性非编码小分子RNA，在监控生物体个体发育和细胞增殖、分化进程中起着重要作用.miRNA参与包括胚胎干细胞和多种成体干细胞的发育进程，人类造血干细胞及其发育过程中也存在特征性miRNA表达谱，参与调控造血干细胞发育进程，以miRNA为分子靶点的防治造血功能低下疾患的研究具有广阔的应用前景.

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毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种抗病毒蛋白y3特性和氨基酸序列分析

吴丽萍;吴祖建;林董;方芳;林奇英;谢联辉

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 597-603.

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食用菌中含有多种抗病毒蛋白，可用于植物保护．利用离子交换层析技术和凝胶层析技术，从食用菌毛头鬼伞中提取到抗植物病毒蛋白y3．实验结果表明,y3是一种糖蛋白，利用Western杂交方法可以在发酵菌丝体和子实体中同时检测到，说明可能是组成型表达．根据其N端氨基酸序列，使用RACE-PCR克隆技术，获得了蛋白的氨基酸序列和部分cDNA序列．浓度为2.0 μg/ml时,蛋白y3对烟草花叶病毒(TMV, 20 μg/ml)侵染心叶烟的抑制率为50％，实验同时表明,y3还可抑制病毒在寄主普通烟Nicotiana tabacum var. K326中的复制．

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白纹佛蝗线粒体全基因组序列

师红雯，丁方美，黄原

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 604-611.

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通过长PCR扩增线粒体全基因组进行保守引物步移法结合克隆测序技术,对白纹佛蝗mtDNA 全序列进行了测定和分析.结果表明:白纹佛蝗线粒体基因组全长15 657 bp，包含13 个蛋白编码基因、22个tRNA 基因和2 个rRNA 基因以及1个非编码的控制区域，它们的长度分别是11 202 bp,1 486 bp,2 156 bp 和 728 bp.37个基因的位置与飞蝗的一致，有9对基因间存在41 bp重叠，重叠碱基数在 1～8 bp之间；基因间隔序列共计21处 126 bp，间隔长度从 1～20 bp不等，最大的基因间隔是20 bp，是在tRNALys 和 ATP8 基因之间.还对lrRNA和srRNA二级结构进行了预测，同时也对tRNA反密码子臂的碱基对类型以及不同链上蛋白编码基因的A/T,C/G组成偏向性进行了详细的讨论.

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Mg²⁺和Na⁺对多核酶系统体外切割反应的影响

田生礼，郑硕;刘士德;徐东平;TakaoOHNUMA

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 612-618.

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为了进一步了解2价Mg^2＋和1价Na+存在与否的情况下,多核酶系统对底物RNA的切割效率，构建了pGEMCoat′A，pGEMCoat′A196Rz 质粒和pGEMMDR1靶质粒．通过用SP6/T7转录试剂盒在体外转录RNA，在无细胞系统进行切割反应，反应产物通过6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，干胶、X光片曝光自显影，利用Image J 生物图像分析软件分析. 结果表明，多核酶系统的切割效率依赖于二价Mg^2＋的浓度，切割产物随Mg^2＋浓度的增加而增加，而且具有反应时间的依赖性. 在Na+浓度低于200 mmol/L且单独存在时，没有切割产物生成．相反,在Na⁺和Mg^2+共存时，表现出Na⁺抑制Mg2+诱导的切割活性，切割效率明显低于Mg²⁺单独存在时的结果.这些结果提示,在生理环境下,Mg²⁺对于多核酶系统对底物的切割反应是必需的，而Na⁺则不是．

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一种改进的荧光共振能量转移方法分析同质二聚体内蛋白质-蛋白质相互作用

韩福军;罗永峰;徐军

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 619-629.

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荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)技术日益广泛的应用于检测活细胞中分子内和分子间的相互作用. 由于FRET仅发生于相互作用的供体和受体，即供体-受体复合物之间，所以检测的FRET信号必须经标准化处理以去除供体受体比例和浓度的影响然后才能够进行FRET的比较研究. 由于供体和受体的比例相同，分子内FRET的检测较为简单；而分子间FRET的检测存在更多的不确定因素,导致现有的方法很难精确定量.根据1类特殊的分子间相互作用，同质二聚体的独特特征，推导出供体受体复合物的含量，进而开发了1种同质二聚体分子间FRET的精确定量的方法,以1种同质二聚体，雌激素受体α(estrogen receptor alpha， ERα)为供体和受体对，通过和其它的方法比较，证实了该方法用于FRET检测可获得更可靠的结果.

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重组西尼罗病毒NS5融合蛋白依赖RNA的RNA聚合酶特性鉴定

李晓峰,陈水平,姜涛,邓永强,秦成峰,于曼,秦鄂德

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 630-636.

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西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)非结构蛋白NS5是病毒基因组复制的关键蛋白.以病毒全长cDNA克隆为模板，PCR扩增获得NS5的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性区（NS5pol）及该蛋白完整的编码序列（NS5F），分别克隆于原核表达载体pET-28a 并转化至大肠杆菌E.coliBL21（DE3）中诱导表达.表达的可溶性重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定.结果显示,二者均为病毒特异蛋白,且纯度均在90%以上.进一步的体外RdRp分析及EMSA的结果表明，NS5pol和NSF5均有较高的RdRp活性，且该活性具有RNA模板序列和二级结构的特异性.获得的具有RdRp活性的NS5pol和NS5F为西尼罗病毒基因组复制相关元件的研究奠定了基础.

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小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞毒蕈碱受体的表达特征

杨洪涛;刘志强;陈苹;马康涛;周春燕;张永珍

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 637-642.

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为了探讨胚胎干细胞分化心肌细胞（ESCM）毒蕈碱受体的表达规律及β肾上腺素能系统对M2受体表达的影响，采用10^－4 mol/L维生素C体外诱导小鼠M13胚胎干细胞分化为心肌细胞，用RT-PCR检测到分化后的细胞表达心肌细胞特异性基因Nkx2.5和β肌球蛋白重链；用免疫荧光法检测到分化后的细胞表达心肌细胞特异性标志物α辅肌动蛋白.小鼠胚胎干细胞分化前表达M₁和M₂毒蕈碱受体，在分化过程中，M₁受体表达逐渐下降， M₂受体表达在第3 d显著下降，此后表达逐渐增加，在第14 d达到高峰；Western印迹结果显示，异丙肾上腺素明显抑制M₂受体的表达，选择性β₁肾上腺素受体拮抗剂CGP20712A明显上调其表达，而选择性β₂肾上腺素受体拮抗剂 ICI118551对其表达无影响.本实验表明，小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞表达毒蕈碱受体, β肾上腺素能系统对M₂受体表达有调控作用.

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猪IGF2基因外显子3的遗传多态性及遗传效应分析

薛慧良，徐来祥

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 643-648.

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采用PCR-SSCP方法检测猪胰岛素样生长因子2 (insulin-like growth factor 2，IGF2)基因外显子3多态性，分析其对初生重、断奶重、6月龄重和背膘厚的遗传效应.根据猪IGF2基因的DNA序列（AY044828）设计引物，结果在其扩增片段上检测到多态性，对纯合子进行测序，发现IGF2-ex3-A36T和IGF2-ex3-G109A两个多态性位点，并且这2个多态性位点完全连锁，检测到3种基因型（A36A/G109G，A36T/G109A 和 T36T/A109A）.统计结果表明，基因型在各品种中分布不一致，长白猪和大白猪与莱芜猪、大薄莲猪、沂蒙黑猪和里岔黑猪比较基因型分布差异极显著（Ｐ<0.01）；其它猪种间基因型分布差异均不显著（Ｐ>0.05）.固定效应模型分析结果表明，初生重和背膘厚基因型间差异显著（Ｐ<0.05），而断奶重和6月龄重基因型间差异不显著（Ｐ>0.05）.最小二乘分析结果表明，A36A/G109G基因型个体同A36T/G109A和 T36T/A109A基因型个体比较初生重和背膘厚的差异显著（Ｐ<0.05），3种基因型初生重的大小排列顺序为A36A/G109G < A36T/G109A < T36T/A109A，背膘厚的大小排列顺序为A36A/G109G > A36T/G109A >T36T/A109A.因此，推测IGF2基因对个体的初生重和胴体瘦肉率存在一定的影响，将IGF2基因应用于猪育种过程中的标记辅助选择，将可以改善猪肉品质，加快猪的育种进程.

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Bach1与Nrf2调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶对大鼠慢性阻塞性肺疾病的作用

高军丽;戴爱国

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 649-655.

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为了探讨Bach1 (BTB and CNC homology 1)与红系衍生的核因子相关因子2（Nrf2）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的表达变化在慢性阻塞性肺疾病（COPD）中的作用和意义，用气管内注入脂多糖及熏香烟的复合刺激法建立大鼠COPD 模型．观察两组大鼠的肺组织病理学改变，测两组大鼠的肺功能指标；应用免疫组化、Western印迹、原位杂交和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）等方法检测Bach1与Nrf2及γGCS 在两组大鼠的肺组织中的表达．结果显示，COPD组的肺功能指标（FEV_0.3、FEV_0.3/FVC%、PEF）明显恶化；光镜下肺组织病理改变符合COPD的特征性改变；γGCS与Nrf2 的mRNA及蛋白质表达在COPD组大鼠肺组织中明显增强；而Bach1 mRNA及蛋白质在COPD组和对照组的表达无明显差别．且核/胞浆分离技术表明,Nrf2蛋白在对照组主要表达于胞浆，胞核中表达水平较弱，在COPD组胞浆、胞核均有表达，但是在胞核中的水平明显升高；Bach1蛋白在对照组主要表达于胞核中，胞浆中无明显表达，在COPD组主要表达于胞浆，胞核中无明显表达．相关性分析表明,γ-GCS mRNA与FEV_0.3、FEV_0.3/FVC%、PEF均呈负相关；Nrf2蛋白表达与γGCS mRNA呈正相关；Bach1蛋白与γGCS mRNA呈负相关．上述结果提示,Bach1与Nrf2和γ-GCS可能均在大鼠COPD的发病中发挥作用，且Bach1和Nrf2可能通过竞争性机制调控γ-GCS的表达，影响COPD的发生和发展．

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9种Na⁺通道mRNA在5个不同发育阶段大鼠16种组织中表达及变化趋势

王军;王运杰;欧绍武;宗志红

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 656-666.

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电压-门控Na⁺通道由1个可单独发挥作用的α亚单位和2～4个起辅助作用的β亚单位构成，在可兴奋细胞动作电位的产生及传导等过程中起重要作用.采用RT-PCR法对5个不同发育阶段(P1、P9、P40、P80、P120)Wistar大鼠16种不同组织的9种Na⁺通道α亚单位及1种β亚单位的mRNA进行检测发现：同种类型Na⁺通道mRNA在大鼠不同组织中的表达不同，不同类型Na⁺通道mRNA在大鼠同一组织中的表达不同.其中,神经系统和心肌组织中Na⁺通道mRNA的表达最高，随着日龄的增加，Na⁺通道mRNA在不同组织中表达的变化趋势不同.Na⁺通道在全身组织中的广泛分布及随发育周期的不同变化趋势,为离子通道病的研究及治疗提供了理论基础.

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3T3-L1脂肪细胞膜FGF-21结合蛋白的初步鉴定

王文飞;任桂萍;侯玉婷，李德山

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 667-673.

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成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）-21是最近发现的1个可以独立调节血糖的细胞因子，有望成为治疗2型糖尿病的备选药物．但是,FGF-21调解血糖的机理尚不十分清楚．为探讨该因子功能受体，应用偶联方法，以3T3-L1脂肪细胞为靶标，以FGF-21为诱饵,在3T3-L1脂肪细胞膜上寻找结合蛋白．结果表明，生物素标记的FGF-21可与脂肪细胞膜蛋白形成分子质量大小约300 kD以上两组复合物．竞争试验显示，非标记的FGF21可与生物素标记的FGF-21竞争、抑制标记的FGF-21参入复合物；应用非标记FGF21剂量越大，抑制后者参入复合物的程度越强.结果提示,该复合物是FGF-21特异性的．此外，随着生物素标记的FGF-21剂量增加，观察到的标记复合物越多；但是，当FGF-21剂量达12.5 mg/L以上时，观察到的复合物数量不再增加．实验结果提示，复合物形成与FGF-21剂量相关；FGF-21特异结合的蛋白质结合位点饱和后，复合物形成量最大．同时，采用FGF受体特异性抑制剂SU5402可特异性抑制FGF-21在3T3-L1脂肪细胞中的促进葡萄糖吸收作用，提示本实验所观察到的FGF-21膜蛋白复合物可能就是FGF-21-FGF受体

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MicroRNA-21反义寡核苷酸可以抑制U373MG细胞对替尼泊苷VM-26的耐受性

王芳;孟颖;刘民;李欣;刘悦;汤华

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 674-678.

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脑胶质瘤患者对化疗药物的耐受性是亟待解决的问题之一．microRNA参与了肿瘤发生发展的诸多过程．选取目前临床上常用的治疗脑恶性胶质瘤的化疗药物替尼泊苷(teniposide) VM-26和人恶性胶质瘤细胞系U373MG为研究对象，通过反义寡核苷酸技术，应用MTT及细胞生长曲线等方法，发现抑制microRNA-21的功能后,细胞活性明显降低，且可以在一定程度上抑制U373MG细胞对VM-26作用的耐受性，而且这种耐受性的抑制与细胞生长速度关系不大，从而为指导临床用药，探索肿瘤细胞耐受化疗药物的机制提供新的线索．

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猪Wnt10b基因cDNA的克隆及生物信息学分析

杨映娟，李惠侠，杨公社

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(07): 679-683.

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Wnt10b是Wnt转录因子家族成员之一，是一种胞外信号分子，它通过一系列复杂信号通路调控胚胎发育、干细胞定向分化等生理过程.根据NCBI公布的wnt10b基因序列在保守区内设计引物，利用降落PCR法扩增猪Wnt10b基因，所得序列提交GenBank，登录号EU181371.核酸序列分析结果显示，该基因编码394个氨基酸，与人、小鼠、大鼠、牛和马等核苷酸序列比对，同源性分别为94%、89%、89%、92%和93%，氨基酸同源性分别为98%、96%、96%、94%、98%和97%.揭示该基因在不同物种间具有高度保守性.

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