中国生物化学与分子生物学报

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刘玉鲲,李德全

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1085-1091.

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胞质分裂(cytokinesis)是细胞分裂的最后关键一步，产生2个含有完整的遗传物质和胞质细胞器的子细胞．植物胞质分裂包括细胞板的形成，这一过程是在成膜体的牵引下由一些植物特有的步骤完成的．促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联途径在真核生物中是高度保守的，由MAPKs，MAPKKs，MAPKKKs组成，通过MAPKKK→ MAPKK → MAPK的逐级磷酸化传递细胞信号．近来的研究表明， NACK—MAPKKK→MAPKK→MAPK→MAP65构成的信号途径调控植物细胞的胞质分裂．本文就这一信号途径，总结了植物胞质分裂机制的研究进展，并对其中的问题进行了讨论与展望．

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穿膜肽的内化机制及其应用

张兰馨，张书祥

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1092-1096.

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穿膜肽是一类具有特殊穿膜功能的多肽分子，能携带其它分子甚至超分子颗粒穿膜进入细胞内部．早期研究认为，其进胞是一种无需受体、也不存在饱和状态的非经典胞吞行为．近年研究表明，其穿膜机制可能与其含有的氨基酸种类有很大关系．现在，穿膜肽的穿膜过程称为巨型胞饮行为，它与传统的胞吞形式很相似．当然，还可能存在着其它的进胞方式而没有被证明或发现．关于穿膜肽的应用也是人们最感兴趣的，在很多领域的研究都在进行并不断取得进展．不论是生物界还是医学界，穿膜肽都被认为将是一类非常有发展潜力的多肽分子．

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PARP的生物学与病理学功能

于孟斌，杨予涛，周晓巍，黄培堂

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1097-1102.

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PARP1是真核细胞内具有多聚腺苷酸二磷酸核糖基（PAR）催化活性的蛋白酶，目前发现18个具有该活性的蛋白．多聚腺苷酸二磷酸核糖基化反应是细胞内进行的翻译后修饰，该修饰作用于许多蛋白，涉及到染色体的稳定，DNA损伤修复，基因转录，细胞的增长，死亡和凋亡等方面．在生理病理方面与炎症，肿瘤，衰老等疾病相关联．本文针对以上方面进行了总结和讨论．

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SFRP分子对心脏发育的影响

金雅琼，贾竹青，周春燕

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1103-1108.

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Wnt信号通路对心脏发育起着重要的作用.分泌型卷曲相关蛋白（SFRP）家族作为调控 Wnt信号的重要分子，对心脏发育和心肌分化的作用也越来越被人们所重视.最近，研究人员们对SFRP家族蛋白有了新的认识，认为它们不仅具有拮抗Wnt的作用，还对Wnt信号的转导有着复杂的调节作用.本文就SFRP分子与Wnt信号转导对心脏发育的影响进行综述.

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食物信号钟

倪银华，吴涛，顾佳黎，傅正伟

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1109-1116.

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生物钟是指生物体自身具有的一种自主时间调控机制，这种机制能使生物体感知并适
应环境中的光、食物和温度等周期信号.限时饮食动物能预期饮食时间，并表现出食物预期
性活动、体温上升以及皮质酮分泌等.这些食物预期性节律被认为是受食物信号钟（FEC）控
制的.研究表明，食物信号钟可能是由一个或者多个整合在一起的震荡子组成的生理结构，
它控制着各种食物信号相关的生理节律.本文综述了食物信号钟存在的可能位点、与其相关
的生物钟基因以及参与生物钟信号输入输出相关的神经化学信号通路.

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siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP1)的表达沉默

田生礼，刘桂云，郑硕，梁惠卿，刘士德，张建华

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1118-1125.

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利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白（MRP1）基因表达质粒pSI REN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断MRP和全长MRP1 cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒．质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因，pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明，与pSIREN-siRNA1相比，pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达．为了沉默全长MRP1基因的表达，pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞．Western印迹和MTT分析表明，pSIREN-siRNA2和pSIREN- siRNA3能有效抑制190 kD MRP1在HEK293细胞中的表达，而pSIREN-siRNA1则不能．pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性．RNA二级结构预测结果分析表明，siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数，siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3．这些数据提示，siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用．

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.限制性siRNA干涉文库的构建以及影响HeLa细胞增殖新功能基因的扫描

曾彬，宁振飞，宁一纯，隆艳艳，袁辛，经孜之，杨荣存

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1126-1134.

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利用RNA干涉文库进行大规模高通量的功能基因扫描，已成为发现新功能基因的重要方式和手段．为了寻找在细胞增殖和分化过程中的新功能基因，根据斯坦福大学公布的与人类胚胎干细胞和造血干细胞增殖和分化过程中有关基因的基因芯片的分析结果，组建了与细胞增殖和分化有关的RNA限制性干涉文库．该文库包括靶向各类基因的载体，如包括转录因子、各类蛋白激酶、细胞周期调控蛋白以及一些未知功能基因在内的225个基因．利用这个限制性RNA干涉文库对控制HeLa细胞增殖的基因进行筛选．并通过WST-1高通量检测，发现了2个同HeLa细胞增殖相关的基因：CNKSR3(Homo sapiens CNKSR family member 3)和Fosl2 Homo sapiens FOSlike antigen 2)，并初步证实：沉默CNKSR3会促进HeLa细胞的增殖，而沉默Fosl2则抑制HeLa细胞的增殖功能．

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多效生长因子通过JNK信号通路负调控Schlafen2基因表达

方玲，胡迎春，杨柳，刘梦伊，刘昕，潘兴斌，吴德昌，霍艳英，

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1135-1139.

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实验室前期研究发现，多效生长因子（pleiotrophin，PTN）基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞中Schlafen2 (Slfn2)基因高表达.为了探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路，应用Western印迹检测外源性PTN因子（终浓度50 ng/μl）对Ptn沉默细胞JNK磷酸化水平的影响；应用Northern 印迹分别检测JNK和p38通路特异性抑制剂对Ptn沉默细胞Slfn2基因转录水平的影响.结果发现，Ptn沉默细胞内JNK磷酸化水平高于对照细胞，外源性PTN处理后沉默细胞内JNK磷酸化水平下调；阻断JNK通路呈时间依赖性抑制Ptn沉默细胞中Slfn2基因转录，阻断p38通路对Ptn沉默细胞中Slfn2转录水平没有明显影响结果提示,Ptn可能通过抑制其下游JNK/MAPK通路来负调控Slfn2的表达.

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西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白编码序列的克隆及其盐胁迫下的表达

刘关君;田旭;刘昌财;曲春浦;刘桂丰杨传平

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1140-1146.

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根据西伯利亚蓼地下茎抑制消减文库(SSH)中获得的非特异性脂质转移蛋白(non-specific lipid transfer protein, nsLTP)EST序列，应用RACE技术克隆了具有Poly A的全长cDNA序列.该序列全长604 bp,其5′非翻译区65 bp,3′非翻译区227 bp,开放阅读框编码103个氨基酸残基；序列分析表明,该基因具有N端信号肽，具有nsLTP家族共有的典型保守区域，属nsLTP家族基因，命名为PsnsLTPs；荧光定量PCR分析表明，PsnsLTPs在西伯利亚蓼叶、茎、地下茎中均有表达.在3%NaHCO3诱导表达下，该基因在地下茎中表达明显受盐胁迫的诱导，推测该基因在抵御盐胁迫时具有重要作用.

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Heregulin-α促进小鼠妊娠期乳腺上皮细胞的增殖/分化及β酪蛋白的分泌

耿丽晶，李庆章

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1146-1151.

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为阐明heregulin-α（HRG-α）对乳腺发育的调控作用及其机理，采用组织培养、毛细管电泳、Western印迹、ELISA等方法,首次对小鼠妊娠期HRG-α对乳腺形态发育、β酪蛋白表达和分泌、Rab3A蛋白表达以及HRG-α诱导的信号转导途径中信号分子的磷酸化状态的影响进行了系统研究．结果表明,在妊娠期，HRG-α能够促进STAT5、p42/p44、p38和PKC的磷酸化以及Rab3A蛋白表达，刺激乳腺上皮细胞的增殖和分化，增加并维持β酪蛋白的表达和分泌．

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红外荧光素Alexa Fluor 647标记的2型腺相关病毒保持天然的感染活性

贾书勤，张凤兰，丁卫

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1152-1157.

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近年来红外荧光素的研发及相应的标记技术的进展在生物医学领域的研究中备受关注，通过与尖端仪器的结合在一系列生物样本的检测中得到广泛的应用. 然而，红外荧光标记技术在病毒感染生物学研究中的应用却少见报道.本文建立了Alexa Fluor 647（AF647）红外荧光素标记重组2型腺相关病毒（AAV2）的方法，并通过凝胶电泳的银染、红外荧光成像和透射电镜分析等手段，对标记病毒的结构和形态与未标记的病毒进行了细致的比较，同时进一步鉴定了其感染293T细胞后的转导活性.结果发现,AAV2在标记后的理化性质和感染活性均未发生改变. 应用狭缝印迹和激光共聚焦显微成像技术,分别对标记病毒的细胞摄取效率和在宿主细胞内的分布进行描述，为红外标记AAV2在研究中的应用提供了范例.AF647标记的 AAV2为腺相关病毒的感染动力学研究提供了新的手段，具有敏感度高、抗荧光漂白和低非特异干扰等优点，并且对直接有效地结合形态学分析和生化分子生物学检测，具有重要的应用价值.

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血红素加氧酶1 调节γ谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达在慢性阻塞性疾病大鼠肺组织中的作用

王梅芳,，戴爱国刘玉全

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1158-1164.

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血红素加氧酶1（heme oxygenase-1,HO-1）是催化血红素降解酶类中最易被诱导的一种，增加HO-1表达有抗氧化的细胞保护作用；而γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（gamma-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS）是肺组织中最重要的抗氧化酶之一,通过免疫组化、免疫印迹、逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)技术研究慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）大鼠肺内HO-1、γ-GCS mRNA及其蛋白质表达，并检测 HO-1 活性，同时利用HO-1诱导剂氯高铁血红素(hemin) 和其活性抑制剂锡原卟啉(SnPP)对其进行干预，在整体水平探讨HO1在COPD中对肺功能及γ-GCS表达的影响. 结果显示, 氯高铁血红素组肺功能较COPD组及SnPP组显著改善；氯高铁血红素组及SnPP组Ho-1 mRNA及其蛋白质的表达较COPD 组升高；氯高铁血红素组HO-1 的活性较COPD升高而Snpp组HO-1 的活性较COPD 组降低；氯高铁血红素组γ-GCS mRNA及其蛋白质表达水平高于SnPP及COPD组；线性回归分析显示,HO-1蛋白质表达水平和活性影响γ-GCS 表达.结果表明,HO-1可通过诱导γ-GCS的表达在COPD中起保护作用；而HO-1可能通过酶活性依赖和非酶活性依赖两种途径上调γ-GCS基因表达.

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应用RNAi文库筛选HBV复制相关基因

曾贵利，沈薇，吴进峰，任红孙航贺彩霞唐开福

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1165-1169.

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深入研究HBV复制机理，筛选参与HBV复制的基因，可能为开发抗乙肝病毒新药提供新的靶点．本文拟建立一种筛选HBV复制相关基因的方法: RNAi文库感染HepG2.2.15细胞后，利用免疫磁珠收集HBsAg表达降低的细胞，提取DNA，PCR扩增siRNA编码序列，将PCR产物克隆入T-easy载体，随机挑选克隆测序，发现DDB1基因可能参与HBV复制．本试验建立了一种筛选HBV复制相关基因的方法，为大规模全基因组筛选参与HBV复制的基因奠定了基础．

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中国狼（Canis lupus chanco）线粒体全基因组序列分析

孟超，张洪海，陈玉才

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1170-1176.

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参照近缘物种线粒体全基因组序列,设计14 对特异引物,采用PCR产物直接测序法测得中国狼线粒体基因组全序列，并分析其基因组特点和各基因的定位.用pDRAW32软件，预测12种限制性酶的酶切图谱.结果表明,中国狼线粒体基因组全长16 774 bp, 包括13 个蛋白质编码基因、2 个rRNA 基因、22 个tRNA 基因和1个非编码控制区.除ND2、 ND3和ND5 基因以ATA作为起始密码子外，其它基因的起始密码子均为ATG.除COXⅢ、 ND4、 ND3基因的终止密码子分别为不完全的T,T,TA；ND2，COXⅡ，Cytb基因的终止密码子分别是TAG、TAG、AGA外；其余基因均以TAA作为终止密码子，而欧亚狼和狗COXⅡ基因则以TAA终止.基于近缘哺乳动物15种近缘物种的线粒体基因组的12S rRNA 和 16S rRNA 基因全序列，用邻近法、最大简约法和最大似然法构建系统进化树，系统进化关系与传统的系统分类基本一致.并在已有文献的基础上，探讨了中国狼的进化地位.

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银环蛇线粒体基因组全序列分析

陈念,赵树进韩丽萍

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(12): 1177-1182.

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根据GenBank公布的蛇类物种线粒体基因序列和已知的引物序列，总共设计和合成了9对引物.采用保真度较高的Ex-Taq酶，以总基因组DNA为模板进行PCR扩增，产物纯化后进行TA克隆和步移测序，拼接后获得了全长17 144 bp银环蛇线粒体基因组全序列.其共编码13种蛋白质、2种rRNA和22种tRNA.这些基因没有内含子，基因间排列紧密，仅有极少或完全没有核苷酸，甚至相互重叠.除了含有2个调控线粒体基因组复制和转录的控制区外，其余基因在长度和位置等方面与其它脊椎动物均具有较高的同源性.

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