中国生物化学与分子生物学报

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郑媛媛 ,王继红 ,李庆伟

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 299-305.

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整合素αvβ3是一种能特异性识别RGD序列的膜受体蛋白，其与含RGD（Arg-Gly-Asp）模体的蛋白质结合的特异性在肿瘤细胞的粘附、迁移、浸润及肿瘤血管新生中起重要作用.由于整合素αvβ3在多种肿瘤细胞表面高表达而在正常细胞中低表达或不表达，因此其成为肿瘤治疗的理想靶点.肿瘤新生血管为肿瘤的生长提供营养，因此近年来抑制肿瘤血管新生也成为肿瘤治疗的重要途径.有研究显示，几种RGD毒素蛋白不但以整合素αvβ3为靶点靶向结合到肿瘤部位从而具有直接抗肿瘤细胞增殖、黏附、迁移及浸润功能，而且它们还具有抗肿瘤血管新生的作用，因此RGD毒素蛋白可从上述两方面抑制肿瘤生长与转移.本文就整合素αvβ3为靶向的RGD配体结构特点及其在肿瘤治疗中的靶向治疗和抗血管新生应用及前景加以综述.

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PDCD10，一个新的多功能信号转导调节分子

黄东宁赵红珊

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 306-310.

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人程序性细胞死亡分子10(Homo sapiens programmed cell death 10, PDCD10)，最初被称为TFAR15(TF-1 cell apoptosis related gene 15)，是由撤除粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导凋亡的人红白血病细胞系TF-1中克隆得到的1个凋亡相关基因. 后来发现它的突变可引起散发性或家族性颅内海绵状血管瘤(cerebral cavernous malformations，CCMs)的发生，为CCMs的第3个致病基因，所以又被叫做CCM3.近年来研究发现,PDCD10能够和GCKⅢ蛋白、γ-PCDH、CCM2、VEGFR2、ERM等众多蛋白相互作用，并能调控ERK/MAPK通路，增加MST4/VEGFR2的稳定性，增强相应的信号转导，促进细胞的增殖、分化和中枢神经系统的发育，与癌症的发生相关，还能调节细胞的凋亡.以上研究证明了PDCD10 的多种生物学效应，并提示其在血管生成、氧化应激、肿瘤中发挥重要作用.

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血管损伤的新靶点：平滑肌22 alpha

吕品韩梅

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 311-315.

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血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)表型转化是血管损伤性疾病动脉粥样硬化、高血压和血管成形术后再狭窄等的共同病理生理过程.平滑肌22 alpha (smooth muscle 22 alpha, SM22α) 是一种VSMC分化标志物，其表达具有平滑肌组织特异性和细胞表型特异性. 该蛋白不仅作为一种肌动蛋白细胞骨架相关蛋白参与VSMC骨架组构和收缩调节，它还参与VSMC的增殖、炎症和氧化应激等进程. 本文就SM22α 的结构特征及其在VSMC血管损伤中的作用机制进行综述.

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钙调蛋白及其结合蛋白对神经递质释放的调控作用

倪炜王正朝黄晓红*

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 316-324.

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钙离子（Ca2+）是调节突触前神经递质的胞吐释放的关键离子信号.作为胞内最普遍存在的钙离子感受器的钙调蛋白（CaM）被发现能通过与多种蛋白的相互作用，调控着突触小泡的生发、运输及再填充，从而传递胞内Ca2+浓度变化的信号，对神经递质的释放及突触电生理活动起到至关重要的调控作用.本文综述了CaM及其结合蛋白是如何参与对突触小泡的胞吐释放和胞吞恢复的调控，并探讨了其中可能的分子机制.

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ISL1在肿瘤发生中的作用

宋卓伦赵珺王卫平

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 325-329.

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胰岛因子1（Islet1，ISL1），又称胰岛素增强子结合蛋白1，以多效转录因子的身份在多种组织器官的发育及成熟中发挥作用．ISL1在心、胰腺、神经系统等组织器官的胚胎发育过程中发挥重要作用．Isl1基因敲除可导致小鼠心发育不全，4种胰岛内分泌细胞缺失，以及运动神经元分化、迁移障碍等．ISL1具有促进增殖、抑制凋亡的重要功能．近年的研究表明，ISL1在多种肿瘤发生中存在异常高表达．然而，其在肿瘤发生中的具体作用与机制尚未被阐明，有待进一步探索．

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嗜热四膜虫Ran结合蛋白1的表达对大小核分裂的影响

赵丹梁海霞许静王伟

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 330-337.

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Ran是细胞内的一种具有GTP酶活性的功能蛋白，可以调节染色体稳定性、细胞核组建以及核质运输等多种细胞进程．Ran结合蛋白1（Ran-binding protein 1, Rbp1p ）是Ran的必要调控因子，促进Ran-GTP水解为Ran-GDP．本研究从嗜热四膜虫大核基因组中鉴定出1个保守的Ran结合蛋白基因RBP1(TTHERM_00158040， http://www.ciliate.org)．实时荧光定量PCR表明,RBP1在四膜虫营养生长和有性生殖过程中都有表达,且在有性生殖过程中表达水平提高．免疫荧光定位表明,在营养生长期Rbp1p定位于细胞质中．过表达RBP1或敲减RBP1后，细胞生长速率下降，大核的无丝分裂异常，细胞分裂末期产生了无大核的异常细胞，同时过表达RBP1导致了多小核的产生．结果表明,Rbp1p影响四膜虫细胞核的分裂进程，它的正常表达对细胞增殖过程起到重要的调节作用．

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MPEP阻断mGlu5抑制肝癌细胞HepG2增殖

袁记方张晨光王舒婷赵树东张红

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 338-346.

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代谢型谷氨酸受体5（metabotropic glutamate receptors 5, mGlu 5）在神经系统的多种病理生理过程中发挥重要作用. mGlu5与肝细胞癌的发生发展关系密切，其抑制剂2-甲基-6-(苯乙基）-吡啶（2-methyl-6-(phenylethyl)-pyridine, MPEP）能够促进肝癌细胞凋亡，抑制肝癌细胞的迁移.在此基础上，进一步探讨了MPEP与肝癌细胞增殖之间的关系.结果显示：在无血清和有血清的条件下，MPEP均能显著降低肝癌细胞HepG2的细胞活力.同时发现，有血清条件下MPEP能使HepG2细胞周期停滞在G1 期，显著降低HepG2细胞的DNA合成能力和克隆形成能力，并能下调细胞增殖信号ERK 通路的活性.该研究结果为进一步认识MPEP对肝癌细胞的抑制作用提供了新的实验证据.

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转录因子HBP1调控H2O2诱导的骨肉瘤细胞生长阻滞过程

董威张晓伟

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 347-353.

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为探讨氧化应激对人骨肉瘤细胞增殖的影响及其作用机理，首先用H2O2处理U2OS细胞，采用Western印迹和real-time PCR检测HMG盒转录因子1 (HBP1)及其下游靶基因 DNMT1和p16表达水平的变化. 用荧光素酶报告基因实验检测在H2O2诱导下, HBP1对于DNMT1 和p16启动子的影响. 用细胞增殖试验（BrdU掺入，细胞生长曲线）检测 H2O2对细胞增殖的影响以及HBP1的作用. 用衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测在H2O2诱导的细胞衰老中HBP1所起的作用. Western 印迹, real-time PCR及荧光素酶报告基因实验结果显示,细胞经H2O2处理后，明显增高HBP1表达水平，转录抑制DNMT1的表达, 促进p16蛋白的表达. 细胞增殖实验结果显示, H2O2显著抑制了细胞的增殖，HBP1 knockdown可部分逆转这种抑制作用. SA-β-Gal染色实验说明, H2O2可诱导HBP1表达正常的U2OS细胞衰老，而HBP1 knockdown使这种促衰老作用减弱. 研究结果说明, H2O2可抑制人骨肉瘤细胞增殖，诱导细胞衰老. 其作用机制是通过上调转录因子HBP1的表达，转录抑制或促进其下游靶基因DNMT1或p16的表达来抑制细胞增殖，促进细胞衰老.

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过表达胃泌素促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

刘骏周建奖谢渊赵艳曾怡

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 354-360.

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胃癌患者转移淋巴结中胃泌素基因的表达量是原发胃癌组织的42倍，推测胃泌素可能与胃癌转移密切相关. 本文通过构建含胃泌素基因的真核表达载体，成功获得过表达胃泌素的稳转胃癌细胞株AGS和SGC-7901, 并用MTT、细胞伤愈实验、Transwell 小室实验及ELISA检测过表达胃泌素对细胞迁移、侵袭及转移相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）分泌能力的影响. 结果显示，过表达胃泌素稳转细胞的相对增殖率、迁移入细胞致伤区的相对距离比对照组高，迁移和侵袭到Transwell下室面的细胞，以及培养液中每mg蛋白质的MMP-2浓度也高于对照组的细胞. 结果提示，胃泌素通过促进胃癌细胞分泌MMP-2来增强细胞的迁移和侵袭能力. 该研究对揭示胃癌转移的分子机制具有重要意义.

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OAZ1基因诱导慢粒白血病K562细胞向成熟红系方向分化

吴兵平危敏马文丽姜立王星郑文岭

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 361-367.

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近年来，鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)作为肿瘤治疗的潜在靶点备受关注.本文研究了OAZ1基因过表达对慢粒白血病K562细胞红系分化的作用.构建框移位点突变的OAZ1 过表达慢病毒载体pLVX-Neo-OAZ1-IRES-ZsGreen，包装病毒并感染K562细胞， Western 印迹验证其过表达效果.FACS检测细胞分化标志物CD71和GPA，结合联苯胺染色分析细胞红系分化情况.对比氯化高铁血红素(hemin)诱导组，实时RT-PCR检测与K562细胞红系分化、癌变的关键基因(GATA1、BCR/ABL、TGFβ)转录水平，对OAZ1 诱导分化的机制进行初步探索.结果表明，慢病毒过表达载体及K562细胞过表达体系构建成功.OAZ1过表达后细胞红系分化标志物CD71+/GPA+为(11.22±2.09)%，与对照组(4.07±1.04)%、空病毒组(1.79±2.36)%相比差异极显著(P<0.01)；联苯胺蓝染阳性率为(14.037±0.083)%，与对照组、空病毒组比较，差异也极显著(P<0.01).定量分析结果提示，相对于GATA1、BCR/ABL 基因mRNA转录水平的影响，OAZ1对TGFβ 基因的作用更为明显.为此推断，OAZ1基因可诱导白血病K562细胞向成熟红系方向分化，其作用机制可能与TGFβ信号转导通路相关.

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非生物胁迫和植物激素对与水稻OsRac5结合的含CC域蛋白编码基因OsMY1和OsMY2表达的影响

梁卫红李辉李佳佳林群婷王军侯成千楼晨杨丹丹郝雨帆王俊杰

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 368-376.

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ROP(Rho of plant)作为植物中唯一具有信号传递功能的小GTP结合蛋白，在极性生长、发育和环境应答等过程中具有重要作用.本文采用酵母双杂交技术，从水稻幼穗筛选出2种与水稻ROP家族成员OsRac5互作蛋白的基因OsMY1和OsMY2.序列分析显示，OsMY1与OsMY2的核苷酸、氨基酸序列的相似性分别为14%和49%，均含有卷曲螺旋结构域；GST pull down分析显示，OsMY1可以和激活型OsRac5在体外结合；实时定量PCR分析显示，OsMY1和OsMY2在水稻生长发育时期的根、茎、叶中广泛表达，尤其在幼穗中的表达量显著高于其它组织.干旱、低温、高盐等非生物胁迫和植物激素吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素（GA）处理能不同程度地上调OsMY1和OsMY2 基因在水稻幼苗中的表达，但油菜素内酯（BR）、水杨酸（SA）、6-苄氨基嘌呤（6-BA）对2种基因的表达没有显著的影响.本文为进一步研究OsMY1和OsMY2基因在水稻生长发育、植物激素和胁迫应答中的功能提供了重要依据，为研究OsMY1、 OsMY2和OsRac5蛋白质相互作用的功能联系和作用机制奠定了基础.

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HSF4B通过上调RhoA和 Rac1促进晶状体上皮细胞迁移

张军马增翼李淑莲刘广超胡延忠

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 377-382.

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热休克转录因子4（heat shock transcription factor 4,HSF4) 是调控新生儿期晶状体发育的关键转录因子.它参与调控晶状体上皮细胞增生和纤维细胞分化,然而其作用机理仍不清楚.利用鼠晶状体上皮细胞mLEC/HSF4-/-和mLEC/HA-HSF4b细胞为材料，对HSF4在晶状体上皮细胞中的调控作用进行研究.结果发现，重建的mLEC/HA -HSF4b细胞中，高表达热休克蛋白25（Hsp25）和αB晶体蛋白（αB-crystallin）. 细胞划痕实验和Transwell 细胞迁移实验结果表明，mLEC/HSF4-/-细胞明显比 mLEC/HA-HSF4b细胞的迁徙速度慢（t检验, P=0.0001).应用免疫印迹和半定量RT- PCR实验发现，HSF4b能上调 RhoA, Rac1 和 CDC42的表达.但后者的表达不受Hsp25 和αB-crystallin调控. 由此推论，HSF4b通过调控RhoA, Rac1 和CDC42 的表达参与调控晶状体上皮细胞向后房的迁徙. 这一新发现对解释HSF4b调控晶状体发育提供了有力的证据.

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实时PCR检测单细胞中人端粒酶hTERT 基因mRNA的表达

李楠黄莉何冰钟艳平林若芸李力薛林涛王世凯黎丹戎

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 383-388.

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人端粒酶逆转录酶基因（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）的表达与端粒酶活性密切相关，而多项研究表明，端粒酶在肿瘤发生、发展、细胞永生化方面起重要作用.为探讨单细胞技术检测卵巢癌SKOV3细胞转导hTERT前后其mRNA表达的差异，前期已通过慢病毒转染，将携带hTERT基因的表达质粒载体LV4-pGLV- EF1a-EGFP-hTERT转入卵巢癌SKOV3细胞系，构建了稳定表达hTERT蛋白的细胞株 (SKOV3 h)，同时设空载体感染组(SKOV3 b)和未处理组(SKOV3)为对照组，采用流式细胞术，分选不同数量的细胞进行实时PCR.结果显示，初步摸索的细胞数在50个以内, 且随着细胞数目的增多,Ct值逐渐增大(P<0.05)；SKOV3 h组hTERT基因mRNA表达最高，SKOV3 b组次之，SKOV3组表达最低(P<0.05).提示SKOV3细胞转导hTERT基因后可促进该基因的mRNA表达.同时用该法检测了单个卵裂球内hTERT基因的表达，为利用单细胞单基因遗传学诊断研究及肿瘤学研究提供基础.

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一种基于量子点检测抗CCP抗体的免疫荧光层析法

郭利宁何红秋

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(4): 389-395.

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抗环瓜氨酸多肽 (cyclic citrullinated peptide, CCP) 抗体是类风湿关节炎 (rheumatoid arthritis, RA) 早期诊断的重要生物标志物. 为了实现对RA的早期诊断，本研究建立了一种基于CdTe量子点标记技术检测抗CCP抗体的免疫荧光层析法. 将CCP多肽与小牛血清白蛋白 (bovine serum albumin, BSA) 连接，再将CCP-BSA和羊抗鼠IgG分别在硝酸纤维素膜 (nitrocellulose membrane, NC膜) 上划线，作为检测线 (test line, T线) 和质控线 (control line, C线). 制备量子点并在量子点上标记鼠抗人IgG，喷在玻璃纤维上并烘干，最后组装大卡、切割并封装制成检测试纸条. 应用该试纸条检测了RA患者及健康人血清临床样本200份，以酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 为对照，计算免疫荧光层析法的检测灵敏度和特异性. 结果显示，建立的量子点免疫荧光层析试纸条检测抗 CCP抗体的灵敏度为97.5 %，特异性为95.8%. 该方法操作简单、快速，可实现床旁检测 (point-of-care testing, POCT)，能应用于RA的早期诊断.

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