中国生物化学与分子生物学报

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陈声灿, 肖丙秀, 郭俊明

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1055-1061.

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非编码RNA(non-coding RNA，ncRNA)是生物体内普遍存在，且对生命活动具有重要调控作用的生物分子.以微RNA（microRNA，miRNA）和长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）为代表的ncRNA分子在肿瘤发生和发展过程中都有重要的作用.越来越多研究发现，miRNA和lncRNA之间的关系是非常密切的，某些lncRNA(如H19和BIC)可以作为miRNA的前体，通过加工成miRNA而发挥作用.有些miRNA通过作用于lncRNA影响肿瘤的发生(如：miR-129与MEG3，let-7与H19)；同样地，有些lncRNA通过作用于miRNA影响肿瘤的发生(如：HULC与miR-372，PTCSC3与miR-574-5p，ciRS-7与miR-7，Sry与miR-138).miRNA与lncRNA之间既可以直接相互作用，也可以通过其它分子（特别是蛋白质或蛋白质复合物）间接地影响着肿瘤的发生和发展.揭示miRNA和lncRNA相互作用在肿瘤发生中的作用可以为肿瘤的诊断和治疗提供新思路.

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抑癌基因Mig-6与肿瘤

韩戍君, 邵永平, 刘健康

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1062-1068.

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有丝分裂诱导基因6(MIG-6)基因位于含有肿瘤抑制基因的染色体区域（1p36），其编码蛋白质可作为骨架衔接蛋白发挥调节胞内信号转导的作用.在细胞内，MIG-6基因在生长因子、激素以及各种压力刺激作用下，能增加其蛋白质的表达量，进而通过其不同的功能片段（CRIB区域、脯氨酸丰富区、14-3-3蛋白结合区和ERB结合区），与各信号通路中受体本身或其下游信号分子相互作用，发挥激活或抑制信号通路作用.MIG-6可受到转录、转录后、翻译后和表观遗传水平的表达调控，使其表达增加或降解.在多种肿瘤细胞中，MIG-6表达量都显著下降. MIG6的过量表达能降低EGFR等相关信号通路的活性，抑制肿瘤细胞的生长增殖，因此MIG-6具有肿瘤抑制作用.相反，MIG-6表达缺失则会加速癌症的发生发展.

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肝细胞生长因子抑制剂——NK4的抗肿瘤作用

蔡超, 侯玲玲, 胡红刚

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1069-1076.

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肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)是一种多功能的细胞因子，其生物学活性由c-Met蛋白所介导.HGF/c-Met信号通路在肿瘤生成、侵袭、转移以及肿瘤新生血管生成方面起重要促进作用. 因此, HGF/c-Met信号转导通路可以作为抗肿瘤药物设计的靶点.其中，HGF-α链N端447个氨基酸组成的NK4蛋白是HGF的特异性拮抗剂，它不仅通过抑制HGF/c-Met系统的信号转导发挥抗肿瘤效应；而且可以通过拮抗HGF和其它血管生成因子如成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factors, FGF)、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的活性，进而抑制肿瘤新生血管生成，最终导致肿瘤细胞的凋亡.NK4的这种双重抗肿瘤功能使其成为一类很有前景的新型抗肿瘤药物.本文就NK4对肿瘤的抑制作用及其机制的研究进展进行综述.

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GBV-C与艾滋病毒的相互作用及其机制

刘晓佳, 冯悦, 夏雪山

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1077-1083.

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GBV-C（GB Virus C)是20世纪90年代中期发现的一种单股正链RNA病毒，属黄病毒科Pegivirus属，全基因组长约9.4 kb，编码约2 900个氨基酸序列.早期认为,该病毒与肝炎有关，但随后的研究发现,该病毒对人类无致病作用.最近的研究表明,GBV-C与艾滋病毒（人类免疫缺陷病毒，human immunodeficiency virus，HIV）共感染情况下可抑制HIV的增殖、提高机体免疫、延缓HIV 患者疾病进程.进一步研究GBV-C与HIV的相互作用及其机制可能会为艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）治疗提供新思路. 本文就GBV-C与HIV-1相互作用的两种主要类型——间接和直接的作用以及其机制进行了综述.

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DNA羟甲基化与表观遗传学调控

汤琳琳, 麦一峰, 段世伟

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1084-1091.

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表观遗传学中的DNA甲基化与疾病的发生发展密不可分. DNA甲基化中的5-甲基胞嘧啶易发生氧化形成5羟甲基胞嘧啶.此过程又称为羟甲基化修饰，已成为表观遗传学研究的一种新热点.羟甲基化与10-11易位家族蛋白（ten-eleven translocation，TET）的作用密切相关，它参与了基因的表达调控以及DNA去甲基化过程. 最近的羟甲基化研究主要集中在癌症和精神性疾病.针对日趋增多的相关研究，本文对DNA羟甲基化进行了全景式综述.

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接头蛋白Crk与肿瘤

田玉瑶, 刘淑清

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1092-1097.

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Crk是一种重要的细胞内信号接头蛋白，含有SH2和SH3结构域，在信号传递过程中不仅承上启下，对信号强度还有着调控作用.迄今主要发现了4种Crk分子，即vCrk、CrkⅠ、CrkⅡ和CrkL(CrkLike).CrkⅡ和CrkL在分子结构上具有高度同源性，但对信号分子却具有不同的偏好性，从而体现出功能差异.本文就接头蛋白Crk的结构、Crk与相互作用蛋白质的作用机制以及与肿瘤的发生发展关系进行了阐述.

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DHRS4L2非编码RNA调控CPNE6基因表达

李一凡, 黄东阳, 王磊, 杜冀晖, 刘戈飞, 王永, 周蓓, 李蓉, 麦丽文

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1098-1105.

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DHRS4/NRDR基因编码一种属于SDR家族的酶，在维甲酸合成、类固醇代谢和苯甲基代谢中发挥生物合成催化作用.DHRS4基因定位于14q11-2，有两个相似的拷贝基因，分别为DHRS4L2和DHRS4L1.我们前期发现了DHRS4L2基因一个上游转录起始位点，命名为DHRS4L2-Ea.在本研究中，我们用RT-PCR和双脱氧测序法发现一个新的从DHRS4L2-Ea转录的选择性剪接亚型DHRS4L2-900a(KC237374).同时RT-PCR结果显示在SK-N-SH细胞DHRS4L2-Ea选择性剪接亚型中DHRS4L2iso(AY616183)表达最多，为主要亚型.在SK-N-SH细胞过表达DHRS4L2-800a(AY920361)使DHRS4L2-Ea 基因下游CPNE6 mRNA表达下调.在HeLa细胞过表达DHRS4L2800a(AY920361)或DHRS4L2-900a(KC237374) 进一步表明DHRS4L2Ea抑制CPNE6表达的作用.定量PCR结果显示si-RNA抑制DHRS4L2-Ea表达使CPNE6 mRNA表达上调.亚硫酸盐测序结果显示在SK-N-SH转染DHRS4L2-800a(AY920361)的样本中CPNE6基因DNA CpG甲基化增加.综上所述，本研究揭示DHRS4L2表达的非编码RNA抑制其下游基因CPNE6的表达.

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蜕皮激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控

沈关望, 林英, 吕毅华, 王继岩, 邢润苗, 夏庆友

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1106-1112.

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蜕皮激素（20-hydroxy ecdysone，20E）是由前胸腺分泌的能调节节肢动物昆虫纲、甲壳纲等动物蜕皮的激素. 家蚕属于完全变态昆虫，一生经历卵、幼虫、蛹、成虫四个发育时期. 20E在家蚕发育过程中有不可替代的作用. 本研究通过酶联免疫吸附反应（ELISA）测定家蚕变态期前后血淋巴中20E滴度，发现在卵黄原蛋白基因 (Bombyx mori vitellogenin, BmVg) 高量表达前的雌雄血淋巴中20E含量没有明显差异，但含量变化趋势与BmVg表达趋势相一致. 用20E注射上蔟后60 h的家蚕和添食5龄家蚕, 能诱导雌性和雄性脂肪体中BmVg表达和蛋白合成. 调查处理后的家蚕所产卵中的卵黄磷蛋白（BmVn）含量及重量，发现蚕卵中BmVn含量及蚕卵重量都明显增加|本研究还通过脂肪体体外培养,证明了20E是直接作用于脂肪体来诱导BmVg的表达. 本研究结果表明，20E是通过诱导脂肪体中BmVg的转录来增加蚕卵中BmVn积累，从而最终使得蚕卵重量也相应增加.

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高脂饮食诱导肝脏MED1特异性敲除小鼠呈高胆固醇血症

李倩薇, 刘芮菡, 赵四海, 贾玉枝, 白亮, Janardan K. Reddy, 徐小平, 刘恩岐

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1113-1118.

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为研究肝脏MED1对脂质代谢的影响，以肝脏MED1特异性敲除（MED1ΔLiv）小鼠为模型，对其进行基因型鉴定，H&E染色观察肝脏组织学变化，免疫组织化学染色检测肝脏MED1蛋白表达|高脂饲料（脂肪含量为60%）饲喂小鼠，并分别在0、1、2 和4 周动态检测血浆胆固醇和甘油三酯及血糖水平. 结果显示，与MED1fl/fl小鼠相比，MED1ΔLiv 小鼠仅肝脏MED1 mRNA表达水平显著降低，其它组织表达无明显变化. 高脂饲喂1 周和2 周，MED1ΔLiv小鼠血浆总胆固醇水平显著升高（P<0.01）|普通或高脂饲料饲喂状态下,与MED1fl/fl小鼠相比,MED1ΔLiv 小鼠血糖水平均显著降低（P<0.05）. 短期给予高脂饲料可诱导MED1ΔLiv 小鼠呈现高胆固醇血症，提示MED1在胆固醇代谢中发挥重要调控作用.

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陆地棉线粒体nad6基因mRNA无常规终止密码子

张晓, 孟志刚, 孙国清, 周焘, 史计, 于源华, 张锐, 郭三堆

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1119-1125.

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植物线粒体nad6基因编码NADH（还原型辅酶Ⅰ）脱氢酶第6亚基，前期研究发现,该基因可能与棉花细胞质雄性不育相关，但该基因的转录情况尚不清楚.本研究利用PCR测序、Southern印迹方法发现,陆地棉线粒体基因组（mtDNA）中nad6基因长621 bp，且为单拷贝. RT-PCR及环化RT-PCR分析发现，其mRNA在终止密码子前-14或-15 nt处提前终止|虽然该基因mRNA编码区存在12处RNA编辑（C-U）位点，但并未产生新的替代的终止密码子|基因mRNAs尾端poly（A）处含有0、1、2或4个“A”，也并未与前方相邻碱基凑成新的终止密码子,即：该基因mRNA无常规终止密码子（UGA，UAG，UAA）.本研究结果提示，棉花线粒体nad6基因mRNA很可能有其它的终止密码子.针对这种情况对植物线粒体如何翻译无常规终止密码子的mRNA进行了讨论.

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沼水蛙抗菌肽brevinin-2GHa1分离纯化及结构分析

俞世宏, 陈涛涛, 户佩, 洪晶

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1126-1133.

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目前,已自青蛙皮肤分泌物中分离获得多种具有较强抗菌活性的多肽．本文利用电刺激法自沼水蛙背腺和耳后腺获得其皮肤分泌物，利用凝胶过滤色谱(Sephadex G-50)和反相高效液相色谱 (reverse-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)分离纯化，获得一种新型抗菌肽,命名为brevinin- 2GHa1. 抑菌实验显示,该抗菌肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和沙门氏菌的最小抑制浓度分别为： 7.8、3.9、2.0 μg/mL和250.0 μg/mL. 该抗菌肽在水中为无规卷曲结构,在浓度为10 mmol/L SDS水溶液和不同浓度三氟乙醇水溶液中则呈α-螺旋结构，该抗菌肽结构的研究对阐明其抑菌机制具有重要作用.

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沉默FOXQ1可逆转SW480细胞的上皮-间质转化

彭旭东, 魏正强, 彭红霞, 王强, 康清杰, 骆赞

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1133-1140.

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FOXQ1是FOX家族的的重要成员之一，其参与了多种人类肿瘤的上皮间质转化(epithelial- mesenchymal transition，EMT).本研究设计合成了FOXQ1基因的shRNA（short hairpin RNA），用此转染SW480细胞，通过显微镜观察细胞形态，Transwell小室、细胞黏附试验检测转移能力及黏附能力,以探索FOXQ1与结直肠癌细胞EMT的关系.结果显示,沉默FOXQ1后，SW480细胞顶底极性及细胞间紧密连接增加，侵袭、迁移的细胞数目减少，同种黏附能力增加,异种黏附能力降低.进一步的机制研究表明,沉默FOXQ1基因可以导致SW480细胞的上皮标志因子E-cadherin表达显著增高,而间质细胞标志因子N-cadherin、Vimentin及MMP2表达均降低.以上结果表明，沉默FOXQ1基因可以逆转SW480细胞EMT，其机制可能与E-cadherin的上调和Ncadherin、Vimentin、MMP2的下调有关，这为进一步研究FOXQ1在结直肠癌发生发展中的作用提供实验基础.

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脐带血IGF-1浓度和DNA甲基化与巨大儿发生的相关性研究

张积太, 刘子巍, 林冲, 吴克乐, 胥新芸, 王玉环, 闫洪涛, 杨新军

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1141-1146.

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为探究脐带血中胰岛素样生长因子Ⅰ（insulinlike growth factor 1, IGF-1）的浓度和基因甲基化变化与巨大儿发生的关系,选择152名正常妊娠足月分娩的产妇和新生儿为对象，其中68名巨大儿，84名正常出生体重儿.收集产妇及新生儿的基本信息和脐带血样品. 采用双抗体夹心ABCELISA法测定脐带血IGF-1蛋白浓度，基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）测定脐带血IGF-1基因启动子区CpG位点的甲基化水平. 结果显示，脐带血IGF-1启动子区CpG位点均呈低甲基化状态. 以所有研究对象出生体重的上四分位数（4 260 g）为拐点，出生体重＜4 260g组的脐带血IGF1浓度显著高于出生体重≥4 260 g组（P=0.015），且与出生体重呈正相关关系（r=0.242，P=0.011）. 表明在出生体重＜4 260 g范围内，脐带血IGF-1浓度的增加贡献于出生体重的增长. 但当胎儿过大时，存在负反馈调节机制，使脐带血IGF-1浓度降低，以限制胎儿过度增长. 这些结果提示，脐带血IGF-1浓度与出生体重呈双向性关联，两者均与处于低甲基化状态的脐带血IGF-1的甲基化程度无关.

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MiR-125a-5p抑制3T3-L1前体脂肪细胞分化

纪洪雷, 宋成创, 李优磊, 李岳峰, 郑雪莉, 杨公社

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1147-1154.

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MicroRNAs(miRNAs) 是一类在脂肪组织发育中发挥重要作用的小非编码RNA. 为探明miR-125a-5p在3T3-L1前体脂肪细胞中的作用，采用实时qPCR检测了miR-125a-5p在小鼠各组织及3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中的表达|使用经化学修饰的miR-125a-5p模拟物agomir及抑制剂antagomir转染3T3-L1前体脂肪细胞，采用实时qPCR 和 Western印迹检测成脂标志基因Pparγ和aP2的表达，油红O染色观察脂肪细胞脂质积累. 结果显示，miR-125-5p在小鼠脂肪组织中高丰度表达，在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中表达下降.过表达miR-125a-5p，与对照组相比，成脂标志基因Pparγ和aP2在mRNA和蛋白质水平均明显下降|油红O染色及定量结果显示脂质积累减少. 抑制剂处理结果显示，Pparγ和aP2在mRNA和蛋白质水平均有不同程度上升，但油红O染色及定量结果差异不显著. 以上结果表明，miR-125a-5p在脂肪细胞分化中发挥负调控作用.

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一种精子表面GPI锚定蛋白初步鉴定方法的建立

辛玲, 王慧萍, 王小强, 于和鸣

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(11): 1155-1159.

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精子表面糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白(GPI-Aps)在精子不同阶段都发挥着关键作用.本研究介绍了嗜水气单胞菌毒素（aerolysin）作为生物探针来鉴定精子表面的GPI锚定蛋白.实验依次进行了嗜水气单胞菌培养、毒素提取纯化、多克隆抗体制备以及三明治蛋白印迹验证实验.凝胶蛋白分离实验显示，硫酸铵沉淀加Sephadex G-100层析柱纯化得到了分子质量为45 kD高纯度细菌毒素|蛋白印迹实验验证了制备的多克隆抗体的特异性|三明治蛋白印迹结果显示,嗜水气单胞菌毒素能识别出12条精子脂筏提取蛋白条带，其分子质量主要分布在15~130 kD之间|Alex488标记的免疫荧光实验显示,嗜水气单胞菌毒素识别的GPI锚定蛋白主要分布在精子头部和尾部.研究结果提示,嗜水气单胞菌毒素能够有效地识别精子表面的GPI锚定蛋白.

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