过刊目录

  • 全选
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    综述
  • 刘黎明;许正平
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 883-889.
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    mRNA降解在真核生物的基因表达调控中发挥重要作用.目前,已经鉴定了多种参与mRNA降解
    的酶和复合物,并发现细胞质处理小体可能是降解mRNA的主要位点.本文着重总结了正常和
    异常mRNA降解的主要途径以及各途径相关因子和酶的功能,并讨论了细胞质处理小体在mR
    NA降解过程中的作用.最后对该领域今后的研究重点和方向作了探讨.

  • 史新娥;张辉;袁媛;杨公社
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 890-894.
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    FoxO1是Fox家族中FoxO亚家族的成员之一,其氨基酸序列在不同物种间高度保守,但
    磷酸化位点存在差异.此外,FoxO1在不同物种间染色体定位不同.FoxO1转录活性的调节包括
    基因表达水平、翻译后修饰、蛋白质的稳定性及蛋白质之间的相互作用等多个层次.FoxO1在
    肌纤维类型转化过程中发挥重要作用,肌纤维类型与肉品质密切相关,直接影响肌肉色泽、
    嫩度和肌内脂肪含量.因此,研究FoxO1调控肌纤维类型转化的机理,将为改善肉品质奠定理
    论基础.本文系统介绍了Fox的命名与分类,FoxO1的结构特点及转录活性的调节,并着重综
    述了FoxO1调控肌纤维类型转化的最新研究进展.

  • 郭艳合;张义玲;刘立;王毅刚;钱程
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 895-901.
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    端粒(telomere)是位于真核生物染色体末端的保护性结构,在调节细胞衰老及细胞寿命等
    方面具有重要意义.人们已在端粒结构中鉴定出了一系列的蛋白因子,如TRF1、TRF2、Pot1
    ,Rap1、Tin2等,这些因子在保护端粒以及维持端粒合适长度的过程中具有重要作用.最近
    人们发现,在端粒结构以及亚端粒区域中存在丰富的表观遗传修饰,该类修饰包括组蛋白的
    三甲基化、组蛋白的乙酰基化以及DNA的甲基化等.并且发现这些修饰在端粒长度调节过程以
    及端粒相关疾病的发生发展过程中具有重要意义.人们推测,该机制可能对哺乳动物的衰老过
    程以及衰老相关的疾病等方面具有重要的调节作用.本文将对这些方面的最新研究进展作一
    介绍.

  • 赵朴;郑玉姝;刘兴友
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 902-905.
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    微RNA(MicroRNA,miRNA)是一类在转录后水平调节基因表达的大约22 nt的非编
    码内源单链RNA.已经表明,它们与许多重要的生理和病理过程相关,包括发育、分化、细胞
    凋亡、脂肪代谢、病毒感染和癌症.越来越多的证据表明,miRNA参与了获得性免疫的调节.
    有趣的是,不同于开关式的调节,miRNA表现出定量的基因调节,它们能精细调节细胞免疫
    反应以响应外界刺激.深入理解miRNAs对获得性免疫的调节作用有助于调节宿主免疫应答和
    保护感染组织间的平衡,鉴定免疫调节新靶标和开发基于miRNA的有效疗法.本文综述了miRN
    A包括病毒miRNA对获得性免疫的调节作用,特别是miRNA在调节免疫活性细胞、T细胞功
    能和抗体产生中的作用.

  • 研究论文
  • 李兴安1,2,张应玖2,胡轶虹1,常明1,刘韬3,王丹萍1,张瑜1,胡林森1
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 906-915.
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    路易(小)体(Lewy body, LB)构成特征的蛋白质组份(protein content)在体外形成的路易(小)体样包含体(Lewy body-like inclusion)或聚集体(aggresome)中能够获得鉴定.通过蛋白质组学方法鉴定LB蛋白质组分是一种新的途径.10 µmol/L人工合成蛋白酶体抑制剂PSI(proteasomal inhibitor)作用PC12细胞48 h使其产生PSI诱导性包含体(PSI-induced inclusions). 为了在体外指明可能的LB蛋白质组分,通过生物化学分级分离、双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-D)和肽质量指纹鉴定(identification via peptide mass fingerprints,PMF)的蛋白质组学方法,鉴定了2个涉及突触递质合成的蛋白质、6个26 S蛋白酶体亚基、2个细胞骨架蛋白、2个线粒体蛋白、1个抗氧化蛋白和7个分子伴侣蛋白和(或)分子伴侣样蛋白等20个LB蛋白质组分.结果提示,当PC12细胞发生蛋白酶体抑制时,这20个LB蛋白质组分可能被富集到PSI诱导性包含体中.
  • 尹捷;刘一苇;李洁;马延和;向华;严景华;高福
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 916-924.
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    6-磷酸-β-葡萄糖苷酶 (PbgL,EC 3.2.1.86) 催化由磷酸烯醇式丙酮酸糖磷酸转移酶系统(PEP-PTS)转运入胞内的某些磷酸化二糖水解.一段来自腾冲嗜热厌氧杆菌 (Thermoanaerobacter tengcongensis) 编码PbgL (436个氨基酸残基) 的开放阅读框 (ORF TTE0337)被成功克隆,并在大肠杆菌BL21(Escherichia coliBL21)中有活性地表达.序列分析显示,该6-磷酸-β-葡萄糖苷酶属于糖基水解酶家族4(GH4),与枯草杆菌(Bacillus subtilis)的LicH,海栖热袍菌(Thermotoga Maritima)的BglT的一致性分别为62%和40%.纯化后的重组PbgL(rPbgL)经SDS-PAGE分析,为1条分子量约50 kD的蛋白条带,与推测的分子量大小一致.该酶需要Mn2+、NAD+ 和 还原剂为辅因子,能专一性地水解pNPβG6P,并在85 ℃达到最高酶活性.Western免疫印迹实验,利用针对rPbgL的多克隆抗体血清,能从腾冲嗜热厌氧杆菌胞内检测到PbgL的表达.此外,rPbgL的蛋白晶体已被筛选获得,并收集到2.4Å分辨率的衍射数据.采用分子置换法的结构解析目前仍在进行中.

  • 郭爱云;王梁华;孙铭娟;焦豫良;任娜;焦炳华
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 925-930.
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    以基质金属蛋白酶(MMP)酶切位点(PLGLWA)为连接臂,采用重组PCR技术获得血管形成抑制素(vasostatin,V)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL,T)的融合蛋白质编码序列,将该融合编码序列插入原核表达载体pMAL-c2中,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,分别得到MBP-VT和MBP-TV融合蛋白,Amylose Resin亲和层析柱纯化.初步纯化的融合蛋白MBP-VT在体外内皮细胞增殖抑制实验、肿瘤细胞凋亡诱导实验中显示了明显的活性,而MBP-TV的作用不明显;体外酶切实验和培养肿瘤细胞上清酶切融合蛋白的免疫印迹分析,证实融合蛋白MBP-VT皆能被正确酶切.上述结果表明成功表达了融合蛋白VT,该融合蛋白具有双重抗肿瘤活性,并可在肿瘤高表达的MMP作用下裂解为V和T.

  • 徐洪亮;赵磊;卓德祥;毛泽斌
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 931-937.
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    过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因(PPARδ)与结直肠癌相关,但其转录调控机制尚不清楚.本研究构建了PPARδ基因的启动子荧光素酶报告基因载体,用删除法定位了启动子活性区域,并通过核酸重叠法和电泳迁移率变更实验,将该区域缩小到30 bp,预测该区域可能起作用的转录因子结合位点;通过启动子定点突变分析和核酸诱骗实验,发现真正起作用的是-156~-127区域内NF-κB的结合位点.电泳迁移率变更法和超迁移分析实验,证实NF-κB能够与该区域结合,并且在抑制NF-κB的DNA结合活性后,PPARδ mRNA的表达明显降低.这些实验表明,在Lovo细胞中,转录因子NF-κB参与了PPARδ的表达调控.

  • 程小星;蹇锐
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 938-942.
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    应用随机RNAi文库,筛选了与胚胎干细胞自我更新和分化调控相关基因,发现了多个阳性候选基因,对其中的1个阳性候选基因肌管素1(myotubularin, MTM1)基因进行了深入研究.MTM1是属于蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPase)蛋白家族的蛋白,其基因突变导致肌管性肌病.MTM1在胚胎干细胞中的功能到目前为止还不清楚.研究证实,MTM1在小鼠胚胎干细胞系CCE和R1均有表达.应用RNA干扰及集落形成实验证明,MTM1表达抑制后,处于自我更新状况胚胎干细胞集落的比例显著增加,提示MTM1在胚胎干细胞自我更新和分化的调控中起了重要的作用.

  • 卜友泉;杨正梅;兰欢;镇磊;刘革力;宋方洲
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 943-949.
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    NFBD1,也称MDC1,是1个参与细胞内DNA损伤后细胞应答反应的重要分子.为探讨NFBD1在细胞增殖和凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究采用siRNA技术抑制NFBD1的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞HeLa细胞增殖和细胞凋亡的影响.半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,筛选到的短链NFBD1 siRNA能有效抑制内源NFBD1的表达,抑制程度约100%.细胞生长曲线分析结果表明,siRNA介导的NFBD1表达沉默导致HeLa细胞生长增殖的显著抑制.FACS分析结果表明,NFBD1表达抑制导致sub-G1峰的出现,同时蛋白质印迹分析观察到了caspase 3和PARP(poly-ADP-ribose polymerase)的剪接激活,表明NFBD1表达抑制诱发了细胞凋亡.在该凋亡过程中,P-53及其下游靶分子Bax和Puma的表达水平均没有发生明显变化,但Noxa的表达在mRNA和蛋白质水平上均显著上调,强烈提示该凋亡过程很可能是1个不依赖P53的凋亡途径,且Noxa的转录激活在该凋亡过程中可能起着重要作用.这些结果表明,NFBD1参与细胞生长增殖和凋亡的调节,是一个潜在的肿瘤治疗新靶点.

  • 欧阳玉梅
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 950-956.
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    研究酵母(yeast)蛋白质相互作用与基因表达谱和蛋白质亚细胞定位的关系.首先,构建了蛋白质相互作用正样本集、负样本集、随机组对负样本集和混合样本集.然后,对于4个数据集中的所有蛋白质对,通过比较它们的基于距离的基因共表达的分布以及它们中具有已知亚细胞定位的蛋白质对的共定位出现率,实现了这些高通量数据的交叉量化分析.结果揭示,与非相互作用蛋白质对相比,相互作用蛋白质对的基因表达谱具有较高的相似性;相互作用蛋白质对更倾向于具有相同的亚细胞定位.结果还揭示出这些蛋白质特征相关的总体趋势.

  • 梁盈;张秀艳;李祺福;石松林;赵振利;陈晋安
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 957-967.
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    在鉴定视黄酸(retinoic acid, RA)诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分化的基础上,应用免疫细胞化学、选择性抽提和蛋白质组学分析技术,对SK-N-SH细胞诱导分化过程中核基质蛋白组成变化进行了系统研究.实验结果显示,经1 μmol/L RA处理后SK-N-SH细胞呈极性状,伸出较长的轴突样突起,胞体逐渐变小变圆.免疫细胞化学结果显示,处理后神经细胞特异表达的蛋白synaptophysin、NSE、MAP2的表达量都较对照组有明显增强.双向凝胶电泳分析显示,在RA诱导SK-N-SH细胞分化前后存在52个差异表达的核基质蛋白,经质谱分析,鉴定了其中的41个蛋白.蛋白印迹杂交进一步确证了诱导分化差异表达核基质蛋白中nucleophosmin和prohibitin等的表达变化.研究结果表明,1 μmol/L RA对SK-N-SH细胞具有显著的诱导分化作用,在SK-N-SH细胞分化过程中,其核基质蛋白组成发生了明显变化.这些变化对于揭示人神经母细胞瘤细胞癌变与逆转机制和肿瘤细胞增殖与分化调控机理均有十分重要的意义,从而为研究神经系统正常发育过程及神经系统疾病的发病机理提供科学依据.

  • 徐付卿;山长亮;叶丽虹;张晓东
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 968-973.
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    乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)X蛋白(HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.大量研究结果表明,与花生四烯酸代谢相关的磷脂酶COX-2与肿瘤细胞的增殖密切相关.为了阐明COX-2在HBx促进肝细胞增殖中的作用,在前期应用基因芯片方法检测发现稳定转染HBx 基因的肝癌细胞H7402-X中COX-2基因表达明显上调的基础上,本研究应用免疫印迹技术在蛋白表达水平上获得了相同的结果.进而,应用COX-2的特异性抑制剂Indo分别作用H7402-X细胞和L-O2-X细胞(稳定转染HBx 基因的人永生化L-O2肝细胞),观察HBx蛋白是否通过COX-2促进肝癌细胞或肝细胞增殖.BrdU掺入实验和流式细胞仪检测结果显示,50 μmol/L的Indo可明显抑制H7402-X细胞和L-O2-X细胞的增殖.本研究结果提示,HBx可通过COX-2所介导的花生四烯酸代谢促进肝癌细胞和肝细胞增殖.

  • 技术与方法
  • 姜茜;贾凌云
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 974-979.
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    目前,蛋白质相互作用已成为蛋白质组学研究的热点. 新方法的建立及对已有技术的改进标志着蛋白质相互作用研究的不断发展和完善.在技术改进方面,本文介绍了弥补酵母双杂交的蛋白定位受限等缺陷的细菌双杂交系统;根据目标蛋白特性设计和修饰TAP标签来满足复合体研究要求的串联亲和纯化技术,以及在双分子荧光互补基础上发展的动态检测多个蛋白质间瞬时、弱相互作用的多分子荧光互补技术.还综述了近两年建立的新方法:与免疫共沉淀相比,寡沉淀技术直接研究具有活性的蛋白质复合体;减量式定量免疫沉淀方法排除了蛋白质复合体中非特异性相互作用的干扰;原位操作的多表位-配基绘图法避免了样品间差异的影响,以及利用多点吸附和交联加固研究弱蛋白质相互作用的固相蛋白质组学方法.

  • 研究简报
  • 薛良义;孙升;肖章奎;杨巧一;叶放;童丽娟
    中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(10): 980-985.
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    肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)参与肌肉生长和脂肪发生的调节.本研究在克隆大黄鱼MSTN cDNA的基础上,对3′端非编码区微卫星序列的多态性及其与体长、体重和肌肉脂肪含量的关系进行了分析.结果表明,获得的cDNA长1 886 bp,在3′端非编码区存在微卫星序列(CA)n.在受检的52个个体中,微卫星序列长度在64~126 bp之间.大部分个体的微卫星序列内存在碱基替换,最常见的碱基替换形式是C→T,属于非完美型微卫星序列.根据该位点微卫星序列长度,在实验群体中共检测到23个等位基因,其中频率为0.019 2的等位基因11个,0.038 5的5个, 0.076 9的3个,0.057 7的2个,0.115 4和0.134 6的各1个.该基因位点的群体杂合度为0.932 7,多态信息含量为0.928 8.微卫星序列长度与大黄鱼体长、体重和肌肉脂肪含量之间的相关系数分别为0.409、0.435和-0.026,P值分别为0.021、0.016和0.878.碱基替换对大黄鱼生长及肌肉脂肪含量均无显著影响.