中国生物化学与分子生物学报

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李鸿钧,马雁冰,戴长柏,孙茂盛

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 139-142.

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Neurturin (NTN)是新近发现的一种神经营养因子 ,是 GDNF家族的成员之一 .将 5′端引入了羟胺切割位点的 h NTN基因克隆到硫氧还蛋白融合表达载体 p Thio His A,在宿主菌 BL2 1中获得了稳定、高效表达 ,表达产物以包涵体形式存在 .在变性条件下经羟胺切割、柱层析纯化后复性 ,获得纯度达 90 %以上的 rh NTN.经鸡胚背根神经节 (DRG)培养法测定具有生物学活性 .

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果蝇程序化死亡基因5(PDCD5)同源cDNA的克隆和序列分析

王应,张颖妹,杨田,周周,狄春辉,马大龙

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 143-147.

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为了解人类白血病细胞凋亡相关新基因 TFAR1 9(PDCD5,programmed cell death5)在不同种属间的序列同源性 ,利用 EST(expression sequence tag)拼接、RT- PCR、DNA序列测定技术及计算机分析技术 ,首次成功地进行了果蝇 PDCD5同源 c DNA编码区基因克隆和序列分析 .发现果蝇与小鼠及果蝇与人 PDCD5在核苷酸水平上分别有 57.5%和 57.1 %的同源性 ,在氨基酸水平上分别有 46.8%和 46.4%的同源性 .功能区分析发现 ,果蝇 PDCD5c DNA编码 1 33个氨基酸 ,计算机预测可能是一种核蛋白 ,含 5个可能的酪蛋白激酶 (casein kinase )磷酸化位点 ,2个可能的 PKC磷酸化位点 ,与人 PDCD5的功能区类似 .因而果蝇 PDCD5是与人 PDCD5同源的新基因 ,可能都与细胞程序化死亡相关 .

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我国登革 4型病毒 B5株基因组全序列的测定及分析(英文)

王鹏程,秦鄂德,于曼,耿丽卿,赵卫,胡志君,苑锡同,杨佩英

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 148-154.

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对我国登革 4型病毒 B5株 (D4- B5)基因组进行全序列测定及分析 ,为研究病毒基因组结构与功能的关系及研制新型登革疫苗奠定基础 .根据登革 4型病毒 81 4669株的序列设计特异引物 ,通过 RT- PCR扩增出 D4- B5株不同长度的片段 ,分别克隆到 p GEM- T载体 ,将挑取的阳性克隆进行 PCR、酶切鉴定及序列测定 .结果显示 ,D4- B5株的基因组全长 1 0 665nt,5′和 3′非编码区分别为 1 0 1 nt和 40 3nt,中间一个长 1 0 1 61 nt的开放读码框架 ,编码 3387个氨基酸 .与 D4- 81 4669株比较 ,两者核苷酸序列同源性为 93.0 8% ,氨基酸序列同源性为 96.58% .D4- B5株的基因组全序列与 D4- 81 4669株类似 ,但也有较大差异 .同源进化分析表明 ,D4- B5株的基因型为型 ,与登革 4型病毒菲律宾分离株亲缘关系较近 .这是首次报道的我国登革 4型病毒分离株基因组全序列 ,对研究病毒基因组结构与功能的关系 ,探讨我国毒株的地理来源及研制适合我国人群的新型登革疫苗具有一定的意义 .

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S-腺苷酰L-甲硫氨酸 (SAM)对 HL-60细胞 DNA甲基化酶活力和甲基化水平的影响(英文)

白坚石,马晴,王萍,何忠效

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 155-159.

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以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 (SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下造成 1 6%的 HL- 60细胞分化 .HPLC检测结果表明 ,细胞基因组 DNA甲基化水平升高 .通过3H甲基同位素参入法研究细胞 DNA甲基化酶活力 ,则发现在细胞分化过程中酶活力未见升高 .说明细胞基因组甲基化水平升高并不是胞内 DNA甲基化酶催化能力改变的结果 ,而是由于 SAM进入细胞提供过量甲基造成的 .

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人组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1在Pichia pastoris酵母中重组表达研究

李克勤,李春海,颜春洪

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 160-164.

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为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)的分子作用机制 ,探讨了在 Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂 - 1 (TIMP- 1 )的技术路线 ,并对产物性质进行初步研究 .通过 PCR从含有 TIMP- 1基因的 p BS质粒获得了该基因的全长序列 ,构建了 p PIC9/T1表达载体 ,电击法转化酵母 ,通过表型筛选和 PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入 Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS- PAGE表明表达量高达 40 mg/L培养上清 .用免疫印迹法确定了产物的正确性 ;同时 ,反向明胶酶谱法证明了重组蛋白具有抑制基质金属蛋白酶的活性 .

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反义细胞周期蛋白E真核表达载体的构建及其对体外人乳腺癌细胞的抑制作用

桑建利,边昕,王永潮

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 165-168.

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为了探讨细胞周期蛋白 E(cyclin E)与人乳腺癌细胞恶性特征间的相关性 ,利用反义 RNA抑制基因表达的技术 ,构建了细胞周期蛋白 E反义 RNA的真核表达载体并转入人乳腺癌细胞中 .通过 G41 8筛选出阳性克隆 ,经 PCR和 Western印迹检测 ,确定细胞中含有重组质粒 ,并且细胞周期蛋白 E蛋白的水平明显降低 ,由此获得了反义 RNA表达载体导致的细胞周期蛋白 E表达受抑制的细胞 .细胞模型建立后 ,观察分析了细胞形态 ,细胞生长的血清依赖性以及软琼脂成集落能力 ,与对照细胞相比所发生的变化 .结果显示 ,细胞周期蛋白 E受抑制后 ,乳腺癌细胞体积变大 ,细胞生长对血清依赖性增加 ,低血清培养到第 6d时 ,细胞密度约为对照细胞的五分之一 ,细胞成集落能力也显著下降 ,软琼脂中克隆形成率下降 57% .这些变化都表明乳腺癌细胞恶性程度由于细胞周期蛋白 E表达受抑制而减弱 ,可以推测 cyclin E与乳腺癌细胞的恶性增殖及非锚定依赖性生长有着明显的关系 .

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靶向表达TNFR75的逆转录病毒载体的构建及其产毒细胞系的建立

孙晓文,刘丽,石缨,刘立忠,谢宝树,王烨,杨彦,冷爱军,曹颖

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 169-172.

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将编码人 TNFR75的 c RNA与血管内皮细胞特异性启动子 (KDRp)及缺失自身启动子的逆转录病毒载体 p LXSN- D2 99重组 .重组质粒 p LXSN- D2 99- KDRp- TNFR75与脂质体共转染包装细胞 PA31 7,经抗生素 G41 8(60 0 mg/L)筛选 1 4d,获得 1 5个稳定的产病毒细胞克隆 .将各细胞克隆分别扩大培养收集所产病毒上清 ,并感染 NIH3T3细胞检测病毒滴度 ,其中 1个克隆滴度达 2×1 0 5CFU/ml.提取该克隆细胞总 RNA进行 RT- PCR分析 ,获得的 c DNA片段长度与目的基因一致 .结果提示 ,建立了 TNFR75反转录病毒产毒细胞系 .

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重组青霉素G酰化酶在枯草芽孢杆菌中的表达条件优化

黄鹤,杨晟,李仁宝,黄晓冬,袁中一

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 173-177.

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为获得巨大芽孢杆菌青霉素 G酰化酶 (PGA)的高产菌株和条件 ,构建了分泌表达 PGA的基因工程枯草杆菌菌株 ,对表达条件进行了优化 .以 LB作为初始培养基 ,考察了温度、苯乙酸、装液量、碳源对于工程菌 PGA产量的影响 .实验发现重组细胞产酶不再需要变温和苯乙酸诱导 .充足的通气量和适当浓度的淀粉可使细胞密度及 PGA表达量大为提高 .表达条件优化后 ,菌体 A60 0由 3提高到 2 0 ,PGA的表达量由 3～ 6U/ml提高到 35～ 40 U/ml,为目前生产用巨大芽孢杆菌表达量的 6倍 .

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用于猕猴的艾滋疫苗研制成功

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 177-177.

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热带爪蟾Hoxa11基因克隆及序列的进化分析

薛良义

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 178-181.

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H oxa1 1基因是控制脊椎动物肢发育的重要基因 .根据人和鼠 H oxa1 1基因外显子区和区的保守序列设计了简并引物 ,采用 PCR法从热带爪蟾基因组 DNA中扩增和克隆到了H oxa1 1基因 ,并测定了核苷酸序列 .克隆的热带爪蟾 H oxa1 1基因片段长 1 598bp,由外显子、内含子和外显子三部分组成 ,其中外显子 60 4 bp,外显子 49bp.将该片段的核苷酸序列与人、鼠、斑马鱼 H oxa1 1基因的相应区域进行比较 ,发现该基因的内含子长度存在明显差异 .斑马鱼、热带爪蟾、鼠和人的内含子长度分别为 632 bp,945bp,1 42 1 bp和 1 41 2 bp,随动物进化阶梯的提高而变长 .外显子区则高度保守 ,都是 49bp,外显子区在长度上呈现约 1 0 %的变异 .将热带爪蟾 H oxa1 1基因编码的氨基酸序列与人、鼠、斑马鱼进行比较 ,它们之间分别有 67.0 %、66.5%和 46.0 %的同源性 .热带爪蟾与哺乳动物的同源性高于鱼类 ,可能反映了脊椎动物从鳍到肢的进化过程中 ,H oxa1 1基因经历了较多的变异 .

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抗菌肽Diptericin cDNA的克隆及在E.coli中的融合表达

陈海旭,胡泰山,王新,屈贤铭

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 182-184.

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从果蝇成虫中抽提总 RNA,RT- PCR扩增编码伏蝇素 diptericin的 c DNA,克隆并测定了全序列 .将该 c DNA亚克隆到融合表达载体 p MAL- CR1上 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,进行了高效的可溶性融合表达 .通过离子交换层析纯化融合蛋白 ,经 Xa因子酶切后得到的重组 diptericin具有抗菌活性 .

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淀粉样前体蛋白和LRP6在大肠杆菌中的表达及其体外相互作用

常磊,马康涛,张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 185-188.

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淀粉样前体蛋白 (APP)是阿尔茨海默氏病 (AD)发病过程中有重要作用的蛋白 .利用酵母双杂交的方法发现低密度脂蛋白受体相关蛋白 6(LRP6)羧基端可和 APP羧基端片段相互作用 .分别构建了 APP和 LRP6的原核表达载体 ,并利用大肠杆菌获得 GST- APP1 0 6、MBP- LRP6融合蛋白 .体外相互作用研究证实了 APP羧基端和 LRP6羧基端之间的结合 .这使与 AD相关的两个重要蛋白 apo E和 APP联系起来 ,并提示 LRP6可能在 APP代谢和 Aβ产生中起重要作用 .

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原核增强子样序列3A的克隆及其结构与功能的研究

何建新,廖小慧,秘晓林,韩峰,王艳,吴淑华

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 189-193.

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从大肠杆菌 C60 0株染色体基因组中筛选到一个原核增强子样序列 3A,其正、反向增强活性分别能提高 β-半乳糖苷酶活性 7.1 1和 2 .93倍 .采用体内转录 ,RNA斑点印迹杂交的方法 ,证明3A序列对于基因表达的调控发生在转录水平上 . 3A功能区的研究表明 ,3A增强活性主要位于距其正向克隆 5′端 (增强活性较强的方向称为正向 ,反之为反向 ) 30 0～ 540 bp,长约 2 4 0 bp的区段内 ,并证明 3A片段增强活性至少由两个增强活性位点组成

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PSP94-TNFαD11a融合基因在NIH3T3细胞中的表达及其产物活性分析

刘庆鑫,刘丽,石缨,刘立忠,王烨,杨彦,曹颖

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 194-197.

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为了分析 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的表达和表达产物的生物学活性 ,将含该融合基因的质粒 pc DNA- PSP94- TNFα D1 1 a转染 NIH3T3细胞 ,72 h后收集细胞培养上清 ,并提取细胞总RNA,经 RT- PCR,得到与目的基因长度相符合的 c DNA片段 ;以 PSP94c DNA为探针 ,对 RT-PCR产物进行 Southern印迹分析 .结果表明 :转染 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的 NIH3T3细胞 ,其 RT- PCR产物杂交信号为阳性 .细胞培养上清用 TNF抗体行 Western印迹和 ELISA分析 ,检测结果为阳性 .生物学活性分析表明 ,细胞培养上清不仅具有 PSP94抑制人前列腺癌细胞 PC- 3生长的活性 ,而且显示出 TNFα对 L92 9细胞的细胞毒作用 .以上结果表明 ,pc DNA- PSP94- TNFαD1 1 a质粒能够正确表达目的基因 PSP94- TNFα D1 1 a,且表达的 PSP94- TNFαD1 1 a融合蛋白具有预期的双重生物学活性 .

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伪狂犬病病毒gC基因在IBRS-2细胞中的表达及其对病毒繁殖的影响

肖少波,陈焕春,方六荣,洪文洲,何启盖

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 198-202.

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对含伪狂犬病病毒 Ea株 g C全基因的质粒 p UC1 .75进行亚克隆 ,将其完整编码区置于真核表达载体 pc DNA3.1 +的 HCMV启动子 /增强子下游 ,构建了 g C基因真核表达质粒 pc DNA-g C.脂质体转染 IBRS- 2细胞 ,在 G41 8抗性选择下 ,获得多个阳性克隆细胞系 .经 ELISA筛选反应最强的阳性克隆细胞系 ,进一步用间接免疫荧光检测证实 g C基因在 IBRS- 2细胞中得到了正确表达并分布在细胞膜 .以 1 0 0个蚀斑形成单位的伪狂犬病病毒分别接种表达 g C的细胞系和空白载体转染细胞系 .通过测定蚀斑数发现 ,表达 g C的细胞系对病毒的感染具有抑制作用 ,平均抑制率达 59.4%± 1 .3% .

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采用RACE技术获得全长人新基因MAGE-D1

邢桂春,张成岗,魏汉东,贺福初

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 203-208.

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c DNA末端快速扩增 (RACE)技术是快速获得新基因 5′和 3′端未知序列的有效手段 .鉴于新报导的人肿瘤基因 MAGE家族成员之一 MAGE- D1的 c DNA序列不完全 ,从而拟用 RACE技术获得 MAGE- D1的全长 c DNA序列 .结果显示 ,MAGE- D1的 c DNA全长为 2 80 0个碱基 ,编码778个氨基酸 .同时对 RACE技术应用时的一些关键问题进行了讨论 .

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一个新的白血病相关基因LRP16全长cDNA的克隆、序列分析及表达特征

韩为东,于力,楼方定,王全顺,赵瑜,史子江,焦宏远,周建军

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 209-214.

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克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,再设计引物进行 c DNA末端快速扩增(RACE技术 ) .采用 Northern印迹方法进行组织表达分析 .以高通量基因组序列 (HTGS)数据库为基础进行染色体定位 .对构建的克隆菌用 IPTG诱导重组蛋白表达后进行 SDS- PAGE,同时对重组体测序确证 .钓取了该基因全长 c DNA、推导所编码的氨基酸序列 ,并将该基因定位于染色体1 1 q1 2 .2 .原核表达筛选获得了该基因重组子的一个缺失体 .对 LRP1 6基因全长 c DNA的序列分析提示 ,该基因可能编码两种 N端不同的蛋白质 ,且该基因的转录本可能存在一种丰度较低的剪接体 .

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镇痛多肽——内吗啡肽-1的人工合成及活性研究

吴黎明,陈钧辉,毛晓青,徐晴皓,赵晓宁

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 215-218.

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用液相合成方法合成了具有镇痛作用的μ阿片受体的内源性配体——内吗啡肽 - 1(endomorphin- 1 ) ,该四肽为 Tyr- Pro- Trp- Phe NH2 .液相合成法是在氨基酸的 N端用 Boc(叔丁氧羰酰基 )作保护基 ,C端用 HOSu(N-羟基琥珀酰亚胺 )活化 ,与未加保护基的氨基酸在碱性条件下接肽 .先分别合成 C端二肽和 N端二肽 ,再缩合为四肽 ,产物的保护基用盐酸脱帽去除 .中间产物用薄层层析和熔点鉴定其纯度 ,最终得到了高纯度的四肽 .小白鼠脑室注射 (i.c.v)测定表明 ,8.2 5nmol剂量给药 ,其镇痛活性为 87% ,明显高于吗啡 (morphine) .

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单链尿激酶型纤溶酶原激活剂Kringle结构域催化功能探讨

纪建国,茹强,杨晶鑫,俞梅敏,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 219-225.

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Kringle(K)结构域广泛存在于与凝血和纤溶相关的各种因子中 .虽然 K结构域在一级结构上是一种比较保守的结构域 (与其他结构域相比 ) ,但是 K结构域的功能在各种因子中的作用有很大的区别 .为探讨单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (scu- PA)的 K结构域功能 ,构建了在 scu- PA的 K结构域的 1 1 8位 Gly与 1 1 9位 Leu之间插入 PRGDWR序列的突变体 (称为 insert mutant B,In B) ,并测定了野生型 scu- PA与 In B的纤溶相关反应的动力学常数 . scu- PA与 In B水解 S- 2 4 4 4反应的 Km 值无明显变化 (分别为 60 .4与 56.8μmol·L-1) ,而 In B的 kcat值 (0 .33s-1)比 scu- PA的 kcat值 (7.31 s-1)降低很多 ;In B激活纤溶酶原反应的 Km 值 (0 .397μmol· L-1)比 scu- PA Km 值(0 .648μmol·L-1)降低 40 % ,但 kcat值 (0 .0 1 65s-1)比 scu- PA的 kcat值 (0 .0 62 6s-1)降低 74% .以上结果说明 :K结构域主要与反应活性相关 ,而与酶及底物的亲和性无关 .

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试图利用脊髓灰质炎病毒修复脊髓损伤

李潇;

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 225-225.

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一枝蒿总黄酮类调节人肝癌细胞凋亡基因p53、Fas和bcl-2的表达

斯拉甫,艾斯卡尔,伊力哈木江,肖开提,哈木拉提

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 226-229.

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应用体外细胞培养及 RT- PCR(reverse transcription PCR)分析了新疆一枝蒿总黄酮类作用后肝癌细胞 (肝癌、ATCC QGY- 770 1 )中凋亡基因 p53、Fas及细胞增殖基因 bcl- 2的表达及它们之间的差异 .结果发现一枝蒿总黄酮可诱导肿瘤细胞分化 ,对肿瘤细胞的增殖及 DNA的合成有明显的抑制作用 ,并且指出其诱导细胞凋亡是从细胞周期的 G0 /G1期开始的 .用 5mg/L、1 0 mg/L的一枝蒿总黄酮处理肝癌细胞 2 4 h、36h及 72 h时有大量的野生型 p53基因表达而 Fas及 bcl- 2基因未见表达 .结果表明 ,一枝蒿总黄酮类诱导野生型 p53基因的表达可能是它间接清除体内恶变细胞及提高机体免疫功能的分子机制之一 .

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关于第二届天然抗氧化剂-分子机理和健康作用国际研讨会的通知(本通知只适用于中国国内会议代表)

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 229-229.

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钙池排空操纵的外钙内流决定甘草诱导MGC-803细胞凋亡

马靖,符乃阳,庞大本,彭文烈,徐安龙

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 230-236.

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用 EGTA螯合胞外 Ca2 +和异搏定抑制钙通道 ,研究胞外 Ca2 +在甘草诱导 MGC- 80 3细胞中的作用 .流式细胞仪检测凋亡峰和 DNA ladder分析均表明 ,EGTA和异博定阻断细胞凋亡 .分别以 PI或 Rh1 2 3活染后的相应荧光强度表示细胞膜通透性和线粒性膜电位 (ΔΨm) .结果表明 ,细胞膜通透性增强和线粒体 ΔΨm 下降均为细胞凋亡的早期事件 ,EGTA和异博定均可抑制细胞膜通透性增强 ,但 EGTA促进线粒体 ΔΨm 下降 ,而异博定作用相反 .进一步经 PI和 Hoechst33342荧光双染后同时观察细胞膜通透性和细胞核形态 .结果表明 ,凋亡细胞均可 PI着色 ,EGTA和异博定完全阻断染色质凝聚 ,但不能完全抑制细胞膜通透性变化 .借助 Ca2 +探针 Fluo- 3/AM研究凋亡时胞内游离钙的时相变化 ,发现 Ca2 +升高也是细胞凋亡的早期事件 . EGTA和异博定轻微促进凋亡早期 Ca2 +升高 ,但抑制随后 Ca2 +的继续升高 .所有结果提示 ,钙池排空操纵的外 Ca2 +内流在甘草诱导 MGC- 80 3细胞凋亡中发挥决定性的作用 .

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周爱儒、查锡良主编医学专业教材《生物化学》(第五版)出版

朱滨,周爱儒

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 236-236.

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人源细胞内物质转运调节分子ARFGAP1对细胞分泌功能的影响

刘晓勤,张成岗,邢桂春,陈清棠,贺福初

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 237-243.

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ARF GAP是重要的细胞内物质转运调节分子 .最近 ,在人胎肝 c DNA文库中发现一种新基因 ,其编码的氨基酸序列与大鼠的 ARF1 GAP有 32 %同源性 ,故将其命名为“ARFGAP1”.对ARFGAP1进行功能研究 ,利用分子克隆技术构建绿色荧光蛋白 (GFP) - ARFGAP1融合基因表达质粒 (p EGFP- C1 - ARFGAP1 ) ,经脂质体转染将其导入 COS- 7细胞瞬时表达 ,利用绿色荧光确定ARFGAP1的亚细胞定位 .结果显示 ,ARFGAP1位于细胞质部分 ,表达量高时 ,在核周高尔基体区聚集呈团块状或颗粒状 .构建真核表达质粒 pc DNA3.1 /myc- His- ARFGAP1 ,在 COS- 7细胞中表达 ,并用 ARFGAP1和分泌型碱性磷酸酶 (SEAP)真核表达质粒共同转染 COS- 7细胞 ,发现ARFGAP1在细胞中过表达能部分抑制 SEAP的分泌 .结果证明 ,ARFGAP1对细胞的物质转运和分泌功能有调节作用 .

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用改良消减杂交筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中高表达基因

王吉村,药立波,吕厚山,刘新平,邓艳春,聂晓燕,孙铁铮,燕太强

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 244-249.

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为了研究类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞 (fibroblast- like synovialcells,FLS)过度增殖和破坏软骨的分子机理 ,利用改良消减杂交法以骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)病人滑膜细胞为对照 ,筛选 RA滑膜细胞中的高表达基因 .将得到的基因片段克隆入质粒载体 ,通过反向点杂交排除假阳性克隆后 ,将阳性克隆进行核酸序列分析 ,最后用 Northern杂交方法检测一些高表达基因在 RA和 OA病人滑膜细胞中的表达水平 .结果显示 ,共分离到 1 50个 RA高表达基因片段 ,其中长于 1 0 0 0 bp的片段占 8% (1 2 /1 50 ) ,长于 40 0 bp的片段占 36.7% (55/1 50 ) ,在大于 40 0 bp的片段中 ,假阳性率为 2 3.7% (1 3/55) .在测序的 1 8个片段中 ,已知基因有 1 2个 ,其中包括 IGF- 1结合蛋白 (IGFBP)特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B等 .新序列有 6个 ,其中两个序列分别与 Ring- box蛋白 1和 SON DNA结合蛋白同源 .对 IGFBP特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B基因的 Northern杂交分析显示 ,在 RA病人滑膜细胞中 ,这些基因的表达水平高于 OA病人滑膜细胞 .这些结果提示 ,这种改良消减杂交法是一种简便有效的分离差异表达基因的方法 ;IGF- 1结合蛋白特异性丝氨酸蛋白酶、层粘

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Id2作为Rb蛋白的靶点并介导Myc癌蛋白的信号

吴军峰,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 249-249.

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反义寡核苷酸药物癌泰得的定性分析方法研究

杨秉呼,管伟,王升启

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 250-254.

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癌泰得 (ACTCACTCAGGCCTCAGACT)为端粒酶表达抑制活性反义寡核苷酸 .为了探讨其定性检测手段 ,通过阴离子交换高效液相色谱和毛细管凝胶电泳分析方法 ,确定了该硫代寡核苷酸以及与其有关的短序列和部分未被硫代类似物的保留时间 ,并分析了不同混合物样品 .结果表明 ,阴离子交换高效液相色谱对硫代寡核苷酸骨架上的差异非常敏感 ,可很好地分离长度相同的硫代和未完全硫代类似物 ,并且随未被硫代磷酸基数目增加 ,保留时间依次缩短 .阴离子交换高效液相色谱对硫代寡核苷酸的长度不敏感 ,不能分离相差一个碱基的硫代寡核苷酸 .毛细管凝胶电泳可很好地分离长度相差一个碱基的硫代寡核苷酸 ,不能分离同长硫代和部分硫代寡核苷酸 .高效液相色谱结合毛细管凝胶电泳可有效地确定癌泰得的纯度和修饰程度 .

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应用抑制性消减杂交分析全反式维甲酸和1,25-二羟维生素D_3诱导结肠癌细胞的相关基因

郭俊明,陶莎,庄菁,梁雪清,罗超权

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 255-261.

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为探讨结肠癌细胞诱导分化的机制 ,采用抑制性消减杂交 (suppression subtractivehybridization,SSH)研究联合使用全反式维甲酸和 1 ,2 5-二羟维生素 D3诱导分化结肠癌 Lo Vo细胞前、后差异表达的基因 .经比较消减 c DNA文库的序列与基因库的序列 ,发现 :有 1个基因的序列与正常鳞状上皮细胞中的 1个表达序列标签 (expressed sequence tag,EST)高度同源 ,同时发现6个新 EST (基因库登录号为 AW2 66492、AW2 66493、AW2 66494、AW58751 8、AW58751 9和AW58752 0 ) .说明诱导分化涉及到多个基因的表达 ,结肠癌的发生是多基因综合作用的结果 .进一步研究这些基因和 EST的功能对于结肠癌的防治将有重要意义 .

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遗传变异提高糖尿病的危险率

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 261-261.

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粘着斑激酶在TNF-α作用下影响SMMC-7721细胞PKB的表达水平

方祎,王丽影,陈伉丽,靳嘉巍,查锡良

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 262-265.

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探讨在肿瘤坏死因子α(TNF-α)作用下 ,粘着斑激酶 (focal adhesion kinase,FAK)对蛋白激酶 B(PKB)蛋白水平的影响 .利用构建、转染 FAK反义质粒来特异性降低 SMMC- 772 1细胞的FAK含量 ,及用 Western杂交的方法来检测 PKB的蛋白含量 .文献报道 TNF- α能够激活磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)而使 PKB发生磷酸化 .但是至于 TNF-α对 PKB蛋白水平的影响目前并无报道 .研究发现 ,当用 wortmannin特异性抑制 PI3K活性后可以显著降低 PKB的蛋白含量 .提示PI3K对维持 PKB的基础蛋白水平是必需的 .但是 TNF- α本身对 PKB的蛋白水平无明显影响 .而当用不同浓度的 TNF- α和 wortmannin处理 SMMC- 772 1细胞时 ,发现 PKB的蛋白含量随着TNF-α浓度的增加而降低 .提示 TNF-α可能除了通过 PI3K外 ,还可能通过另一条途径来下调PKB的表达 .而当用 FAK反义质粒转染 SMMC- 772 1细胞后 (FAK下降了 60 % ) ,发现在当用不同浓度的 TNF- α处理的情况下 ,FAK反义质粒转染株 AS- 772 1细胞的 PKB含量降低为对照的70 % ;而在用 TNF-α和 wortmannin处理的情况下 ,下降为对照的 40 %～ 60 % .TNF-α能够通过PI3K及另一未知途径来影响 PKB的蛋白水平 .而 FAK在 TNF- α作用下能够不通过 PI3K来影响PKB的蛋白水平 .

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菜心和水稻绿叶中不同等电点的乙醇酸氧化酶

徐杰,吴燕燕

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 266-270.

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DNA改组技术在水蛭素实验进化中的应用

周育,刘晖,谭涛超,黄仪秀,朱圣庚

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 271-274.

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著名生物化学家阎隆飞院士逝世

中国生物化学与分子生物学报. 2001, 17(02): 274-274.

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