包晓丹, 张玉秀, 冯伟华, 朱红艳, 苗文婷, 孙晓琳, 福泉, 包丽丽
代谢功能障碍相关脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease , MASLD)已跃居我国慢性肝病首位,发病机制尚未完全阐明。本研究旨在探讨mTOR信号通路(包括mTORC1和mTORC2)在肝细胞脂质代谢中的调控作用及其分子机制。首先以小鼠肝细胞AML-12为模型,建立油酸(OA)诱导的脂质累积模型,CCK8检测结果显示,0.4mmol/L OA对细胞生长无毒性,且油红O染色及TG含量检测结果显示,OA处理可以显著促进细胞内外脂质累积,Western印迹结果显示,OA处理可激活mTORC1信号通路。采用mTORC1特异性抑制剂雷帕霉素,激动剂MHY1485,以及siRNA介导的Raptor和Rictor基因沉默技术,通过Western印迹、RT-qPCR和TG含量检测等方法,分析mTOR信号通路活性、脂质合成相关基因(PPARG、DGAT1、GPAT4、ACSL1)表达及甘油三酯(TG)代谢变化,结果显示,雷帕霉素抑制或Raptor沉默均能降低mTORC1通路活性,减少脂质合成相关基因表达和TG含量;而MHY1485激活mTORC1则进一步加剧脂质沉积。此外,沉默Rictor抑制mTORC2通路后,同样可降低p-AKT表达、TG含量及脂质合成基因转录水平。综上所述,本研究证实,在OA诱导的肝细胞脂质累积模型中,mTORC1和mTORC2信号通路均被激活,并共同通过上调脂质合成相关基因(PPARG、DGAT1、GPAT4、ACSL1)的表达,正向调控甘油三酯的合成,从而促进肝细胞的脂质沉积。