中国生物化学与分子生物学报

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高安定林宝顺刘宽灿兰小鹏

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 397-403.

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信号转导和转录活化因子 3(signal transducers and activators of transcription 3， STAT3) 是参与一些细胞因子以及生长因子介导的信号转导的转录因子，在正常细胞内调控生长、增殖、分化以及凋亡等一系列生理活动.已有研究表明，JAK/STAT、MAPK、mTOR途径均可激活STAT3，持续的STAT3活化与肿瘤细胞的增殖、抗凋亡、侵袭、转移、血管形成及免疫逃逸密切相关|导致靶向抑制STAT3信号途径的寡核苷酸、小分子抑制剂、肽适配子在抗肿瘤治疗中的应用被广泛地开展. 实验表明,它们具有抑制肿瘤的效果.本文重点综述了近几年STAT3在抗肿瘤进程中的功能及其在抗肿瘤治疗中的应用研究进展，并对相关问题进行讨论.

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microRNA对细胞自噬调节

贺强漆正堂丁树哲

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 404-411.

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细胞自噬是细胞内高度保守的细胞自我消化和分解代谢过程，细胞内变性蛋白、衰老和受损的细胞器被转运到溶酶体降解. 自噬过程失调引起多种疾病，包括感染、衰老、神经退行性疾病、癌症和心脏疾病等，因此,自噬过程需要非常精确的调控. MicroRNA是一类在基因转录后水平调控目的基因的功能性小RNA分子.研究发现,microRNA可以通过RNA干扰（RNA interference, RNAi）途径调控某些自噬相关基因(autophagyrelated gene, ATG)及其调节因子.这些microRNA表达异常足以影响自噬水平，使得microRNA成为自噬研究的新视角，同时也使microRNA成为治疗自噬失调引起的疾病的潜在靶点.本文将对有关microRNA参与细胞自噬调控的最新研究动态进行综述.

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miRNAs与衰老相关信号通路的研究进展

荆霞熊兴东刘新光

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 412-418.

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miRNAs是一类负调控基因表达的内源性非编码小分子RNA，在细胞衰老过程中发挥重要作用. 细胞衰老是指可增殖细胞在各种应激下出现细胞周期阻滞，并且丧失增殖能力，进入一种不可逆的、相对稳定的状态. p53、p21、p16、SIRT1、胰岛素/IGF-1及mTOR等蛋白是衰老相关信号通路中的重要分子，参与细胞衰老过程. 研究表明，miRNAs可以通过调控这些衰老相关蛋白所在的信号通路，促进或延缓细胞衰老. 本文综述细胞衰老相关的miRNAs，以及它们对衰老相关信号通路的影响，为深化认识衰老和衰老相关疾病的分子机制奠定基础.

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适配体与病毒性感染诊断及治疗

李红玉阎辉

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 419-424.

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适配体（Aptamers）是通过指数富集的配体系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX）技术，从随机核酸文库中筛选出来的单链寡核苷酸，已在临床医疗及其他领域得到日益广泛的应用.与抗体相比，适配体具有很多优点，如高亲和力、高特异性、分子量小、几乎无免疫排斥反应、结构稳定、易于合成等.可用于适配体筛选的靶标范围非常广，包括有机小分子、蛋白、完整细胞及病毒颗粒等.迅速可靠的病原检测对于病毒性传染病的成功预防和治疗具有重要意义.随着严格筛选和快速分离技术的进步，适配体在病毒感染的检测治疗中显示出巨大的潜力.本文概括介绍了适配体在病毒研究方面的最新应用进展及未来前景.

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RANKL与骨重建

陈秋月商澎

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 425-429.

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骨是一种动态更新的组织，它不断进行骨吸收（bone resorption）与骨形成（bone formation）的平衡，这个过程称之为骨重建（bone remodeling）．核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor κB ligand，RANKL）是骨吸收和骨形成耦联的关键，具有诱导破骨细胞（osteoclast, OC）生成、活化，抑制破骨细胞凋亡的作用．RANKL最初发现于活化的T细胞，但骨重建过程中RANKL主要来源于骨细胞、成骨细胞和骨髓基质细胞．RANKL/核因子κB受体活化因子（receptor activator of nuclear factor κB，RANK）/骨保护素（osteoprotegerin, OPG）信号通路在成骨细胞调控破骨细胞生成的过程中起着重要的调节作用，是维持骨重建平衡的关键．本文就RANKL及其在骨中的分子作用机制作一综述.

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嗜热四膜虫δ微管蛋白基因的克隆、鉴定及细胞定位

许静王伟梁爱华

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 430-436.

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微管蛋白(tubulin)在细胞的结构和功能中发挥着重要作用, α微管蛋白和 β微管蛋白是组成微管的主要因子,γ微管蛋白促使α和β微管蛋白二聚体组装为微管结构. 然而, 4种新的微管蛋白δ-,ε-,ζ-, 和η- tubulin在细胞中的功能并不完全清楚. 本研究从嗜热四膜虫大核基因组数据库中鉴定了一种新的编码δ微管蛋白基因（Tetrahymena delta tubulin 1, TDT1, TTHERM_00335970, http://www. ciliate. org）, TDT1基因转录产生1 326 bp和 1 363 bp两种不同的转录本, 1 326 bp的转录本编码441个氨基酸的多肽; 而1 363 bp的转录本含有37 bp未剪切的内含子序列, 从而导致开发读框发生移码突变现象. 实时荧光定量PCR结果表明, TDT1基因在四膜虫细胞营养生长和有性生殖过程中都有表达, 且在有性生殖过程中的表达显著上调. 免疫荧光定位表明, TDT1蛋白不仅定位于四膜虫基体和有性生殖期conjugation junction结构, 而且在四膜虫的大核和小核中也有定位. TDT1基因敲除发现,该基因不能通过表型分配完全被巴龙霉素抗性基因替代，结果表明, TDT1蛋白在四膜虫细胞中可能具有多种不同的功能, 它的正常表达对四膜虫细胞的生存是必需的.

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AKT1磷酸化转录因子HTF4 Ser559位点并调控其活性

王磊于淼詹轶群李长燕葛常辉杨晓明李围

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 437-447.

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AKT(即也称蛋白激酶B，PKB) 通过磷酸化其下游底物发挥多种生理功能.我们利用串联亲和纯化联合质谱技术发现一个新的由HEB基因编码的AKT候选相互作用蛋白HTF4（helix-loop=helix transcription factors 4, 也称transcription factor 12, TCF12）.通过免疫共沉淀、GST-pull down、共定位实验验证了HTF4与AKT之间的相互作用|采用体内体外实验表明,AKT1磷酸化HTF4的Ser559位点依赖于PI3K途径.突变Ser559位点不改变HTF4的细胞核定位，但降低了HTF4转录活性.这些结果证明HTF4是AKT新的磷酸化底物.进一步研究发现，HTF4表达增强明显抑制了HepG2细胞的迁移，Ser559位点突变进一步增强了HTF4对HepG2细胞迁移的抑制能力. AKT 磷酸化HTF4的具体功能有待更加深入的研究.

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通过蛋白质组学的方法鉴定小G蛋白Rif的相互作用蛋白及初步功能分析

范丽菲

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 448-456.

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Rif(Rho in filopodia)作为Rho小G蛋白家族的一员在调节细胞骨架形态方面有多种作用,可以同时介导压力纤维（stress fibers）和丝状伪足（filopodia）结构的形成.为了进一步研究Rif分子的功能, 通过蛋白质组学的方法在高表达内源性Rif蛋白的HeLa细胞中寻找其新的相互作用蛋白.通过分析,发现了Rif与输出蛋白5（exportin 5）等几个核质蛋白存在潜在的相互作用.实验证明,Rif与输出蛋白5的相互作用是核苷酸依赖性的，并且这种相互作用可以将细胞质中存在的输出蛋白5转运回细胞核内.这些发现揭示了小G蛋白Rif可能作为核质大分子运输载体的新功能.

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Kin17表达促进乳腺上皮细胞MCF-10A增殖

曾涛吴坤河

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 457-462.

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Kin17是一个与DNA复制、DNA修复有关的蛋白质，在人类的各种组织中表达均很低.乳腺上皮细胞生长增殖的分子机制尚未阐明.为了探讨Kin17与乳腺上皮细胞增殖的关系，检测了Kin17在不同增殖状况下的MCF-10A细胞中的表达情况，并把KIN17基因插入真核表达载体pCDNA3.1-(+)中，构建重组质粒pCDNA3.1-Kin17，通过转染MCF-10A细胞，检测Kin17的表达对MCF-10A细胞的增殖、DNA复制活性及信号分子表达的影响；同时在转染Kin17特异性小干扰RNA（siRNA_Kin17）后，分析MCF-10A细胞的Kin17表达及细胞生长状况.实验结果显示，经高浓度血清刺激后，细胞中Kin17表达升高，而且生长越快的细胞，Kin17表达越强；转染重组质粒pCDNA3.1-Kin17明显提高了MCF-10A细胞中Kin17的表达，同时Kin17的上调表达促进了细胞的增殖速度与DNA复制活性，增强了cyclin D1的表达水平.当转染siRNA_Kin17时使Kin17含量下调，MCF-10A细胞生长速度的抑制不显著.实验结果表明，Kin17与乳腺上皮细胞的DNA复制及生长增殖密切相关.对Kin17在乳腺上皮细胞增殖中的作用及分子调控机制的深入探讨，将有助于揭示乳腺癌细胞快速增殖的潜在机制.

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虎纹蛙皮肤分泌物抗氧化二肽——Gln/Lys-Met的纯化及鉴定

洪晶刘华苏美玲汪少芸户佩

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 463-468.

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目前已自青蛙皮肤分泌物中提取出多种属于“第三套抗氧化系统”的多肽，它们具有较强的抗氧化作用.本文从虎纹蛙皮肤分泌物中提取具有抗氧化活性的多肽物质,并检测其活性.利用电刺激虎纹蛙背部腺和耳后腺获得其皮肤分泌物，利用凝胶过滤色谱Sephadex G-50和反相高效液相色谱（reverse-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC）进行分离纯化.以2，2-二苯基-1-苦肼基（2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl, DPPH·）清除率为指标，测定多肽的抗氧化活性，经ESI-MS（electrospray ionization mass spectrometry）质谱测定该多肽的相对分子质量.结果显示，自虎纹蛙皮肤分泌物中获得一种具有抗氧化活性的二肽，其分子质量为0.277 kD，可能的氨基酸序列为Gln/Lys-Met.虎纹蛙皮肤分泌物中的该二肽是发挥抗氧化作用的重要组成部分.

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奶牛乳腺组织RPS6KB1基因启动子甲基化分析

郑宜文王春梅高学军王晓艳李庆章

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 469-474.

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DNA甲基化是目前生命科学领域的研究热点之一，DNA甲基化在维持细胞功能、遗传印记、个体生长发育中起着重要作用．本研究采用亚硫酸氢盐测序(BSP)技术检测了不同发育时期奶牛乳腺组织及不同乳品质泌乳期奶牛乳腺组织RPS6KB1启动子的甲基化特征，实时荧光定量PCR检测RPS6KB1基因mRNA差异表达．实验结果显示，在RPS6KB1基因启动子内存在CpG及非CpG的甲基化模式，其中泌乳期奶牛之间甲基化水平相似，妊娠期奶牛甲基化程度高于泌乳期奶牛．荧光定量结果显示不同发育时期，RPS6KB1基因mRNA水平表达差异显著（P<0.05），而两组泌乳期奶牛之间差异不显著（P>0.05）.说明RPS6KB1的表达受到其启动子甲基化的调控，非CpG甲基化模式可能具有与CpG甲基化模式相似的生物学功能，参与RPS6KB1的表达调控．

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应用改进的多聚组氨酸标签T7表达载体构建肺癌cDNA文库

董晓民钟理樊江平张旭朏

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 475-481.

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应用噬菌体C端展示系统构建的cDNA文库缺乏开放阅读框筛选机制，文库中多数噬菌体克隆展示框外非天然短肽，给后期蛋白质的筛选带来了不便. 为实现噬菌体的ORF筛选功能，利用PCR技术对已有载体T7Select10-3b进行改造，在MCS处外源cDNA插入位点的3′端引入6聚组氨酸筛选标签，经包装后挑取成功表达的单克隆构建肺癌cDNA文库. 经镍柱亲和层析后，收集文库中表达组氨酸的克隆，利用化学发光免疫试验进行筛选效果鉴定. 结果显示，改造的新型载体可成功表达组氨酸标签，以此构建的肺癌cDNA文库经筛选后，含ORF插入的克隆由筛前的6 %提高至70 %，本研究为提高cDNA文库的质量提供了一种简便可行的方法.

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二维电泳和质谱技术鉴定肝癌血清差异表达的N-连接糖蛋白

王明齐义军黄志红雷鹏王明丽晁玮霞马瑾卜旺雨张娟牛保华马远方

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 482-489.

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缺乏有效的早期诊断方法是导致肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)预后极差的主要原因之一.蛋白质异常糖基化与恶性肿瘤细胞侵袭、转移等生物学过程关系密切，人体内至少有50%的蛋白质发生了糖基化修饰.本实验采用IgY12去除血清高丰度蛋白、多植物凝集素亲和层析技术分别从20例肝癌和年龄、性别匹配的20例非癌慢性肝病患者血清中纯化N连接糖蛋白、二维电泳分析差异表达的蛋白质斑点，质谱检测、生物信息学等技术鉴定了18个差异表达的糖蛋白和/或其异质体（12种高表达和6种低表达）.ExPASy数据库比对结果表明,本实验鉴定的糖蛋白质分子含有至少1个已报道的N糖基化位点.这些差异表达的糖蛋白属于急性期反应蛋白，分别具有蛋白酶抑制、生物转运、凝血和纤溶等功能，表明肝癌的发生发展过程中机体产生的急性期反应物可能是潜在的肝癌血清标志物.

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转ChIFN-γ基因油菜植株的建立

吴玉俊罗熹许文钊吴拥军

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(5): 490-495.

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干扰素(interferons, IFNs)是一类抗病毒、抗肿瘤、抗细胞增殖等作用的高活性、多功能诱生性糖蛋白.采用农杆菌介导法将含鸡γ干扰素 (chicken interferon-γ, ChIFN-γ) 基因的植物表达载体pSWNGN导入油菜下胚轴和子叶柄. 经筛选和分化,获得了62株抗性再生植株, 通过葡糖醛酸酶GUS (β-glucuronidase,GUS)活性检测、PCR检测及Southern杂交检测,确定获得2株单拷贝转ChIFN-γ 基因油菜. ELISA定量检测转基因植株中的ChIFN-γ 蛋白.结果表明,转基因植株ChIFN-γ 蛋白表达量最高可达1 120 pg/g鲜重.该研究为植物生物反应器生产ChIFN-γ 口服疫苗蛋白的开发及应用奠定了基础.

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