李福胜,贡惠宇,赵炳文,余彩玲,侯斌,陈爱君,张智清,侯云德
中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(05): 479-484.
基因工程重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)主要用于癌症患者化疗后的粒细胞减少症.在正确克隆人G-CSFcDNA的基础上,重点对G-CSFcDNA的5′端进行了较为彻底的修饰,修饰后的基因插入pBV220载体组建成功pBV220/G-CSF/2-174高效表达载体.表达后SDS-PAGE分析其表达最高达50%以上.根据G-CSF表达形成包涵体这一特性,建立了一条简便、稳定,适用于大规模生产的分离纯化工艺流程.首先分离纯化包涵体,8mol/L尿素裂解包涵体,稀释复性蛋白,之后一步SP-SepharoseFF柱层析至均质.纯化的G-CSF比活性达3.4×108U/mg蛋白,每升表达菌液回收的G-CSF总活性达1.06×1011U.纯化产物的N-端氨基酸序列分析表明,对甲硫氨酸的去除彻底,用于人体时可能具有较小的免疫原性和毒性