中国生物化学与分子生物学报

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邢雅玲,陈晓娟,陈忠斌*

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 899-901.

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中东呼吸道综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV）是继SARS冠状病毒（SARS-CoV）之后新近出现的又一种能够引发严重呼吸道感染的人类新发冠状病毒. MERS-CoV于2012年9月首次在中东一些国家被发现，截至2013年9月7日,MERS-CoV已经引起114例感染病例，其中54人死亡，死亡率约50%. 病毒受体研究为MERS-CoV等人类新发冠状病毒进化和跨种传播机制提供重要依据．最近，Raj等在Nature发表文章，首次报道了二肽基肽酶4（dipeptidyl peptidase 4，DPP4；又名CD26）为MERS-CoV感染细胞的功能性受体．MERS-CoV功能性受体的发现为人类新冠状病毒溯源和跨种进化研究、病毒传染和流行病学特征分析以及抗病毒药物和疫苗研究提供重要基础.

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乙酰转移酶基因NAA10的生物学功能及其在肿瘤中的作用

闵力曾妍寿成超*

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 902-909.

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N端乙酰转移酶A（N-acetyltransferase A, NatA）复合体是真核生物最主要的N端氨基酸α位乙酰转移酶，N端α位乙酰转移酶10基因（N-α-acetyltransferase 10, NAA10）编码的N端α位乙酰转移酶10蛋白（N-α-acetyltransferase 10 protein, Naa10p）是NatA的催化亚基. Naa10p具备新生蛋白质N端氨基酸α位乙酰化活性、成熟蛋白质Lys残基ε位乙酰化活性以及对部分转录因子的协同调节作用. Naa10p能够通过调节细胞周期促进细胞增殖，通过调节雷帕霉素靶蛋白（mechanistic target of rapamycin, mTOR）通路促进细胞自噬，并通过多种不同的分子信号通路抑制细胞运动能力.根据乙酰化底物的不同，Naa10p还在细胞凋亡的调控中起双重作用. Naa10p参与的生物学过程还涉及血管生成和神经发育等. Naa10p在多种癌症组织中呈过表达，但其预后意义随肿瘤不同而有较大差别.对Naa10p的生理生化研究必将使我们对细胞的生理病理学过程及其机制的了解更加深入全面.本文将从蛋白质结构、机制功能及临床意义等不同角度系统地阐述NAA10的研究现状与进展.

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哺乳动物精子发生中减数分裂的起始

李明昭刘维帅华进联

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 910-915.

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生殖细胞的发生、增殖和分化是生命科学领域研究的重要课题之一. 生殖是所有动物赖以生存的基础，精子发生是完成繁殖所必须经历的过程，其最终目的是源源不断地产生单倍体精子.精子发生过程本身是一个复杂特殊的细胞增殖与分化过程,其中减数分裂是精子发生最重要的步骤,但关于减数分裂如何精确起始的分子机制仍知之甚少.已有报道发现,维甲酸（RA）调控Stra8可能是哺乳动物减数分裂起始的机制之一，Nanos2、Boule对RA-Stra8通路具有重要的调控作用. 本文对哺乳动物精子发生中减数分裂起始的相关研究进展进行综述.

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人类线粒体tRNA生物合成与线粒体疾病

阳娅玲肖红利管敏鑫

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 916-925.

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线粒体是普遍存在于真核细胞中的一类细胞器.每个线粒体含有多个拷贝的闭合环状双链DNA. 人类线粒体DNA (mitochondrial DNA, mtDNA)共编码22种线粒体tRNA(mitochondrial tRNA，mt tRNA), 2种rRNA 及13种多肽.mt tRNA独特的结构特点决定了它们与具有典型三叶草结构的细胞质 tRNA不同.编码mt tRNA的基因突变频率较高，这可能是引起线粒体功能障碍的主要原因之一. 同时 ,这与很多病理现象相关.目前发现,大量与mt tRNA生物代谢和功能相关的核因子包括加工内切酶、 tRNA修饰酶和氨酰-tRNA合成酶.这些核因子的异常导致了疾病相关的tRNA致病突变.由此可见mt tRNA功能对于线粒体活性的重要性.

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胞外酸性与肿瘤的浸润转移

安彩艳包良阿拉坦高勒

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 926-931.

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组织缺氧是实体瘤的一个主要特征，它引起肿瘤细胞胞外酸性环境的形成.肿瘤细胞通过质子感知的G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors，GPCRs）或质子感知的离子通道感知其胞外的酸性环境，并激活多条细胞内信号通路，影响细胞功能. 肿瘤最致命的方面在于其转移能力，肿瘤转移程度与肿瘤细胞迁移能力呈正相关. 因此,对胞外酸性与肿瘤细胞迁移扩散之间关系的深入研究将有助于发现更多新的抗肿瘤转移药物.本文就肿瘤酸性微环境的形成、肿瘤细胞的质子感知制、胞外酸性环境对肿瘤浸润转移的影响及如何将肿瘤pH调节应用于癌症治疗等方面的内容予以综述.

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分泌型磷脂酶A2亚家族：结构与功能

杨武郭薇黄春洪

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 932-940.

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分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2，sPLA2)是磷脂代谢酶中最大的一个亚家族，具有多种生理功能．迄今为止，在人体中总共发现11种sPLA2亚型，它们具有不同的组织分布、水解活性和底物特异性．由于其水解产物主要为花生四烯酸和溶血磷脂，sPLA2常通过影响这两个通路调节细胞功能、炎症反应、抗菌等．本文结合近几年国际上关于sPLA2的研究报道，对于sPLA2的结构、功能、组织定位及与疾病发生发展的关系做一简要概述．

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PHA-767491联合TRAIL抑制肝癌细胞Bel-7404增殖

李伟李华美沈红强楼金吐彭朝阳董敖尚世强

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 941-947.

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将小分子抗癌药物PHA-767491和携带TRAIL基因的非复制型腺病毒(Ad-TRAIL)共同作用于肝癌细胞Bel-7404，探讨PHA-767491联合TRAIL蛋白对肝癌细胞增殖的协同抑制作用及其作用机理. MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33342荧光检测细胞凋亡现象和流式细胞仪检测细胞凋亡水平. 结果表明，PHA-767491联合Ad-TRAIL抑制Bel-7404细胞增殖的能力显著优于单一用药. Western印迹进一步分析蛋白表达水平显示，PHA-767491可以通过下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Xiap的表达，从而显著增强TRAIL蛋白诱导Bel-7404细胞凋亡的能力；PHA-767491联合Ad-TRAIL处理Bel-7404细胞后，不仅Bel-7404细胞凋亡水平显著增加，并且伴随着PARP和Caspase3的大量剪切. 本研究证实, PHA-767491和TRAIL的联合使用对抑制肝癌细胞Bel-7404增殖表现出了显著的协同效应，为今后癌症药物的联合治疗提供了新的思路.

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基因芯片分析杀雄剂SQ-1诱导小麦生理型雄性不育的基因差异表达

董剑刘迎团刘宏伟王小利宋亚珍王强牛娜马守才张改生王军卫徐虹

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 948-955.

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为揭示小麦生理型雄性不育的分子机理，更好地为小麦杂种优势利用提供理论依据和技术支撑，本研究以SQ-1诱导的西农558生理型雄性不育的花药为试验材料，以未经SQ-1处理的西农558的花药为对照，利用基因芯片技术对两者的基因表达差异进行了分析，并对部分基因运用半定量PCR技术进行了验证.结果表明，在55 052个转录本中, 两材料间差异表达的转录本有2 052条, 其中1 294个基因表达上调，758个基因表达下调.功能分类表明这些基因主要参与了毒性物质响应、逆境响应、多糖代谢及信号转导等重要生命过程.为验证芯片数据的可信性, 利用cDNA半定量 PCR 法对11个差异表达显著的基因(Ta.116, Ta.5629, TaAffx.122333, Ta.30726, Ta.13682, Ta.4057, Ta.4101, Ta.4139, Ta.11957, Ta.25934, Ta.27552) 进行验证.结果证明，无论是上调表达的还是下调表达的基因，其表达模式都与基因芯片的检测结果的一致.这些基因可作为育性相关候选基因开展下一步研究.

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女贞子提取物主要活性组分及其抗丙型肝炎病毒复制活性分析

孙瑞娜郭韫丽汪俊吴晓玉孔令保

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 956-961.

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中药女贞子(Ligustrum lucidum，LL)具有肝保护和抗炎症作用.本研究分析女贞子提取物对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)复制的影响及其活性成分. 薄层层析法分离女贞子水提取物，获得5个分离组分. Real-time RT-PCR 和Western印迹发现，分离组分1和2 抑制HCV JFH1细胞感染模型中的JFH1病毒复制. 分离组分的高效液相色谱(high-performance liquid chromatography，HPLC)分析表明,熊果酸和齐墩果酸可能是组分1 和 2的抗病毒活性成分. 熊果酸和齐墩果酸抗病毒实验发现,熊果酸和齐墩果酸抑制HCV JFH1的复制，它们的选择指数 (SI) 分别为 6.7 和30.8. 这些研究结果表明,女贞子及其化学成分熊果酸和齐墩果酸具有潜在的丙型肝炎治疗价值.

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鸡miR-148a的组织表达及其发育调控功能预测分析

李国喜闫峰宾王乐乐贾丽娟孙桂荣康相涛

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 962-968.

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为了解鸡miR-148a组织表达谱和潜在发育调控功能，采用茎-环定量RT-PCR检测了固始鸡5个发育阶段、15种组织中miR-148a的表达，利用Pictar和TargetScan算法预测了miR-148a的靶基因，并对预测靶基因分别进行了Gene Ontology分析和通路分析. 结果显示，miR-148a的表达具有明显的时序特征，胚胎期各组织中的表达水平明显低于出壳后；miR-148a在出壳后的大脑、小脑、延脑、腺胃、小肠、肝、胰和胸肌等器官组织中的表达水平随着发育进程被显著上调；miR-148a预测靶基因在胚胎器官形态发生、血细胞生成、消化道形态发生、心血管发育、感觉器官发育、肠发育、骨骼系统发育、后脑发育、呼吸系统发育、免疫系统发育、淋巴器官等发育过程显著富集. 总之，鸡miR-148a为广泛性表达miRNA，可能参与鸡诸多器官组织发育过程的调控.

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马铃薯Sgt1基因启动子的结构及功能分析

魏桂民张金文王蒂张俊莲陆艳梅高宜峰

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 969-977.

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糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloids，SGAs)是一类存在于茄科和某些百合科植物的重要次生代谢物，与植物的抗逆性和产品品质有密切关系．茄啶半乳糖基转移酶（solanidine galactosyltransferases,SGT1）是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一，研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义．研究采用染色体步移技术(Genome walking)，首次克隆到马铃薯Sgt1基因起始密码子上游2 183 bp的启动子序列，已注册到GenBank（注册号：KC759163）．构建该启动子驱动融合报告基因gfp::gus的植物双元表达载体p1304Sgt1p，转化野生型烟草获得Sgt1p::gfp::gus转基因植株，通过GUS组织化学染色分析Sgt1p::gfp::gus转基因植株中Sgt1p启动子的活性．结果表明，gus基因在转基因烟草的根、茎和叶中均表达，在叶中Sgt1p启动子的活性低于CaMV35S启动子，而在根和茎中二者基本相同；光诱导结果显示，光照处理明显增强了Sgt1p::gfp::gus转基因烟草叶片中Sgt1p启动子的活性，表明庄薯3号马铃薯 Sgt1p启动子是一种光诱导型启动子．

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NUAK1通过影响F-actin聚合促进乳腺癌的侵袭转移

尹崇高李平李洪利孙磊刘菲张丽娜李文通张宝刚

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 978-982.

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本课题组先前研究证明NUAK1/ARK5参与乳腺癌、胶质瘤侵袭转移，但机制尚不清楚.本文证明，NUAK1通过影响F-actin聚合促进乳腺癌的侵袭转移.应用小RNA干扰技术敲除乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的NUAK1，用G418进行稳定筛选，并用Western印迹进行蛋白质表达检测，结果显示，成功敲除MDA-MB-231细胞中的NUAK1；采用Transwell侵袭实验检测NUAK1在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用，结果表明，NUAK1被干扰的SiNUAK1/MDA-231细胞的侵袭能力明显减弱；应用免疫荧光法对细胞的F-actin进行荧光染色，半定量F-actin聚合分析结果显示，IGF-1在转染空载的细胞组（Scr/MDA-231）能诱导肌动蛋白短暂的聚合反应，而在敲除NUAK1的细胞组（SiNUAK1/MDA-231）肌动蛋白的聚合显著减少；用细胞因子IGF-1刺激乳腺癌细胞观察cofilin磷酸化，结果显示，在敲除NUAK1的细胞组（SiNUAK1/MDA-231），IGF-1诱导的cofilin的磷酸化明显受抑制.上述结果表明，NUAK1能通过促进F-actin的聚合从而影响乳腺癌细胞的侵袭转移.

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小麦小花高纯度线粒体的分离及其蛋白质双向电泳体系建立

陈征王书平张改生宋齐鲁郭佳林车会学

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 983-989.

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应用差速离心和Percoll不连续密度梯度法分离纯化小麦三核期小花线粒体. 在裂解液选择、IPG胶条pH值范围、SDS-PAGE胶浓度及蛋白质上样量等方面对线粒体蛋白质双向电泳体系进行探索和优化，确立了一套适用于小麦小花高纯度完整线粒体的分离方法及其蛋白质双向电泳的技术体系. 结果表明,采用20%、24%和40% Percoll密度梯度和28% Percoll自形成密度高速离心体系，获得了有活性、高纯度且较完整的线粒体；经TCA-丙酮法提取蛋白，以7 mol/L尿素，2 mol/L硫脲，4% CHAPS(W/V)，65 mmol/L DTT，0.5% IPG缓冲液(V/V)，0.001% 溴酚蓝(W/V)裂解液溶解蛋白，采用17 cm，pH 4～7 IPG胶条和11% SDS-PAGE分离胶，上样量为160 μg，硝酸银染色法，更适合小麦小花线粒体蛋白质组双向电泳分离. 经PDQuest 2DE 8.0.1软件包统计分析，在2-DE图谱上分辨出约150个蛋白点，蛋白点清晰呈圆形，无横条纹干扰，这为利用双向电泳技术在亚细胞水平对线粒体进行蛋白质组学研究与分析奠定了基础，更为进一步分析研究线粒体与雄性不育的关系提供了理论与技术支撑.

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Sirt3在不同热量饮食下的大鼠脂肪组织中的表达

王彪黄剑彬单秀英刘照亮

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(10): 990-994.

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Sirt3是一种NAD+依赖性组蛋白去乙酰化酶,在肾脏、棕色脂肪、心脏和其它代谢活跃的组织中高表达. 多项研究表明，Sirt3在细胞能量代谢、衰老、肿瘤发生等方面起着重要的作用.为探讨Sirt3基因在不同热量饮食下的SD大鼠脂肪组织中的表达差异和意义，将60只3周龄,重量(60±5) g的断乳SD雄性大鼠，随机分为热量限制组、自由摄食组、高热量组，其中高热量组用于构建肥胖SD大鼠模型，喂养16周后处死，分别用Western印迹和real-time RT-PCR方法检测各组大鼠肾周脂肪组织中Sirt3基因的蛋白和mRNA的表达量.Western印迹检测与real-time RT-PCR检测结果一致: Sirt3基因的蛋白和mRNA在肥胖大鼠脂肪组织中的表达低于自由摄食组（P<0.05），在热量限制组大鼠脂肪中的表达高于自由摄食组(P<0.05).研究结果说明，Sirt3基因在不同热量饮食下的SD大鼠脂肪组织中的表达有差异，可能与能量代谢及肥胖有着密切关系.

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