中国生物化学与分子生物学报

Select

于芳,卢柏松,赵东,黄培堂

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 853-856.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为了从织锦芋螺（Ｃｏｎｕｓｔｅｘｔｉｌｅ）中尽可能多地分离出ο家族的毒素序列和研究其应用价值，在克隆了织锦芋螺α芋螺毒素的基础上进行了织锦芋螺ο家族芋螺毒素基因的分离工作．从织锦芋螺毒管中提取ｍＲＮＡ，通过ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄｓ，ｃＤＮＡ末端的快速扩增）－ＰＣＲ方法扩增获得ο家族芋螺毒素ｃＤＮＡ片段，并进行克隆和序列分析．从织锦芋螺毒液中获得了６种新的芋螺毒素序列，且毒素序列的成熟肽部分均符合Ｃ－Ｃ－ＣＣ－Ｃ－Ｃ的保守半胱氨酸框架．这些是新的ο家族芋螺毒素序列，新序列的阐明为进一步研究其生物活性和应用打下了基础．

Select

豌豆卷须肌动蛋白Ⅱ类异型体cDNA克隆的序列分析

胡松年,阎隆飞

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 857-860.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

分析１５个豌豆卷须肌动蛋白ｃＤＮＡ克隆的限制性内切酶图谱，发现在豌豆卷须中至少存在三类肌动蛋白异型体，分别命名为Ⅰ类（ＰＥＡｃ Ⅰ）、Ⅱ类（ＰＥＡｃ Ⅱ）和Ⅲ类（ＰＥＡｃ Ⅲ）异型体．三类异型体的克隆数目分别为１０、４和１个，表明三类异型体在豌豆卷须中的表达是不同的，很可能具有组织或发育阶段的特异性．对Ⅱ类异型体的三个ｃＤＮＡ克隆ＰＥＡｃ３、ＰＥＡｃ９和ＰＥＡｃ１１进行了全序列测定，所测定的序列已被ＧｅｎＢａｎｋ数据库所接受．测序结果表明，ＰＥＡｃ３、ＰＥＡｃ９和ＰＥＡｃ１１的序列长度分别为１５５０、１６８０和１０９１个核苷酸，其中编码区长１１３４个核苷酸，编码的氨基酸长度为３７７（ＰＥＡｃ１１缺少编码氨基端前９６个氨基酸的核苷酸序列）．三个克隆的核苷酸序列完全相同，差别仅在于３′非翻译区的长度不同，即ｐｏｌｙ（Ａ）的加入位点不同．这说明它们可能是由同一基因转录而来，但转录后的加工过程不同．豌豆卷须中肌动蛋白基因ｐｏｌｙ（Ａ）加入位点的使用，可能与组织或发育的特异性表达有关．此外，豌豆卷须肌动蛋白三类异型体之间的核苷酸序列同源性为８０％，氨基酸序列同源性为９４％．

Select

人白细胞介素11的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

杜秋江,马雁冰,刘红岩,陈尔佳,周丽,姬秋彦,李智华,徐维明,孙茂盛,戴长柏

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 861-865.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

从人胚肺二倍体细胞ＫＭＢ１７抽提总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增到人ＩＬ－１１ｃＤＮＡ，克隆于ｐＢＳ－ＳＫ，以双脱氧链终止法进行序列分析；扩增去除Ｎ端第一个氨基酸的ＩＬ－１１ｃＤＮＡ，克隆于硫氧还蛋白融合表达载体ｐＴｈｉｏＨｉｓＡ，经过对表达质粒的改造，使融合表达的ＩＬ－１１能被肠激酶精确切割；表达产物经金属鏊合亲合层析后经肠激酶切，再通过阳离子交换层析纯化后，用其依赖细胞株７ＴＤ１检测活性．结果表明，克隆的ＩＬ－１１ｃＤＮＡ序列与文献报道一致；表达的融合蛋白占菌体总蛋白的３０％左右，以可溶性形式存在；纯化产物具有维持依赖细胞株生长的能力．由此，获得了较高纯度的具有生物学活性的ｒｈＩＬ－１１，为中试生产奠定了基础．

Select

人GRY-RBP基因的表达及其RNA结合活性的初步鉴定

杜光伟,陈建和,周严,汪俊华,黄晓玮,袁建刚,强伯勤

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 866-870.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用．人ＧＲＹ－ＲＢＰ是我们实验室最近克隆的一个新的全长ｃＤＮＡ，编码一个ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白．ＧＲＹ－ＲＢＰ的全编码区用ＰＣＲ扩增后，克隆到ｐＥＴ３０ａ＋表达载体中，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达，表达的ＧＲＹ－ＲＢＰ重组蛋白占细菌总蛋白的２１％．利用融合在ＧＲＹ－ＲＢＰＮ端的Ｈｉｓ．Ｔａｇ，采取亲和层析的方法纯化了表达的重组蛋白．为了检测ＧＲＹ－ＲＢＰ的ＲＮＡ结合活性及其所结合的ＲＮＡ性质，将表达的蛋白与ｐｏｌｙ（Ａ）－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ结合，发现ＧＲＹ－ＲＢＰ能与ｐｏｌｙＡ（Ａ）结合，结合活性能被可溶性的ｐｏｌｙ（Ａ）、ｐｏｌｙ（Ｃ）减弱．改变ＮａＣｌ浓度和加入不同浓度的酵母ｔＲＮＡ竞争物后，ｐｏｌｙ（Ａ）结合活性不变．

Select

人类连接蛋白基因Cx26的上游调控部位

彭白露,周鸣,曾朝阳,李桂源

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 871-875.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ｋｂ片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行了ＣＡＴ报告基因分析．结果表明，此１．６ｋｂ片段其启动子功能部位位于５′端２００ｂｐ范围内．其中含有－ＴＧＴ盒（位于１８２～１８７ｂｐ），一个ＴＴＡＡＡＡ盒位于１５８～１６３ｂｐ，这是人类Ｃｘ２６基因的又一启动区，这些发现无疑地对了解和阐明Ｃｘ２６基因在乳腺发育过程中及其病理生理作用的复杂调控具有特别重要的意义．

Select

用差异显示法从人胎脑基因文库分离一个编码序列

杨岐生,林卿,李奕,谢毅

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 876-880.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

人１８周、２２周胎儿脑、肝肾组织总ｍＲＮＡ用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ显示出差异的条带，回收胎脑和肝肾特异性表达的４８７条电泳条带．其中某些条带用３种组织的ｃＤＮＡ探针作点杂交，筛选只对胎儿脑总呈阳性的ＤＮＡ片段．以其中某一条带ＤＮＡ为探针，从胎儿脑ｃＤＮＡ文库筛选阳性克隆，得到ＧＣ５８．经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＤＮＡ测序，表明它是人脑表达的序列，与数据库中ＫＩＡＡ０５１５有同源性，并编码一个有２７４个氨基酸的蛋白质，该蛋白质序列尚未见报道．探讨了ＤＤＲＴ－ＰＣＲ的条件和假阳性问题．

Select

HCV/HBV复合抗原基因的克隆、表达及免疫应答研究

黄建生,许谆,SaidA.SALEH,解咏梅,张明徽,任大明

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 881-884.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为探讨ＨＣＶ／ＨＢＶ复合疫苗的可行性，将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ与ＨＢｓＡｇ基因连接成ＰＣＸＳ基因，与β－半乳糖苷酶（ＧＺ）基因融合后在大肠杆菌及减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得表达．目的蛋白ＧＺ－ＰＣＸＳ可被抗－ＨＢｓ及抗－ＨＣＶ抗体所特异识别．ＧＺ－ＰＣＸＳ抗原皮下注射免疫ＩＣＲ小鼠后，诱发了较高水平的抗－ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲ／ＰＣＸＳ）口服免疫小鼠后，诱发了高水平的ＣＤ８＋Ｔ细胞增殖反应及抗ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．所有免疫小鼠均未见明显的毒副作用．该研究揭示，ＨＣＶ／ＨＢＶ复合抗原可诱发特异性体液免疫及细胞免疫应答，而活菌苗口服可能是理想的免疫途径，为ＨＣＶ／ＨＢＶ双价疫苗研究提供了一定的理论及实验依据．

Select

微紫青霉CBHⅠ基因(Cbh1)在体外无细胞系统中的表达

王景林,高培基

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 885-887.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

以含Ｃｂｈ１的ｐＵＣ１８－１８１ＤＮＡ为模板，经ＰＣＲ扩增得到带有Ｔ７启动子的Ｃｂｈ１片段，随后在缺乏糖基化的兔网织红细胞裂解液中得到成功表达，表达量为２１．７ μｇ／ｍｌ．得到的ＣＢＨ Ⅰ虽未经糖基化修饰，却可水解对硝基酚－β－Ｄ－纤维二糖苷（ｐＮＰＣ），对ｐＮＰＣ的ＫＭ和Ｖｍａｘ分别为０．８２ｍｍｏｌ／Ｌ和０．０６７ μｍｏｌ·ｍｉｎ－１·μｇ－１，但对羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）无酶活力．这表明，糖基化修饰可能不影响胞外纤维素酶的活力．

Select

金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达

张晓钰,李伟,张竞,何笃修,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 888-892.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋和Ｈｇ２＋．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高外源基因在烟草中的表达量，首先用ＰＣＲ的方法设计引物，在基因翻译起始密码子ＡＴＧ附近加入植物偏爱的碱基组合ＡＡＣＡＡＴＧ．另外，将该突变体基因插入具有双３５Ｓ（ＣａＭＶ３５Ｓ）强启动子的植物双元表达载体ｐＧＰＴＶｄ３５Ｓ－ＢＡＲ中，获得了带有αα突变体的植物双元表达载体．通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草ＮＣ８９，获得了抗除草剂的转基因植株．经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和蛋白Ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测，证明了αα突变体在烟草中的嵌合与表达．抗重金属实验证明转基因烟草可以在Ｃｄ４００（４００ μｍｏｌ／Ｌ）中生长．

Select

人胰岛素样生长因子Ⅱ在甲醇营养型酵母P.pastoris中的表达、分泌和性质研究

李旌军,黄秉仁

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 893-898.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为获得ＩＧＦ－Ⅱ的高效表达，构建了其多拷贝、分泌型表达载体：含有５个串联的ＩＧＦ－Ⅱ表达单元；由受甲醇诱导的醇氧化酶启动子控制表达；利用啤酒酵母α因子的前导肽引导分泌．线形化表达载体转化Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ蛋白酶缺陷型菌株后，筛选到有ＩＧＦ－Ⅱ表达和分泌的阳性转化子；进一步优化表达、培养条件后，ＩＧＦ－Ⅱ在高密度发酵上清中的产量可达６０ｍｇ／Ｌ．对Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ产生的ｒｈＩＧＦ－Ⅱ的性质分析表明，其具有正确的分子量，Ｎ端和较好的生物活性．

Select

人绒毛膜促性腺激素α、β亚基cDNA的筛选与序列分析

苟德明,李文鑫,黄健,夏总平,李治,蒋达和

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 899-902.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

构建３周龄人胚ｃＤＮＡ文库，用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ标记的一链ｃＤＮＡ为探针从中筛选高度表达的克隆子并测序，得到人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）的α和β亚基ｃＤＮＡ克隆，序列同源性分析表明：α亚基编码区的ｃＤＮＡ序列与已报道的完全同源，β亚基编码区第３０位碱基Ｇ→Ａ，该碱基的改变不引起氨基酸的改变．另外，在α和β亚基非编码区发现有多处碱基的改变．

Select

大肠杆菌肠毒素的基因融合及其免疫原性的研究

徐兵,张兆山,李淑琴,舒东,俞守义,黄翠芬

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 903-906.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

应用重组基因工程技术，将热敏肠毒素Ｂ亚基（ＬＴ－Ｂ）基因与含有部分前体的耐热肠毒素（ｐｒｏ－ＳＴ）基因融合在一起，构建了表达ＬＴ－Ｂ／ｐｒｏ－ＳＴ融合蛋白的重组质粒．该融合蛋白不仅保持结合神经节苷脂（ＧＭ１）的能力，而且具有热敏肠毒素和耐热肠毒素的抗原性．乳鼠实验证明，融合蛋白虽然含有野生耐热肠毒素，但不具耐热肠毒素的生物毒性．腹腔免疫和鼻饲免疫均能激发产生抗ＥＴＥＣ两种肠毒素的抗体．

Select

人肝金属硫蛋白突变体β基因通过同源重组在蓝藻中的克隆与表达

周杰,施定基,武宝,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 907-911.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

将人肝金属硫蛋白（ＭＴ）突变体β基因插入到中间载体ｐＲＬ－４３９上的强启动子ＰｐｓｂＡ下游，利用载体ｐＲＬ－β上的ＰｐｓｂＡ和β基因与ｐｈａｓｍｉｄｐＴＺ１８－８上整合平台ＰｓｂＢ，构建整合表达载体ｐＴＺ－β．整合平台ＰｓｂＢ与集胞藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．ＰＣＣ６８０３）染色体ＤＮＡ上ｐｓｂＢ基因下游片段为同源序列．为了发生单交换同源重组，将外源基因β插入到整合平台ＰｓｂＢ下游的克隆位点．利用自然转化方法将表达载体ｐＴＺ－β整合到Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｔｓｐ．ＰＣＣ６８０３的染色体上．经氨苄青霉素筛选得到遗传性状稳定的转基因蓝藻．Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ证明β基因已整合到Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．ＰＣＣ６８０３的染色体上；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ表明β基因已在蓝藻中表达．ＥＬＩＳＡ测定在Ｚｎ２＋浓度为１５０ μｍｌ／Ｌ时表达量最高，为５９０ μｇ／ｇ鲜藻；原子吸收表明转β基因的藻对Ｚｎ２＋的富集能力约为野生型的２倍．

Select

纳豆激酶基因的克隆与表达

张淑梅,张云湖,赵晓祥,李晶,金红星,田洁萍

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 912-915.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

利用ＰＣＲ方法从分泌纳豆激酶的枯草杆菌基因组ＤＮＡ中扩增得到了纳豆激酶基因，并测定其核苷酸序列．利用基因重组技术构建了纳豆激酶基因的表达载体，并在大肠杆菌中进行了表达．ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳表明，表达蛋白占菌体蛋白的１５．２％，琼脂糖－纤维蛋白平板法测出表达产物具有溶解血栓活性．

Select

在肽库中筛选抗磷脂抗体的小肽抑制剂

王丽萍,范洪宽,杨明,刘钧松,李惟

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 916-919.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

β２糖蛋白Ⅰ（ｂｅｔａ－２－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ⅰ，β２ＧＰＩ）是一分子量为５０ｋＤ的糖蛋白．从抗磷脂抗体综合症（Ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｓｙｎｄｒｏｍ，ＡＰＳ）患者身上获得的抗体可直接与β２ＧＰＩ作用．以β２ＧＰＩ为目标分子，在噬菌体十五肽库中筛选抗β２糖蛋白Ⅰ抗体的小肽抑制剂．通过四轮亲和性筛选，噬菌体的回收率从１．２６×１０－４％增加到３．１９×１０－２％．随机挑取噬菌体克隆测定其与β２ＧＰＩ的结合活性及其对β２ＧＰＩ与自身抗体结合的抑制活性，其中部分噬菌体克隆表现出４０％的抑制活性．经ＤＮＡ序列测定，得到一组相关序列．该结果为研究β２ＧＰＩ的抗原表位奠定了良好的基础．

Select

苦瓜籽核糖体失活蛋白的理化性质及生物活性

孟延发,杜毅峰,张雪梅

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 920-923.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

采用硫酸铵分级分离，假配基亲和层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛层析等方法，从苦瓜籽中获得核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ和ＰＡＳ方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带．根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析结果计算其相对分子质量为３．０×１０４，经ＩＥＦ－ＰＡＧＥ结果计算其ｐＩ为８．９～９．０．对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显，其ＩＣ５０为５．３×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ左右．体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞、Ｖｅｒｏ、ＳＰ２／０、３Ｔ３、Ｋｂ、Ｎａｖａｎａ等肿瘤细胞株均表现有不同程度的抑制作用．而对完整细胞人胚肺二倍体细胞却毒性极小．因此，上述实验结果为该ＲＩＰ的进一步深入研究和有可能开发成免疫毒素的高效弹头药物提供了一定的工作基础．

Select

天花粉蛋白的定点聚乙二醇修饰

何贤辉,聂慧玲,邵鹏柱,柯一保,谭兆祥

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 924-927.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

用一种定点修饰天花粉蛋白（ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ，ＴＣＳ）的方法，将聚乙二醇（ＰＥＧ）偶联到预先选定的位点．利用ｎＴＣＳ无半胱氨酸（Ｃｙｓ）残基这一特点，通过定点突变将一个Ｃｙｓ残基引入ＴＣＳ以取代第７位的丝氨酸（Ｓｅｒ）残基．然后，与巯基反应的ＰＥＧ－ｍａｌｅｉｍｉｄｅ即可偶联到新引入的Ｃｙｓ残基上．经纯化得到均一的ＰＥＧ－ＴＣＳ复合物，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示一条区带，表观分子量为３８ｋＤ．复合物的体外致核糖体失活活性降低了６倍，但其体内引产活性与ｎＴＣＳ相同．定点ＰＥＧ修饰方法为改造ＴＣＳ提供了新途径．

Select

兔肝金属硫蛋白结合铅离子的圆二色性光谱研究

季清洲,王立波,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 928-932.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到金属硫蛋白两种亚型：ＺｎＭＴ－Ⅰ和ＺｎＭＴ－Ⅱ．在酸性条件下脱金属，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱层析得到脱金属硫蛋白（ａｐｏＭＴｓ）．用圆二色性（ＣＤ）光谱法研究，发现两种亚型ａｐｏＭＴｓ与Ｐｂ２＋的结合依赖于Ｐｂ２＋的加入比例及ｐＨ值．ａｐｏＭＴ－Ⅰ在ｐＨ３～５之间，ａｐｏＭＴ－Ⅱ在ｐＨ４～６之间与Ｐｂ２＋结合形成特征簇合物Ｐｂ７ＭＴｓ，其ＣＤ谱图特征峰位于３１６ｎｍ（－），２７０ｎｍ（＋），２４５ｎｍ（＋）及２２５ｎｍ（－），提示解铅中毒的最佳条件应控制在弱酸性环境．不同亚型ａｐｏＭＴｓ与Ｐｂ２＋的结合方式各不相同：Ｐｂ２＋与ａｐｏＭＴ－Ⅰ的结合采取平均分配的方式，而与ａｐｏＭＴ－Ⅱ则为选择性结合方式，表明这两种亚型在解铅毒功能上存在差异．

Select

LAK细胞中一种自由基清除剂——SLP的分离纯化与抗体制备

潘英,朱敏生,沈月,许祥裕,赵建华,钱晖,徐佳

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 933-936.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

ＳＯＤ样蛋白（ＳＯＤ－ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＬＰ）是从ＬＡＫ细胞中发现的一种具有自由基清除功能的蛋白．为阐明ＳＬＰ的生化特性和确定其蛋白序列或基因序列，采用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ层析从ＬＡＫ细胞中得到部分纯化的ＳＬＰ，并采用ＩＥＦ等电聚焦电泳，活性染色，将含有活性蛋白的胶条直接免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，制备抗血清并筛选得到多株有中和ＳＬＰ清除自由基活性的单克隆抗体．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明ＳＬＰ分子量约为６７ｋＤ，并测得ｐＩ约为４．２．

Select

《中国生物化学与分子生物学报》第四届编委会成立

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 936-936.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

Gi和Go的同时纯化及其性质研究

杨胜于,黄有国

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 937-942.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、ＵｌｔｒｏｇｅｌＡｃＡ３４、Ｈｅｐｔｙｌａｍｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＢｉｏＳｃａｌｅＱ２等四步层析从牛脑皮层膜中同时纯化出抑制型Ｇ蛋白（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙＧｐｒｏｔｅｉｎ，Ｇｉ）和Ｏ型Ｇ蛋白（ｏｔｈｅｒＧｐｒｏ－ｔｅｉｎ，Ｇｏ）．对Ｇｏ的选择性激活使Ｇｉ和Ｇｏ的分离大为简化，并使二者的大量制备成为可能．纯化的Ｇ蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染显示单一蛋白带，其结合［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ的活性分别提高６８倍和１２４倍．用圆二色光谱法（ＣＤ）测量了纯化的Ｇ蛋白的二级结构．

Select

天花粉蛋白Glu160在N-糖苷酶活性中的作用

李建辉,吴伸,姚宏兵,邵鹏柱,董贻诚

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 943-947.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

用浸泡法得到了（Ｅ１６０Ａ）天花粉蛋白（ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ，ＴＣＳ），（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ与Ａｄｅ和（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ与ＦＭＰ复合物的晶体．在ＭａｒＲｅｓｅａｒｃｈ面探测器系统上分别收集了０．２０ｎｍ，０．１９ｎｍ和０．２０５ｎｍ分辨率的Ｘ射线衍射数据，数据处理用ＭａｒＳｃａｌｅ程序系统完成．用同晶差值Ｆｏｕｒｉｅｒ法解析了（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ－Ａｄｅ，（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ－Ａｄｅ和（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ－ＦＭＰ的晶体结构，结构修正利用Ｘ－ＰＬＯＲ程序，修正结果，晶体学Ｒ因子分别为０．１６６，０．１７６，０．１７９．键长和键角的ＲＭＳ偏差分别为０．００１０ｎｍ和２．５０３°，０．００１３ｎｍ和２．６６５°，０．００１２ｎｍ和２．６７６°．在这三个结构中均未见到Ｇｌｕ１８９侧链方向的改变．Ａｄｅ或ＦＭＰ仍结合在Ｎ－糖苷酶活性口袋之中，它夹在Ｔｙｒ７０和Ｔｙｒ１１１两个侧链环之间，与Ｔｙｒ７０环近乎平行．这一结果表明：ＴＣＳ中的Ｇｌｕ１６０分别突变成Ａｌａ和Ａｓｐ，仍能与ＡＭＰ发生Ｎ－糖苷酶反应，但是活性降低了一些．可见Ｇｌｕ１６０对ＴＣＳ与ＡＭＰ的作用是重要的，但不是必要的．

Select

人EEN蛋白的结构预测和功能分析

刘孟珉,张绍文,贺福初,陈竺

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 948-952.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

采用基于神经网络的算法预测了我们自行克隆的新的白血病相关蛋白ＥＥＮ（ｅｘｔｒａｅｌｅｖｅｎｎｉｎｅｔｅｅｎ，ＥＥＮ）全长分子的二级结构，结果表明：ＥＥＮ蛋白可能有三个结构域，Ｎ端由三段α螺旋和短β折叠组成，中间为四段α螺旋组成的四螺旋结构，Ｃ端为ＳＨ３结构域，类似于在受体酪氨酸激酶信号传导途径中起重要作用的ＳＥＭ－５／ＧＲＢ２Ｃ端ＳＨ３结构域；利用同源蛋白结构模拟的方法，模拟了ＥＥＮＳＨ３结构域的三维结构，结果表明：ＥＥＮＳＨ３结构域与ＳＥＭ－５／ＧＲＢ２ＳＨ３结构域具有相近的结构，构成脯氨酸结合区的氨基酸非常保守．上述结果提示：ＥＥＮ蛋白可能为新的信号蛋白，可能涉及新的信号传导途径或新的信号传导旁路，ＳＨ３结构域是其功能区域．

Select

人类基因逾14万,美英联合公报及NIH保护自由享用权

贾弘赟

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 952-952.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

免疫亲和层析法纯化苦瓜几丁酶

裴炎,杨星勇,卢晓风,夏玉先,李先碧

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 953-956.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

用扁豆几丁酶免疫家兔，获得抗扁豆几丁酶的抗体，将此抗体与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，制备免疫亲和吸附剂，用以纯化苦瓜几丁酶．苦瓜叶片的粗提液经过免疫亲和吸附柱后，可获得电泳纯的几丁酶，其分子量为３５ｋＤ，与用几丁质凝胶为亲和吸附剂的纯化结果一致．表明利用植物几丁酶在结构上的保守性，用免疫亲和法可纯化不同植物的同类几丁酶．与几丁质凝胶亲和柱相比，免疫亲和法纯化植物几丁酶具有快速、亲和柱可重复使用等的优点．利用免疫亲和层析获得的纯化样品，研究了苦瓜几丁酶对真菌的抑制试验，研究结果表明，苦瓜几丁酶能分解棉花枯萎病菌的菌丝体细胞壁制备物，并对其孢子芽管的伸长有一定抑制作用．

Select

噬菌体RB69 DNA聚合酶的表达、分离纯化和其聚合反应的稳态动力学研究

杨广微,刘健,胡美浩

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 957-962.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

噬菌体ＲＢ６９外切酶活性缺失的ＤＮＡ聚合酶突变体（Ｄ２２２Ａ／Ｄ３２７Ａ）在大肠杆菌细胞中表达，表达量达细胞蛋白总量的６９％．表达后经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ，Ｓｏｕｒｃｅ３０Ｑ和ＨＴＰ三步分离纯化，纯度可达９９％以上．随后测定了该酶利用５种ｄＮＴＰ为底物进行聚合反应的酶促动力学常数（Ｋｍ和Ｋｃａｔ），结果表明该酶利用ｄＵＴＰ的能力与利用ｄＴＴＰ的能力相近，Ｋｍ（ｄＴＴＰ）和Ｋｍ（ｄＵＴＰ）均较高于其它３种脱氧核苷酸的Ｋｍ（ｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ），推测其Ｋｍ值的差异主要来源于Ｔ／Ｕ碱基本身，而并非全部由ＧＣ碱基配对与ＡＴ碱基配对之间的氢键作用力的强弱差别所决定．

Select

大连国际糖复合物、脂类、信息转导讨论会通知

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 962-962.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

噬菌体RB69 DNA聚合酶以不正确的核苷酸为底物的聚合反应的稳态动力学研究

杨广微,刘健,胡美浩

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 963-967.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

测定了ＲＢ６９ＤＮＡ聚合酶以不正确的核苷酸（ｒＮＴＰ、ｄｄＮＴＰ以及碱基不配对的ｄＮＴＰ）为底物进行聚合反应的稳态动力学常数，并与Ｋｌｅｎｏｗ酶进行了比较．结果表明，ＲＢ６９ＤＮＡ聚合酶在以不正确的核苷酸为底物进行聚合反应时，其Ｋｍ值与正确底物参入时相比有大幅度提高，而ｋｃａｔ保持不变或下降幅度较小．而Ｋｌｅｎｏｗ酶在利用不正确的核苷酸为底物时，与正确底物参入时相比，其ｋｃａｔ大幅度下降，而Ｋｍ（或ＫＤ）基本保持不变或上升较小幅度．两种酶不同的动力学特点反映出它们不同的底物选择机制．

Select

类产碱假单胞菌谷氨酸脱氢酶的提纯、鉴定及某些特性的初步研究

丁诗华,杨志荣,唐亚雄,景仁志,刘世贵

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 968-973.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

从类产碱假单胞菌纯化出电泳纯的谷氨酸脱氢酶，用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为２９０ｋＤ，亚基分子量为４７ｋＤ，提示该酶为六聚体．该酶对ＮＡＤＰ（Ｈ）和底物均具有高度专一性，对谷氨酸、α－酮戊二酸及ＮＡＤＰ＋的Ｋｍ值分别为：２８ｍｍｏｌ／Ｌ、１．２ｍｍｏｌ／Ｌ及０．０６３ｍｍｏｌ／Ｌ．用Ｈｉｌｌ作图法求得酶对ＮＨ＋４和ＮＡＤＰＨ的［Ｓ］０．５分别为２４ｍｍｏｌ／Ｌ和０．０３７ｍｍｏｌ／Ｌ．最适反应温度为５０℃，催化氨化反应和脱氨反应的最适ｐＨ分别为８．０和８．８，在热稳定性方面不及嗜热细菌的谷氨酸脱氢酶稳定．提纯的谷氨酸脱氢酶在低温（４℃）条件下，可在Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中贮存半年以上，活力无明显下降，冷冻则可导致纯酶液迅速失活．氮源对菌体谷氨酸脱氢酶水平有显著影响．

Select

同尾酶技术在构建疟疾多价重组DNA疫苗中的应用

林澄涛,姜燕芳,阴彬,董敏,何湘云,王恒

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 974-977.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

同尾酶是一类识别不同核苷酸序列但能酶切产生相同粘性末端的限制性内切酶，依靠同尾酶的这种特性，可以根据需要将不同的ＤＮＡ片段进行灵活组合，获得各种排列顺序的多价表位重组疫苗．将这种方法用于疟疾多价重组ＤＮＡ疫苗的研制；ＢＡＬＢ／ｃ小鼠免疫实验对所得重组疫苗ＰＵ２８６的免疫原性进行了测定．

Select

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D_1基因表达的影响

江渝,刘秉文,覃扬,孙芝琳

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 978-982.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

动脉平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌ，ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＳ）斑块中的主要细胞，它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要．利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ，观察了天然高密度脂蛋白（ｎａｔｉｖｅｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｎ－ＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄＨＤＬ，ＯＸ－ＨＤＬ）对培养人主动脉ＳＭＣｃｙｃｌｉｎＤ１（细胞周期蛋白Ｄ１）基因转录表达的影响．结果表明：（１）Ｎ－ＨＤＬ对ＳＭＣｃｙｃｌｉｎＤ１基因表达无影响（Ｐ＞０．０５）；（２）ＯＸ－ＨＤＬ使ＳＭＣｃｙｃｌｉｎＤ１基因表达显著增强（Ｐ＜０．０１），其表达量随时间（２、１２、２４ｈ）延长而增加．上述结果表明，ＯＸ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与其刺激ＳＭＣｃｙｃｌｉｎＤ１基因表达增加有关．

Select

胸苷激酶基因治疗胃癌的体外实验

王新娟,蒋罗化,张蕾,蔺新力

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 983-986.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）导入恶性肿瘤细胞，随后可应用药物丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）选择性杀死肿瘤细胞．构建了含胸苷激酶与潮霉素磷酸转移酶（ｈｐｈ）融和基因（ＨｙｔＫ）的真核表达载体ＬＸｐｓｐ－ＨｙｔＫ．以脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）为介导，将这种质粒与仅含潮霉素Ｂ基因的质粒ＬＸＳＨ分别转染胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３，用６０Ｕ／ｍｌ潮霉素Ｂ进行筛选，得到了可稳定传代的阳性克隆，分别命名为ＢＧＣ－ＨｙｔＫ和ＢＧＣ－Ｈｙ．三种细胞的生长曲线无明显差别．用不同浓度的ＧＣＶ分别作用于ＢＧＣ－ＨｙｔＫ，ＢＧＣ－Ｈｙ及ＢＧＣ－８２３，０．０２～２００ μｇ／ｍｌ的ＧＣＶ对ＢＧＣ－ＨｙｔＫ细胞有明显的杀伤作用（ＩＣ５０＝０．０２ μｇ／ｍｌ），而对另外两种细胞几乎无毒性作用（ＩＣ５０＞２００μｇ／ｍｌ）．２０ μｇ／ｍｌＧＣＶ作用９６ｈ后，仅存在２０％的ＢＧＣ－ＨｙｔＫ就可使周围的大部分ＨＳＶ－ｔｋ－的肿瘤细胞死亡，说明存在较显著的“旁观者效应”

Select

p38蛋白激酶在热损伤诱导单核细胞Raw264.7凋亡中的作用

张璐,张琳,姜勇,赵克森

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 987-991.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为探讨ｐ３８蛋白激酶在热损伤诱导单核细胞株Ｒａｗ２６４．７凋亡中的调控作用．应用流式细胞检测术、透射电镜技术、ＤＮＡ凝胶电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、激酶活性测定检测ｐ３８蛋白激酶在热损伤诱导细胞凋亡中的作用．结果显示，热损伤后５ｍｉｎ，ｐ３８即被激活，３０ｍｉｎ时达到最高水平，然后逐渐下降，２ｈ达基底水平；热损伤后３ｈ细胞凋亡率开始明显增高，ｐ３８蛋白激酶活性增高是细胞凋亡发生之前的事件；进一步观察了ｐ３８特异性抑制剂ＦＨＰＩ对细胞凋亡的影响，发现ＦＨＰＩ可以抑制热损伤诱导的细胞凋亡．上述结果提示，ｐ３８参与介导热损伤诱导的Ｒａｗ２６４．７细胞凋亡．

Select

NNK诱发BEP2D细胞产生活性氧及其对DNA的损伤

朱茂祥,杨陟华,龚诒芬,徐勇

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 992-996.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

通过测定细胞内和细胞上清中活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）水平，以及ＤＮＡ加合物——８－羟基脱氧鸟嘌呤核苷（８－ｈｙｄｒｏｘｙｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ，ＯＨ８ｄＧ）含量，对烟草特异亚硝胺类化合物４－甲基亚硝胺－１（３－吡啶基）－１－丁酮（４－（ｍｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｏ）－１－（３－ｐｙｒｉｄｙｌ）－１－ｂｕｔａｎｏｎｅ，ＮＮＫ）诱发人乳头状病毒永生化的人支气管上皮细胞（ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ－ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄｈｕｍａｎｂｒｏｎｃｈｉａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ，ＢＥＰ２Ｄ）产生的ＲＯＳ及其对ＤＮＡ的氧化损伤进行研究，并观察纳米硒的保护作用．结果表明，ＢＥＰ２Ｄ细胞经不同浓度的ＮＮＫ作用后，细胞内和细胞上清中ＲＯＳ以及ＯＨ８ｄＧ含量均显著增加，并有较好的剂量效应关系．１ μｍｏｌ·Ｌ－１纳米硒（ｎａｎｏｓｅｌｅｎｕｉｍ，ＮＳ）能明显抑制ＮＮＫ诱发ＢＥＰ２Ｄ细胞产生的ＲＯＳ及ＯＨ８ｄＧ水平．揭示ＮＮＫ能造成细胞的氧化损伤，而ＮＳ对ＮＮＫ所致细胞的氧化损伤有保护作用．

Select

《中国生物化学与分子生物学报》1998年期刊评价指标

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 996-996.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

血管再狭窄发生过程中MMP-2基因表达与胶原转换的动态变化

周秀霞,温进坤,韩梅

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 997-1001.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

建立主动脉内皮剥脱后血管再狭窄大鼠模型，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析、含明胶ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、羟脯氨酸含量测定及流式细胞术动态观察血管再狭窄发生过程中ＭＭＰ－２基因表达与胶原转换及血管细胞增殖之间的关系．实验结果表明，血管内皮剥脱后，ＭＭＰ－２基因表达被显著诱导，ＭＭＰ－２活性及胶原转换明显增高，在第７ｄ，ＭＭＰ－２表达活性及胶原合成与降解均达到峰值；第２１ｄ，ＭＭＰ－２表达恢复正常，胶原合成和降解仍维持在较高水平．流式细胞分析结果显示，血管内皮剥脱后进入增殖状态及发生凋亡的细胞显著增加，增殖细胞所占比例高于凋亡细胞，且两者均随内皮损伤后的时间延长而增加．

Select

吴显荣主编《基础生物化学》第2版出版

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 1001-1001.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

Mg~(2+)、Co~(2+)、Mn~(2+)和Ca~(2+)对葡萄糖异构酶活性的影响

陶丽梅,过莹立,李宁,王淳,滕脉坤,王玉珍

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 1002-1005.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

豆薯种籽中一种抗真菌蛋白PaAFP的分离纯化和部分特性研究

郝冰,叶晓明,林玉娟,陈明晃,蔡建华,宋立军

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 1006-1008.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

[A_(15)Asn,A_(17)Pro,A_(21)Ala]-胰岛素的体内外生物活性

汪成富,姜智,阮中中,揭新凤

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 1009-1011.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

四季豆种子中两种蛋白质的分离纯化及其性质初步研究

宋立军,林玉娟,蔡建华

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 1012-1014.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Select

中国生物化学与分子生物学报 1999年第15卷第1～6期作者索引

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(06): 1015-1022.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

过刊目录

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

过刊目录