中国生物化学与分子生物学报

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蒲琳

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 587-592.

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纺锤体极体(spindle pole body, SPB)是酵母细胞的微管组织中心，它在细胞分裂及细胞遗传稳定性的维持过程中起着极其重要的作用，是细胞生物学领域热门的研究方向. Sfi1p是酿酒酵母SPB的必需蛋白并且横跨整个半桥，该蛋白与SPB的复制有关，它的缺失或突变会导致SPB复制失败，在哺乳动物的中心体也存在酵母Sfi1p的同源蛋白. 本文系统的介绍了酵母Sfi1p及其在人类中心体中的同源蛋白hSfi1p的结构特征，并且阐明了Sfi1p在SPB复制与分离、核配及生孢等细胞周期过程中的作用. 对Sfi1p的功能研究，将有助于解决SPB研究过程中重要的科学问题，同时为中心体中Sfi1p同源蛋白的功能研究提供良好的借鉴.

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MiR-183基因簇对动物感觉器官功能和发育及肿瘤发生的调控

张群，罗艳*，张士璀

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 593-602.

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MicroRNAs (miRNAs) 是一类长度约为22 nt的内源性非编码小RNA. 它们在后生动物基因组中普遍存在，通过抑制靶基因mRNA的翻译或将其降解，在转录后水平调控基因的表达. 越来越多的证据表明，miRNAs在动物发育和人类疾病发生中发挥重要作用. miR-183基因簇在后口动物和原口动物中高度保守，编码miR-182、miR-96和miR-183. miR-183基因簇在动物感觉器官中特异性表达，对动物感觉器官的发育和功能至关重要. miR-183基因簇还与人类的肺癌、肝癌、乳腺癌、胰腺癌和黑色素瘤等多种癌症相关. miR-183基因簇在多种肿瘤细胞中异常表达，它们通过调控与肿瘤细胞分裂和死亡相关基因，而起到促进或抑制肿瘤发生的作用. 本文对miR-183基因簇miRNAs在动物感觉器官功能和发育及人类肿瘤发生中的作用进行论述.

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JunD的结构功能特征及其在肿瘤发展中的作用

刘英，王岛，伍会健*

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 603-608.

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JunD是一种属于多功能激活剂蛋白-1（activating protein-1,AP-1) 家族的转录因子，可以激活或抑制多种靶基因的表达.在生长发育过程中，在各种细胞类型中都呈现出组成性表达.近20年的临床数据及分子生物学研究表明，JunD蛋白的功能受多个复杂过程调控，包括转录控制、转录后调节、蛋白质翻译后修饰及蛋白-蛋白相互作用等.JunD基因表达的精细调控及JunD蛋白与其它蛋白之间的相互作用可调节细胞增殖、分化和凋亡等过程.JunD蛋白活性异常会导致肿瘤、代谢及病毒类疾病的发生.JunD蛋白的转录激活及抑制受1个复杂调控网络调控，在这个网络调节下，JunD蛋白在细胞的生长调控过程中发挥重要作用.本文就JunD基因表达的调控机制及其与肿瘤之间关系的最新研究进展做一综述.

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肝窦内皮细胞生理功能及病理过程的分子机制

劳远翔1),2)，贺福初2)，姜颖2）*

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 609-616.

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肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cell，LSEC）是肝非实质细胞的主要细胞群，具有物质转运、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能. 肝在遭到多种病原侵袭时，肝窦内皮细胞窗孔逐渐减少或消失，内皮下基膜形成，产生类似于连续型毛细血管的结构，这一过程称为肝窦毛细血管化. 它由多种因素引起，其过程极复杂，在多种肝病的发病前期阶段均有出现，近年来受到广泛关注. 而目前关于肝窦内皮细胞的生理功能及病理机制研究方面的系统总结仍少有报道. 本文对肝窦内皮细胞的生理功能及肝窦病理机制作一较为全面的综述. 除了阐述肝窦毛细血管化自身分子机制的研究进展外，还重点介绍了肝窦毛细血管化参与肝多种疾病发病过程的作用机制. 此外，对肝窦内皮细胞相关的研究方法也作了详细的介绍,为全面了解肝窦内皮细胞生理功能及肝窦毛细血管化的分子机理提供参考.

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肌切蛋白的结构与功能多样性

赖章超，宋鑫

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 617-623.

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肌切蛋白（scinderin）是一种重要的肌动蛋白结合蛋白,在哺乳动物和脊椎动物中广泛表达.肌切蛋白作为凝溶胶蛋白超家族的成员之一,通过肌动蛋白丝切割、肌动蛋白聚集等方式来控制肌动蛋白的结构.肌切蛋白生物活性具有多样性,除影响肌动蛋白丝重组外,肌切蛋白还参与细胞胞吐作用、调节细胞运动、细胞分化等细胞活动.此外,肌切蛋白在慢性炎症、凝血过程、免疫性疾病和肿瘤发生发展中也发挥了重要作用.本文对肌切蛋白的结构特点、参与调节细胞的功能和机制进行概述.

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HP1α在Zmpste24-缺陷早老小鼠胚胎成纤维细胞中表达和磷酸化水平升高

刘佳，周光前，尹献辉，刘宝华，郑慧玲，李雪芹，王优雅，王子梅

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 624-629.

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本实验旨在研究异染色质蛋白1（heterochromatin protein 1, HP1）在Zmpste24基因敲除早老小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs)中的表达量和磷酸化水平，探索异染色质功能异常与早老发病机制的内在联系．首先取雄雌Zmpste24杂合子小鼠胚胎，原代培养MEFs；分别用PCR和Western 印迹检测MEFs基因型和A型核纤层蛋白（laminA）表达以区分野生型与Zmpste24-缺陷型早老细胞；用与衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法 (senescence associated-β-galactosidase assay, SA-β-gal)确定早老细胞出现衰老表型的传代数．用Western 印迹和phos-tag Western 印迹分别检测HP1在Zmpste24+/+和Zmpste24-/- MEFs中表达量和磷酸化水平的差异．实验结果显示，Zmpste24-/- MEFs中存在异常的LaminA，且在传代培养第5代出现明显的细胞衰老现象．选用培养至第3代或第4代的MEFs细胞进行下述实验发现，Zmpste24-/-MEFs中HP1α表达量明显高于Zmpste24+/+ MEFs，而HP1β未发现明显升高；Zmpste24+/+ MEFs中HP1α以非磷酸化状态为主，但在Zmpste24-/- MEFs中磷酸化HP1α比例明显升高；2种细胞中均未检测到磷酸化HP1β. 本研究结果证明，HP1α在Zmpste24-缺陷型早老小鼠传代早期MEFs中的表达量和磷酸化水平均有升高，提示HP1α参与A型核纤层蛋白相关的早老小鼠发病机制．

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阿司匹林诱导人恶性睾丸生殖细胞瘤NTera-2细胞凋亡

易朵**，李晓峰**，赵晓蒙，王成，张晓婷，刘喜枝，周畅*

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 630-636.

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阿司匹林,又称乙酰水杨酸,已证实有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成等多种抗癌功能.除已知对环氧合酶COX-2的活性有抑制外，阿司匹林抗癌分子机制尚不十分清楚.已报道阿司匹林可以降低多种癌症发生风险，但应用于人类睾丸肿瘤治疗的研究报道很少.本文研究了阿司匹林对人恶性睾丸肿瘤NTera-2细胞凋亡的机制.通过MTT方法检测细胞活力，发现阿司匹林以时间和剂量依赖方式抑制NTera-2细胞增殖.不同浓度阿司匹林处理NTera-2细胞后，采用Hoechest 33258染色方法和Annexin V-FITC/PI流式法分别检测NTera-2细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞凋亡水平；RT-PCR结果显示,NTera-2细胞中Fas和caspase-8的表达以阿司匹林剂量依赖性上升；蛋白印迹结果显示,FasL的蛋白表达水平下降并活化caspase-8、caspase-3蛋白表达，PARP出现剪切体. 进一步的实验证明,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK能够减弱阿司匹林诱导NTera-2细胞凋亡. 结果显示，阿司匹林能明显抑制NTera-2细胞活力，并通过激活caspase 通路诱导NTera-2细胞的凋亡，为进一步利用阿司匹林治疗人类睾丸肿瘤的研究奠定基础.

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从大白芸豆种子中分离与表征一种新型凝集素WKBL

王军,洪永祥，蔡茜茜，李巧玲，汪少芸,饶平凡

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 637-644.

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从大白芸豆种子中,经过缓冲液抽提、硫酸铵沉降、蓝胶亲和色谱(AF-Blue HC-650M) 、离子交换色谱(CM-Sephadex C-25)、凝胶过滤色谱(Sephadex G-50)等步骤,分离纯化了一种具有一定抗真菌活性和抗肿瘤活性的凝集素，命名为WKBL.经SDS-PAGE显示, WKBL分子量为25 kD，N端序列为DAVLYRGPGDLHTGS，过碘酸-雪夫染色(PAS)呈红色. 凝血活性实验显示, WKBL凝血效果明显，但只有在60 ℃以下才具有凝血活性,而pH 对其活性影响并不大. D-半乳糖、D-果糖、D-葡萄糖、甘露醇能抑制WKBL的活性.WKBL为金属依赖型凝集素，LiCl、SnCl2和K2Cr2O7能抑制WKBL活性，但CaCl2、BaCl2、ZnCl2、CuCl2、FeCl3和MgCl2对WKBL活性却无影响.WKBL对白血病细胞K562的生长显示出较强的抑制作用，其IC50为15 μmol/L，对HeLa细胞呈现抑制作用，对HepG2细胞的抑制作用不明显. 抑菌实验显示, WKBL对瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)、苹果轮纹病菌(Physalospora piricola)、甜瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.nelonis)和葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)呈现出一定的抑制，但是其抑制率对浓度的依赖性并不高.

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EGCG通过抑制wnt/β-catenin信号通路调节猪骨骼肌卫星细胞的增殖和分化

陈宗正仇杨吴国芳史新娥杨公社孙世铎*

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 645-652.

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为了阐明Wnt/β-catenin信号通路在猪骨骼肌卫星细胞增殖分化中的作用，利用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)处理猪骨骼肌卫星细胞，采用MTT、流式细胞术、免疫荧光和Western印迹等方法检测了细胞增殖和分化情况.结果显示，与对照组相比，EGCG以时间、浓度依赖方式抑制猪骨骼肌卫星细胞的增殖.流式细胞术检测细胞周期结果表明,与对照组相比，经EGCG处理后，猪骨骼肌卫星细胞的G1期细胞比例上升，而G2和S期细胞比例下降，这说明细胞被阻滞在G1期，细胞的增殖受到抑制.免疫荧光检测分化过程中MyHC的表达，与对照组相比，EGCG促进猪骨骼肌卫星细胞的分化,并降低增殖标志基因MyoD以及细胞周期蛋白D的表达量，而提高了分化标志基因MyoG和MyHC的表达量.在猪骨骼肌卫星细胞增殖分化过程中，EGCG降低β-联蛋白的表达量，且核内的β-联蛋白明显减少.结果表明,EGCG通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制猪骨骼肌卫星细胞的增殖，促进其分化.

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人亲环素18抑制肌酸激酶的去折叠

刘照蓬,李森

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 653-658.

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新生肽链折叠过程中容易出现错误折叠与聚沉，从而导致折叠病等病理现象. 分子伴侣具有辅助其他蛋白质正确折叠，保护蛋白质分子结构的功能.本文选用人肌肌酸激酶为靶蛋白，研究了肽基脯氨酰顺反异构酶人亲环素18（human cyclophilin 18，hCyp18）对人肌肌酸激酶去折叠的作用，发现hCyp18能够抑制人肌肌酸激酶在热变性与化学变性过程中的失活与构象变化，并抑制人肌肌酸激酶在化学变性过程中的聚沉，因此推断hCyp18具有针对人肌肌酸激酶的分子伴侣功能.本文同时研究了hCyp18与人肌肌酸激酶的结合作用，对hCyp18的作用机制进行了初步探讨.

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Errα通过抑制β-Catenin促进猪前体脂肪细胞成脂分化

牛晨光，何晶晶，鞠大鹏，纪洪雷，杨公社*

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 659-665.

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雌激素相关受体α（Errα）和Wnt/β-Catenin 信号通路都能够调控成脂分化.研究表明Errα和wnt/β-Catenin信号通路之间存在互作，β-联蛋白（β-Catenin）是Wnt/β-Catenin 信号通路的关键因子. 为了研究Errα和β-Catenin在脂肪生成中的相互作用，在293A细胞中包装得到Errα腺病毒并侵染猪前体脂肪细胞. LiCl 和XCT790被用于不同处理的猪前体脂肪细胞. 蛋白质印迹实验发现,在成脂分化过程中，Errα表达升高，β-Catenin表达降低. 显微观察绿色荧光发现,Errα腺病毒能够侵染猪前体脂肪细胞. 蛋白质印迹实验显示，在猪前体脂肪细胞中，Errα腺病毒促进Errα表达，XCT790抑制Errα表达. 油红O染色结果表明，β-Catenin抑制成脂分化，而Errα通过抑制β-Catenin促进成脂分化. 进一步的蛋白质印迹实验表明，在猪前体脂肪细胞成脂分化过程中，LiCl能够稳定β-Catenin表达，Errα抑制β-Catenin表达. 这些发现提示，Errα通过抑制β-Catenin表达来促进成脂分化.

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荧光光谱法研究淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与牛血清白蛋白的相互作用

要晓静，赵伟，阚鸿，刘忠英*

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 666-670.

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在模拟生理条件下应用荧光光谱学方法分别研究了淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与牛血清白蛋白（BSA）间的结合作用. 根据荧光强度数据，计算出了结合常数KA，结合位点数n和热力学参数（△G, △H 和△S）. 实验结果表明,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ都能显著猝灭BSA的内源荧光，猝灭机制均为形成基态复合物的单一静态猝灭过程. 不同温度下（17 ℃, 27 ℃, 37 ℃）得到的KA和n值，表明淫羊藿次苷Ⅰ与BSA的结合强于淫羊藿苷. 从得到的热力学参数判断,淫羊藿苷与BSA间的主要作用力是氢键作用和范德华力，而疏水作用和静电引力在淫羊藿次苷Ⅰ与BSA形成复合物过程中起主导作用.而且同步荧光光谱显示,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与BSA的结合导致BSA构象发生了变化.

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纳米金标记-逐步银染法快速检测金黄色葡萄球菌

刘小兰，齐天琪，林婷，徐克前*

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 671-676.

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将纳米金探针应用于目的核酸的检测，具有与PCR相当的灵敏度和特异性.本研究建立了一种可以在微孔板上快速检测金黄色葡萄球菌的纳米金标记-逐步银染法.该方法利用已包被链霉亲和素的微孔板，将PCR扩增的金黄色葡萄球菌nuc基因与生物素探针、纳米金探针形成的三明治杂交结构锚定其上，然后在低温下逐步银染显色，通过酶标仪检测放大的银染信号.这种纳米金标记-逐步银染法可以在显著降低非特异性背景信号的同时放大银染信号，检测金黄色葡萄球菌nuc基因的灵敏度为1 pmol/L，比常温一步银染法的灵敏度提高约102倍. 51例临床标本的检测结果与PCR法一致，与培养生化鉴定法的检测结果之间无显著性差异(P >0.05). 综上所述，本研究成功构建了金黄色葡萄球菌的纳米金标记-逐步银染法，在病原微生物的快速检测领域表现出广阔的发展潜力.

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建鲤两种Δ6脂肪酸去饱和酶基因克隆与表达

任洪涛，俞菊华，徐跑，唐永凯，李红霞，李建林

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(7): 677-684.

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利用逆转录PCR和RACE技术获得建鲤2种Δ6脂肪酸去饱和酶（FADs6-a,FADs6-b）的全长cDNA序列. FADs6-a基因的cDNA总长为1 966 bp，开放阅读框为1 335 bp，编码444个氨基酸；FADs6-b基因的cDNA总长为1 931 bp，开放阅读框为1 335 bp，编码444个氨基酸.FADs6-a和FADs6-b基因都包括N端细胞色素b5结构域、3个富含组氨酸的结构域和2个推测的跨膜区，具有典型的Δ6脂肪酸去饱和酶结构特点.氨基酸同源性分析显示,建鲤FADs6-a和FADs6-b与斑马鱼的相似性较高，而与海水鱼类的相似性较低，与人类FADs6的相似性高于与FADs5的相似性.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测该基因在建鲤幼鱼不同组织中的表达量, 发现2种Δ6 脂肪酸去饱和酶基因在建鲤肝脏的表达量最高，其次是肠、脑、肌肉、心和肾，而前肠高于后肠，FADs6-a的表达量高于FADs6-b.得到的结论是，建鲤具有2种类型的合成高度不饱和脂肪酸(HUFA)的关键酶—Δ6脂肪酸去饱和酶，在肝脏和肠道中的含量较多，且FADs6-a和FADs6-b在结构和组织的表达方面都存在差异，这为进一步研究建鲤HUFA的合成途径及调控机理奠定了基础.

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