Notch信号通路在脊椎动物和无脊椎动物许多组织的发育过程和细胞间通讯中都发挥了关键的作用，包括调控细胞命运，调节细胞迁移，分化和增殖.Notch信号通路由Notch受体及其跨膜配体如Delta（Dl）和Serrate组成.Neuralized 蛋白（Neur）编码1个E3泛素连接酶，是Notch配体D1内吞所必需的.Neur蛋白包括3个从线虫到人高度保守的结构域：2个Neur同源重复结构域（NHR1和NHR2）和1个C端RING结构域.本文就Notch信号通路主要元件和Neru的结构与功能及其关系进行综述.
肌肉（骨骼肌）组织对脂肪酸的利用水平是影响机体能量稳态的关键因素.肌肉摄取的长链脂肪酸(longchain fatty acids，LCFAs)主要依赖细胞膜载体蛋白协助的跨膜转运过程.近年来，一系列与脂肪酸转运相关的膜蛋白被相继克隆鉴定，其中在肌肉中大量表达的有脂肪酸转运蛋白-1（fatty acid transport protein-1，FATP-1）、膜脂肪酸结合蛋白（plasma membrane fatty acid binding protein，FABPpm）、脂肪酸转位酶（fatty acid translocase，FAT/CD36）和小窝蛋白-1（caveolin-1）.研究上述肌肉脂肪酸转运膜蛋白的结构功能、调控机制及相互关系，可能为肥胖等脂类代谢紊乱疾病的诊治提供新的手段.
哺乳动物在早期胚胎发育过程中，肺发育经历了气管分支的形态发生、树样结构上皮管道的形成，并伴随着血管的发育而发生的气体通路和肺泡的分化等过程.肺发生涉及到许多复杂的分子机制.肺形态学的变化受到一系列持家基因、激素、核转录因子、生长因子及其他因素的综合调控.目前已经发现决定肺分支形态发生的许多重要因子.本文根据目前最新研究进展，阐述了小鼠胚胎肺在分支形态发生过程中，上皮与间充质之间诱导的信号通路之间的相互作用及其对呼吸树形态建成的调控机制.
腺病毒以其具有的诸多优点被广泛应用于肿瘤基因治疗中.但由于腺病毒载体在体内存在感染效率低、免疫原性强等缺点,限制了其在临床中的作用.为了解决这些问题，研究人员制定了一系列改造腺病毒载体的策略.如通过对纤毛蛋白的改造来增强腺病毒载体感染肿瘤细胞的能力；对六邻体蛋白的改造和对病毒衣壳进行聚乙二醇化处理使得腺病毒载体能够逃逸人体的免疫识别.此外，为了增强腺病毒载体对肿瘤细胞的靶向性和杀伤效力，人们也对病毒载体的基因组进行了富有成效的改造.值得注意的是，肿瘤趋向性细胞载体的研究，为腺病毒介导的肿瘤基因治疗系统提供了一种全新的策略.因此，如何能有机地结合多项改造策略，最大限度地提高腺病毒载体在今后临床应用中的高效性、安全性将是未来研究的重点.本文针对最近肿瘤基因治疗中腺病毒载体改造取得的一些进展做一概述和讨论.
前期研究发现，人基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)在唐氏综合征（Down’s syndrome ，DS)胎儿脑组织内表达下调．为了探讨TIMP-1表达下调参与DS脑病变发生的可能机制，本研究以人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）为模型，观察TIMP-1基因沉默后对其增殖和凋亡的影响．应用LipofectaminTM2000将TIMP-1特异性短发卡 RNA( short hairpin RNA,shRNA)导入SH-SY5Y细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定表达TIMP-1-shRNA细胞株；应用RT-PCR、real-time PCR和Western 印迹对干扰效率进行鉴定：与SH-SY5Y细胞相比，无论在mRNA水平还是蛋白水平，SH-SY5Y-TIMP-1-shRNA细胞中TIMP-1的表达显著下调（下调率接近100%）．结果显示，已成功构建了TIMP-1基因沉默的SH-SY5Y细胞模型．在此基础上，通过MTT检测发现，TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞增殖减慢；流式细胞仪和荧光显微镜凋亡检测显示，TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞凋亡明显增加．这些研究结果表明,TIMP-1基因沉默能削弱SH-SY5Y细胞的增殖能力并增强SH-SY5Y的凋亡效应，提示TIMP-1可能是通过影响神经细胞的增殖和凋亡参与DS智力低下的发病过程．
铜伴侣蛋白是细胞质中负责传递铜离子的一种小分子转运蛋白，在逆境胁迫过程中铜伴侣蛋白的ATX1家族具有消除活性氧的作用．本研究应用RACE技术从西伯利亚蓼中克隆了具有完整编码区的铜伴侣蛋白全长cDNA序列，命名为PsATX-1．PsATX-1基因全长516 bp，其中开放读码框为228 bp，编码75个氨基酸，5′非编码区为83 bp，3′非编码区为204 bp．GenBank中登录号为EU620702．经比对发现，该基因所编码蛋白拥有重金属结合位点MXCXXC，缺少多数高等植物铜伴侣蛋白(CCH)所特有的C末端结构域（CTD）．实时荧光定量PCR分析显示，PsATX-1基因在西伯利亚蓼的地下茎、茎、叶中皆有表达，其中叶中表达量最高；PsATX-1基因受3% NaHCO3胁迫诱导，在不同部位表达模式有差异．
花生四烯酸代谢相关酶环加氧酶(COX)、脂氧合酶(LOX)和活化的胞外信号调节激酶（p-ERK1/2）等与乳腺癌发生发展具有密切关系.为了进一步阐明它们在乳腺癌转移中的作用及其分子机制，应用反转录PCR（RT-PCR）、免疫印迹和免疫组化等方法，分别检测了乳腺癌细胞系、乳腺癌组织、癌旁组织和转移淋巴结组织中COX-2、5-LOX、12R-LOX、cPLA2和p-ERK1/2的表达水平.结果显示，与对照组相比，在具有高转移潜能的乳腺癌LMMCF-7细胞和MDA-MB-231细胞以及转移淋巴结组织中,COX-2、5-LOX、12R-LOX、cPLA2和p-ERK1/2均有较高水平表达.进而发现，p-ERK1/2的特异性抑制剂PD98059可拮抗LM-MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中COX-2、5-LOX、12R-LOX和cPLA2的高表达.上述结果表明，p-ERK1/2可以通过促进花生四烯酸代谢相关酶的表达促进乳腺癌细胞发生转移.
白细胞介素24（interleukin 24，IL-24）是近年来新发现的1个IL-10家族细胞因子，具有明显的抗肿瘤活性．为了研究开发高活性、低分子量的IL-24,并探讨其用于肿瘤靶向治疗的可能性，本研究在前期基础上,进一步构建并制备了缺失N端103个氨基酸残基的IL-24（hIL-24Δ103）重组腺病毒，并观察了其对A549细胞生长增殖和凋亡的影响．首先,采用PCR技术扩增IL-24第104位至第206位氨基酸区域的编码序列，制备hIL-24Δ103重组腺病毒．用Ad-hIL-24Δ103重组腺病毒感染肺癌A549细胞. MTT分析结果表明，Ad-hIL-24Δ103感染显著抑制了A549细胞的生长．Hoechst 33258染色和流式细胞仪分析结果表明，Ad-hIL24Δ103感染导致细胞凋亡．Western 印迹分析结果表明，Ad-hIL-24Δ103感染导致了PKR和eIF-2α蛋白的表达上调与磷酸化激活，提示PKR和eIF-2α参与了hIL-24Δ103导致的细胞生长抑制和细胞凋亡过程的调节．关键词 人白介素24；腺病毒；细胞增殖；细胞凋亡
探讨老年慢性心功能不全患者中，心肌细胞Iks通道β亚单位基因mink-S38G多态性与心房颤动（atrial fibrillation, AF）发生的相关性.收集慢性心功能不全患者共127例，其中房颤组63例，窦律组64例.采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism, PCR—RFLP）检测房颤组和窦律组的mink基因S38G多态性位点的基因型.房颤组与窦律组之间minkS38G的3种基因型频率为SS(9.52% vs 23.44%)，SG(41.27% vs 50.00%)，GG(49.21% vs 26.56%).在房颤组中,GG基因型的频率明显高于窦律组，两组间基因型存在明显差异， P=0.013；多因素Logistic回归提示,minkS38G多态性与房颤的发生有明显相关（P=0.010）.因此，在老年慢性心功能不全患者中，mink基因S38G多态性与房颤的发生有关，具有GG基因型的患者其发生房颤的风险较高
为探讨马来酸罗格列酮对肺腺癌（A549）细胞中PGC-1α表达和活性的影响，以及抑制细胞增殖的机制，首先构建pGL3-PGC-1α promoter重组质粒，转染人肺腺癌A549细胞，用双荧光素酶报告基因系统检测马来酸罗格列酮对PGC-1α启动子转录活性的影响；实时定量PCR检测胞内PGC-1α-mRNA的表达；用Mitotracker green染色, 流式细胞仪检测线粒体质量；细胞计数检测马来酸罗格列酮对A549细胞体外增殖的影响．结果显示，马来酸罗格列酮能抑制pGL3-PGC-1α-promoter重组质粒的转录活性，降低A549细胞PGC-1α mRNA水平的表达及线粒体质量，并具有明显的剂量依赖性（P<0.05）．其抑制PGC-1α表达和活性的IC50（约为80 μmol/L）,与马来酸罗格列酮抑制A549细胞增殖的IC50（约为80 μmol/L）相符．马来酸罗格列酮能抑制A549细胞中PGC-1α的表达与活性，进而降低细胞中的线粒体质量．这有可能是罗格列酮抑制A549细胞增殖的原因之一．
高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的E6基因在宫颈癌的发生中起关键作用，特异siRNA能有效抑制宫颈癌HeLa 细胞内HPV18 E6基因的表达，诱导肿瘤细胞凋亡.为进一步探讨HPV18 E6-siRNA诱导HeLa 细胞凋亡的分子机制，针对HPV18-E6基因设计siRNA序列，利用人源U6启动子为模板，经PCR表达框架法体外扩增，转染宫颈癌HeLa细胞抑制HPV18 -E6基因表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡.对转染前后HeLa细胞总RNA样品进行荧光标记后，与Agilent Human 1A寡核苷酸芯片杂交、扫描、数据分析及标准化处理，确定表达差异的基因并经荧光定量PCR对部分基因进行验证，结合PANTHER数据分析系统，将这些基因按照生物学功能进行归类，查阅GenBank数据库及相关文献，对其结果进行深入分析及讨论.在检测的18 716个基因和EST中，共筛出差异表达基因359个，其中307个基因表达上调，52个基因表达下调，主要包括细胞周期相关基因CCNG1、p21；凋亡相关基因CASP4、CASP6、IGFBP3、DFFA；泛素蛋白酶解途径相关基因E6-AP、UBE2C；角化细胞分化相关基因KRT4、KRT6E、KRT18；抑癌基因RECK、VHL等.研究结果表明，HPV18 -E6基因抑制引起的细胞凋亡效应主要是通过P53信号途径和泛素蛋白酶解信号途径调节细胞周期相关基因和凋亡相关基因的表达，从而抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡.同时，抑癌基因的激活，角化细胞分化和免疫相关基因的表达上调，都说明了E6抑制后肿瘤细胞恶性转化程度的下降.
PIWI作为AGO蛋白家族的成员，在睾丸中特异表达，在精子形成过程中扮演着重要角色.已有文献报道，PIWIL2也广泛存在于多种肿瘤中，与肿瘤的发生相关.本文旨在确定PIWL1在不同肿瘤细胞中的表达差异性，进而初步探讨PIWIL1的表达差异与肿瘤发生发展的关系.半定量RT-PCR和Western 印迹检测多种肿瘤细胞中,PIWIL1在mRNA水平及蛋白水平的表达情况，进一步用免疫组化和免疫荧光检测PIWIL1在细胞中的表达及定位.PIWIL1在多种肿瘤细胞中的表达存在差异，其中一些肿瘤细胞中的表达水平较高，包括卵巢癌，前列腺癌，肝癌，胃癌等细胞.对于肿瘤细胞而言，PIWIL1定位于细胞浆中.因此，PIWIL1在多种肿瘤细胞中的表达差异性可能为肿瘤发生发展的研究提供新的线索.
为了制备灵敏的可检测多种烈性病毒性病原体的基因芯片，本研究设计了针对21种烈性病毒性病原体的基因芯片检测探针，每种5条，长50 bp.并以甲病毒属的基孔肯亚病毒和黄病毒属的黄热病毒细胞培养物为检测模型，摸索了合适的病毒基因处理与扩增方法.将提取的病毒RNA先用DNase Ⅰ处理，以去除掉其中的DNA分子，然后利用病毒属特异性引物进行反转录，以引导病毒基因组的合成，从而尽可能地减少宿主细胞基因成分的干扰.进行随机PCR扩增后将扩增产物与基因芯片进行杂交，分别出现了4条基孔肯亚病毒探针信号和5条黄热病毒的探针信号，说明所设计的检测探针具有较好的特异性，可用于这2种病毒的特异性检测.这种病毒基因样品的处理和扩增方法也为此基因芯片的临床应用奠定了基础.
丙酮酸磷酸双激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK; EC 2.7.9.1）能够可逆催化磷酸烯醇式丙酮酸（phosphoenolpyruvate, PEP）、单磷酸腺苷（adenosine monophosphate, AMP）和焦磷酸盐（pyrophosphate, PPi）生成三磷酸腺苷（adenosine triphosphate, ATP）、无机磷酸盐（orthophosphate, Pi）和丙酮酸（pyruvate）.以热玫瑰小双孢菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到了编码PPDK的基因，将此基因片段插入表达载体pET24a (+)，在大肠杆菌中表达C端融合His-Tag的重组PPDK.与我们先前表达的N端融合His-Tag的PPDK相比，酶的活性提高了20倍，提示该酶的N端对活性十分重要.重组PPDK单体分子量为98 kD.经过镍亲和层析和超滤后，重组PPDK基本达到电泳纯.重组PPDK与荧光素酶偶联能够形成1个ATP-AMP循环反应，在该循环反应中，荧光素酶催化ATP生成的AMP和PPi能够被PPDK重新转化成ATP，产生一个持续稳定的信号.
