中国生物化学与分子生物学报

Select

赵建增,刘丽,陈惠仁,梅英杰

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 117-121.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

探讨了从肌肉组织植入的人血小板生成素（ＴＰＯ）基因在小鼠体内的表达规律，以及对造血祖细胞增殖活性的影响．基因在导入后的２４小时内就开始转录，先于血小板、血液ＴＰＯ浓度、及造血祖细胞的变化．所表达的ＴＰＯ在血液中的聚积可持续４周以上．巨核祖细胞，粒系祖细胞都出现２周左右的增殖增长，长于血小板计数的升高，但红系祖细胞的变化不明显．这些结果显示，基因治疗过程中血小板计数等变化源于ＴＰＯ的表达及刺激，而在此期间一些调控机制被激活，对血小板形成的平衡发挥作用．

Select

纤维结合素分子中Asp1961～Glu1978序列对三结构域多肽在大肠杆菌中表达的影响

冯作化,李东,张桂梅,张慧,范曲

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 122-127.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

构建了人纤维结合素（ＦＮ）的三功能结构域重组多肽的两个表达质粒，分别编码两个重组多肽：ＣＨ６２（ＦＮ的Ｐｒｏ１２３９～Ｓｅｒ１５１５经Ｍｅｔ和Ａｌａ１６９０～Ｖａ１２０４９相连）和ＣＨ６３（从ＣＨ６２中删除了Ｉｌｅ１８５０～Ｇｌｕ１９７８）．ＣＨ６２在大肠杆菌中的表达效率很低，而ＣＨ６３的表达效率则很高，结果提示ＦＮ分子中的Ａｓｐ１９６１～Ｇｌｕ１９７８序列是影响三结构域多肽在大肠杆菌中表达的关键结构．ＣＨ６３经过溶解和复性后，可通过肝素－琼脂糖亲和层析得到纯品，所得纯品具有结合肝素和结合细胞的功能，且结合细胞的能力比双结构域ＦＮ多肽更强，表明两个结合细胞的功能结构域均有活性．ＣＨ６３的制备为进一步研究具有更强的抑制肿瘤转移作用的基因工程制品奠定了基础．

Select

乳清酸蛋白(WAP)基因调控序列的鉴定及在小鼠乳腺细胞表达LacZ基因的研究

卢一凡,邓继先,周江,肖成祖,马清钧

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 128-133.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

乳清酸蛋白（ＷＡＰ）是小鼠乳中的主要蛋白质．在亚克隆该基因的基础上，对其进行了酶切鉴定，并对该基因５′区进行克隆和序列分析，在核实序列正确后，构建了以其为调控序列，指导β－半乳糖苷酶基因的真核表达质粒，采用直接注射质粒的方法在小鼠乳腺中表达出β－半乳糖苷酶活性，从而证实基因调控序列的功能正确性，可以用于转基因动物乳腺表达研究，同时证实该方法可以作为一种暂时性表达载体的验证方法．

Select

用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白

王业富,齐义鹏,岳莉莉,杜全胜,邓小昭

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 134-139.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）与ＨＣＶ抗原的双功能融合蛋白，经ＥＬＩＳＡ测定和荧光显微镜观查证实，表达产物既能发射易于检测的绿色荧光，又具有ＨＣＶ的抗原活性，实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原，为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础．

Select

人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立

岳军明,张宏权,李宝林,户荣良,俞炜源,王会信,殷震,李华,王太一

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 140-143.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

应用大鼠β乳酪蛋白基因的上游调控序列和人尿激酶原ｃＤＮＡ构建成功了乳腺定位表达载体．用显微注射的手段导入到受精卵的雄前核，从注射的３００枚受精卵中，１４０枚被移植到９只假孕的受体小鼠．结果从获得的子一代小鼠中，经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，有３只转基因阳性的小鼠．

Select

MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生

何泉,陈兰英,戴蕴平,陈永福,刘力生

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 144-150.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系，并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达，构建肌球蛋白轻链－２启动子（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ－２ｐｒｏｍｏｔｅｒ，ＭＬＣ２）－糜酶融合基因并产生转基因小鼠．通过删除糜酶基因启动子序列，构建结构基因克隆，然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链－２启动子序列相拼接，构建ＭＬＣ２－糜酶融合基因克隆，回收并纯化融合基因片段，显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠，经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＰＣＲ扩增产物的测序，筛选和确定转基因鼠．在新出生的４６只小鼠中有２只为转基因阳性鼠，且外源基因能稳定遗传给后代，从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型．

Select

格拉姆柱花草(Stylosanthes gracilis H.B.K.cv.Graham)凝集素的纯化与性质研究

罗刚跃,陈兆平,彭建宗,程双奇,莫熙穆

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 151-155.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为了探讨凝集素在豆科植物与根瘤菌的识别过程中的作用，用ＤＥＡＥ－３２离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤分离、纯化格拉姆柱花草种子凝集素（ＳＧＬ），其分子量约为４５ｋＤ，由两个相同的亚基组成，等电点约ｐＨ５．８，它是一种糖蛋白，含糖量约为２．６％．ＳＧＬ的热稳定性强．ＳＧＬ的血凝活性能被甘露糖所抑制．ＳＧＬ对红细胞的凝集作用可能具有种属专一性；ＳＧＬ具有强的促有丝分裂作用；荧光标记实验显示：９株能与格拉姆柱花草植株结瘤的菌株有７株能与ＳＧＬ结合，６株不能与之结瘤的菌株，只有１株能与ＳＧＬ结合，这表明不同根瘤菌菌株对ＳＧＬ的结合能力，和它们在格拉姆柱花草上结瘤能力之间可能具有一定的生物学相关性．

Select

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的分离纯化

杨嘉树,李令媛,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 156-163.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为获得一种高效，低廉的溶栓药物，从赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆａｅｔｉｄａ）体内分离纯化出一种可体外激活纤溶酶原从而间接降解纤维蛋白的酶（ｅ－ＰＡ）．纯化过程包括：粗品的盐析，离子交换层析，凝胶过滤层析及疏水相互作用层析．该组份是由二个亚基通过疏水相互作用维系在一起的．通过凝胶过滤层析，可测得全酶的分子量为４５０００；ＳＤＳ电泳显示大、小亚基的分子量分别是２６０００与１８０００；而质谱法测得的大、小亚基的分子量分别为２４５５６．７与１５５４６．６．对大小亚基进行了氨基酸组成分析，结果显示大亚基不含Ｌｙｓ而小亚基不含Ｃｙｓ．测定了大亚基Ｎ端２５个氨基酸序列：ＶＩＧＧＴＮＡＳＰＧＥＩＰＷＱＬＳＱＱＲＱＳＧＳＷ．并与部分已知蛋白质序列进行了比较．ｅ－ＰＡ在纤维蛋白平板上表现有三种不同的纤溶活性

Select

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究

杨嘉树,李令媛,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 164-169.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

从赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆａｅｔｉｄａ）中纯化出的一种纤溶酶原激活剂（ｅ－ＰＡ）在纤维蛋白平板上可表现出三种活性，分别记为：ＣＦＰｇ，ｕＣＦＰｇ和ｕＣＦ．为更好了解各种活性与ｅ－ＰＡ的纤溶能力的关系，考察了在ＳＤＳ和不同抑制剂存在下各种活性的变化．结果表明，ＳＤＳ可以增强ＣＦＰｇ活性且使得ｅ－ＰＡ变得对一些抑制剂更敏感；ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ，ｐｅｐｓｔａｔｉｎ，ａｐｒｏ－ｔｉｎｉｎ，ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＰＭＳＦ）和ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ（ＤＴＴ）对ｕＣＦ没有影响；ｐｅｐ－ｓｔａｔｉｎ能增强ＣＦＰｇ和ｕＣＦＰｇ活性，Ｅ－６４（一种巯基抑制剂）能增强ｕＣＦＰｇ和ｕＣＦ活性．这些现象说明不能简单将ｅ－ＰＡ归结为丝氨酸蛋白酶或巯基蛋白酶．此外又以纤溶酶原为底物，分析了ｅ－ＰＡ在体外降解天然蛋白质的肽键特异性，结果表明：ｅ－ＰＡ可以切割碱性氨基酸，小的中性氨基酸及Ｍｅｔ的羧基端，同时ｅ－ＰＡ确能将纤溶酶原切割为纤溶酶；这一结论为ｅ－ＰＡ有可能成为新型溶栓药物提供了生化基础．

Select

FD耐热逆转录酶的部分酶学性质研究

郑佐华,周宗祥,朱蔚,殷长传,季朝能,毛裕民

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 170-174.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

ＦＤ耐热逆转录酶（ＦＤ－ＴＲＴ）来自一株栖热杆菌菌株．通过ＲＴ－ＰＣＲ方法，论文对ＦＤ－ＴＲＴ的部分酶学性质进行了研究．ＦＤ耐热逆转录酶能耐受９５℃的高温，最适反应温度在６５～７５℃左右，这时ＲＮＡ的高级结构能解开，可以提高逆转录反应的效率；同时引物和ＲＮＡ模板识别的专一性强，可大大提高逆转录的特异性．实验表明ＦＤ－ＴＲＴ逆转录反应的最适条件为：２５ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．８，１５ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４，１００μｇ／ｍｌ明胶，５００μｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ，２５ｐｍｏｌ逆转录引物，１ｍｍｏｌ／ＬＭｎＣｌ２，２ＵＦＤ耐热逆转录酶，反应在６５～７０℃下进行．在上述条件下，用ＲＴ－ＰＣＲ可检出少于５ｐｇ外周血总ＲＮＡ中特异的α珠蛋白ｍＲＮＡ．

Select

牛红细胞超氧化物歧化酶活性中心的紫外光谱研究

梁贤振,李连之,胡绪英,周永洽,申泮文

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 175-180.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

应用差示分光光度法研究了牛红细胞Ｃｕ２Ｚｎ２ＳＯＤ的紫外光谱，归属和讨论了酶活性中心金属离子与配体间全部电荷转移谱带，给出了相应的配体轨道光学电负性，特别研究了涉及Ｚｎ２＋的电荷转移谱带．

Select

色氨酸残基在内切葡聚糖酶分子中的作用

阎伯旭,曲音波,高培基,孙迎庆

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 181-185.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

内切葡聚糖酶的化学修饰研究表明：色氨酸残基可能位于活性位点，与底物结合有关．荧光光谱测定指出该酶的荧光几乎都来自色氨酸残基，酶分子中色氨酸微环境对ｐＨ变化非常敏感，降低ｐＨ导致了酶分子构象发生了较大变化，配基结合使酶分子色氨酸微环境产生了改变，引发了与ｐＨ诱导不同的构象变化．

Select

一种用于蛋白质C端序列测定的脯氨酸乙内酰硫脲(TH-Pro)新制备方法

莫碧兰,李江,梁宋平

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 186-191.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

采用Ｌ－型脯氨酸（Ｌ－Ｐｒｏ）作为原料，三甲基硅烷异硫氰酸酯（ＴＭＳ－ＩＴＣ）作为偶联试剂制备脯氨酸乙内酰硫脲（ＴＨ－Ｐｒｏ）．产物经反相ＨＰＬＣ分离纯化，并通过氨基酸组成分析，紫外光谱扫描，质谱和核磁共振等方法鉴定．反应产率高达９６％．

Select

基因扩增产物的固相杂交-酶联显色方法的建立

王凤水,王宇,陈红松,丛旭

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 192-197.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

建立基于基因扩增技术的简便、快速的病毒核酸定量检测方法．将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的病毒基因产物，与通过共价键结合在微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色，读取光密度值．应用本方法对血清中乙型、丙型肝炎病毒核酸定量检测，灵敏度分别可达１－５拷贝／反应．此方法简便、快速、特异性好、敏感性高、半定量指标客观，可广泛应用于肝炎病毒感染的临床诊断和疗效评价．

Select

HyTK基因转移联合ganciclovir对瘢痕成纤维细胞的体外杀伤作用

张晓志,彭朝晖,吴小兵,韩虹,徐钤

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 198-204.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的过度增生主要是由于高度增生活性的成纤维细胞的数量异常增多及细胞外基质合成增加所致．用逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）的转移，随后应用药物９－（１，３－二羟基－丙氧基－甲基）鸟嘌呤（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）可选择性地杀死增生细胞．采用组织块贴壁法在体外原代培养成功增生性瘢痕病人的成纤维细胞（ＦＢ）．重组逆转录病毒ＧＴＫ转染ＦＢ细胞后，用ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ筛选出阳性细胞克隆（ＦＢ／ＧＴＫ），经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入ＦＢ中，但不含可复制的辅助病毒．分别用不同浓度的ＧＣＶ作用于ＦＢ／ＧＴＫ及ＦＢ，光镜下观察不同时间后细胞形态变化及ＭＴＴ法检测细胞活性．结果表明，ＧＣＶ浓度大于０．１μｍｏｌ／Ｌ时即对ＦＢ／ＧＴＫ有显著的杀伤作用，且具有强有力的“旁观者效应”

Select

神经酰胺诱导药物敏感型和耐药型细胞凋亡机制的探讨

金朝晖,许彩民,陈忠雷,潘华珍

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 205-211.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

以药物敏感型细胞株Ｋ５６２／Ｓ和耐药型细胞株Ｋ５６２／Ａ０２为对象．观察原癌基因Ｂｃｌ－２的表达量在两种细胞中的差异，以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力，并利用酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，酪氨酸磷酸酯酶抑制剂ｖａｎａｄａｔｅ，观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系．结果显示：在Ｋ５６２／Ａ０２中Ｂｃｌ－２的表达量明显高于Ｋ５６２／Ｓ；外源性神经酰胺能成功地诱导Ｋ５６２／Ｓ，Ｋ５６２／Ａ０２细胞凋亡，凋亡细胞具有典型的形态学改变和ＤＮＡ“Ｌａｄｄｅｒ”形成，ＦＣＭ检测出现凋亡细胞峰，但在同样的诱导条件下，Ｋ５６２／Ｓ细胞凋亡明显高于Ｋ５６２／Ａ０２细胞．ＦＣＭ检测ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能显著改变这两种细胞生长周期，但细胞阻滞于Ｇ２／Ｍ期，便对神经酰胺诱导的细胞凋亡无明显作用，ｖａｎａｄａｔｅ单独对细胞地明显作用，但与神经酰胺共同作用能明显提高细胞凋亡率．以上结果表明在药物诱导的细胞调亡中Ｂｃｌ－２基因起重要作用，神经酰胺能诱导Ｋ５６２／Ｓ和Ｋ５６２／Ａ０２细胞调亡．

Select

佛波酯对SMMC-7721人肝癌细胞粘附及整合蛋白基因表达的调控作用

傅剑,王静英,张月娥,查锡良

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 212-217.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

用促癌剂佛波酯（ＰＭＡ）作用于ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞，研究细胞表面的主要粘附分子α５β１整合蛋白基因表达及相应细胞粘附行为的改变．用１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ作用ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞，发现其作用因时间的长短而异，作用３０、６０、１２０ｍｉｎ分别增加细胞与纤连蛋白（Ｆｎ）粘附１８．８％、３８．７％和５６．６％，作用６、１２ｈ分别降低４４．０％、３７．４％，而不影响与多聚赖氨酸的粘附．使用足量的抗α５和／或抗β１单抗预先封闭细胞与Ｆｎ的结合点，再将细胞与Ｆｎ粘附，发现α５单抗单独使用可将ＳＭＭＣ－７７２１细胞与Ｆｎ的粘附抑制２０％左右，β１单抗则抑制１４％，两者联合使用时可封闭４０％左右的粘附，提示该细胞表面存在除α５β１外的其它整合蛋白在介导着细胞与Ｆｎ的粘附．进一步应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，分析整合蛋白基因表达，发现１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ抑制α５亚基转录，以３０ｍｉｎ最明显，抑制达８３．１％，作用６、１２ｈ抑制率仍为４６．６％、４３．６％．还就ＰＭＡ影响细胞粘附和整合蛋白基因表达的可能机理作了讨论．

Select

佛波酯引起蛋白激酶C下降调节的专一性

夏保云,李忠,张帆,巨同忠,陈惠黎

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 218-221.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

探讨了佛波酯（ＰＭＡ）对蛋白激酶的下降调节是否有激酶专一性及亚型专一性．用组蛋白Ｈ１作为蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）的受体底物，加入ＰＫＣ和ＰＫＡ的特异性激活剂区分ＰＫＣ和ＰＫＡ，用聚谷酪（４１）为酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）的专一性受体底物，以３２Ｐ－ＡＴＰ为３２Ｐ共同供体底物测定三种蛋白激酶的活力，并用免疫组化法测定ＰＫＣ亚型．结果发现ＰＭＡ对人７７２１肝癌细胞只引起ＰＫＣ而不引起ＰＫＡ和ＴＰＫ的下降调节，ＰＫＣ的非特异性抑制剂槲皮素和特异性抑制剂Ｄ－鞘氨醇能大部分取消ＰＭＡ对ＰＫＣ的下降调节，但ＴＰＫ抑制剂ｇｅｎｅｓｔｅｉｎ则没有阻断下降调节的作用．用ＨＬ－６０细胞还证明ＰＭＡ只对含量丰富的ＰＫＣα和ＰＫＣβⅡ亚型而不对含量很少的ＰＫＣβⅠ亚型发生下降调节．上述结果说明ＰＭＡ对蛋白激酶的下降调节有激酶和亚型专一性．

Select

啤酒酵母DNA修复基因RAD24温度敏感突变株的分离及其特性的初步研究

朱应葆,韩云,傅欣,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 222-226.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

以ＹＣｐｌａｃ系列带Ｔｒｐ、Ｈｉｓ和Ｕｒａ标志基因的载体为骨架构建含野生型和经羟胺处理的突变型的啤酒酵母ＲＡＤ２４基因质粒，用质粒替换方法分离ＲＡＤ２４基因温度敏感突变株（ｒａｄ２４－ｔｓ３）．紫外生存试验发现，ｒａｄ２４－ｔｓ３对紫外线敏感；同位素（３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－ＵＲ，３Ｈ－Ｌｅｕ）参入试验表明，该突变株ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质合成均较野生型明显降低．

Select

糜酶基因在转染的乳鼠心脏组织细胞中的表达

何泉,陈兰英

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 227-229.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

糜酶基因在转染的乳鼠心脏组织细胞中的表达何泉陈兰英（中国医学科学院、中国协和医科大学，心血管病研究所、阜外心血管病医院，北京１０００３７）ＴｈｅＨｕｍａｎＨｅａｒｔＣｈｙｍａｓｅＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＣｕｌｔｕｒｅｄＮｅｏｎａｔａｌＲａｔＨ...

Select

血管紧张素Ⅱ2型受体基因缺失是否影响肾脏发育?

李文歌,陈香美,张颖,叶一舟,于力方,师锁柱

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(02): 230-233.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

血管紧张素Ⅱ２型受体基因缺失是否影响肾脏发育？李文歌陈香美张颖叶一舟于力方师锁柱（解放军总医院肾科，解放军肾病中心和重点实验室，北京１００８５３）ＤｏｅｓｔｈｅＧｅｎｅＤｅｌｅｔｉｏｎｏｆＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡＴｙｐｅ２ＲｅｃｅｐｔｏｒＡｆｅｃｔｔ...

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

过刊目录

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

过刊目录