中国生物化学与分子生物学报

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赵东欣，薛永亮，卢奎,，伍江卓

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 1-8.

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PepT2（peptide transporter 2）是一种高亲和力、低容量的转运载体.它在人体中分布广泛，不仅能转运二、三肽，也可以识别和转运许多仿肽类药物,如β-内酰胺抗生素、血管紧张素转换酶抑制剂、贝他定等.研究表明，PepT2的转运机制不同于氨基酸的吸收机制，其底物的仿肽结构特征影响其转运速率. 本文综述了PepT2与药物相互作用的研究以及PepT2转运药物底物结构特征的研究进展.

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MicroRNA与心脏疾病

王林,王慧，孟宪敏

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 9-14.

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微RNA（microRNA，miRNA)是小分子非编码调控RNA,含有大约22个核苷酸，可和靶基因mRNA的3′非编码区相互配对结合,在转录后水平负调控靶基因的表达.微RNA调控细胞的生长、代谢、分化和凋亡, 进而参与生物体的生长发育. 研究表明,微RNA参与人类多种生理和病理过程的调控．最近几年,对微RNA表达调控机制及其调控相关疾病的研究取得了诸多显著性的进展, 心脏疾病相关微RNA更加成为研究的热点.此外，一系列基于微RNA治疗心脏疾病的策略方法,例如用反义寡核苷酸抑制微RNA和微RNA补偿的方法,也取得了突破的成果. 总之，微RNA的研究及应用将为心脏疾病的诊断和治疗提供新的途径.

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SARS冠状病毒PLpro蛋白酶的结构与功能

杨宇东，孙莉，陈忠斌

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 15-21.

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SARS冠状病毒基因组编码2种病毒蛋白酶，即木瓜样蛋白酶（PLpro）和3C样蛋白酶(3CLpro).其中，PLpro蛋白酶结构与功能研究是近年来冠状病毒分子生物学研究的热点之一. PLpro蛋白酶参与SARS冠状病毒1a(1ab)复制酶多聚蛋白N端部分的切割加工，是SARS冠状病毒复制酶复合体(RC)形成的重要调节蛋白分子；最新研究表明，SARS冠状病毒PLpro蛋白酶是一种病毒编码的去泛素化酶（DUB）,对细胞蛋白具有明显去泛素化作用；而且对泛素(Ub)和泛素样分子ISG15均具有活性. PLpro蛋白酶对宿主抗病毒天然免疫反应具有负调节作用，是SARS冠状病毒的一种重要干扰素拮抗分子.PLpro蛋白酶是一种多功能病毒蛋白酶.本文结合作者课题组研究工作，对SARS冠状病毒PLpro蛋白酶结构和功能研究最新进展进行综述.

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肽链释放因子识别终止密码子的机制

王艳，柴宝峰,梁爱华

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 22-29.

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肽链释放因子(polypeptide release factor, RF)是参与细胞内蛋白质合成终止过程中新生肽链释放的一组重要的蛋白质，包括两类，即第一类肽链释放因子(classⅠrelease factor, RFⅠ)和第二类肽链释放因子(classⅡrelease factor, RFⅡ).关于第一类肽链释放因子识别终止密码子的机制和功能位点是目前分子细胞生物学领域的一个研究热点，第二类肽链释放因子作为一类GTP酶，在第一类肽链释放因子识别终止密码子和肽链释放过程中的协同作用也备受关注.近些年来，通过构建体内和体外的测活体系，对第一类肽链释放因子识别终止密码子的机制的研究取得了一些进展，提出了多种假说和模型，尤其是对第一类肽链释放因子的晶体结构及两类肽链释放因子复合体的空间结构的研究，为揭示真核生物细胞内蛋白质合成终止机制提供了直接的证据.

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HMG盒蛋白1抑制巨噬细胞移动抑制因子启动子的转录激活

雷福明,毛泽斌

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 30-35.

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HMG盒蛋白1（HMG box-containing protein 1, HBP1）是一种转录抑制因子. HBP1表达上调可抑制肿瘤细胞的增殖和转移，并且在肿瘤细胞中HBP1常常发生丢失或转位，这表明HBP1是一种抑癌基因. HBP1所调节的靶基因无疑将为HBP1的肿瘤抑制机制提供新的线索.本研究通过生物信息学分析发现，在促细胞增殖基因巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor， MIF）启动子区域-811 bp至-792 bp发现高亲和力的HBP1反应元件.缺失和突变分析表明，HBP1通过该元件抑制MIF启动子活性.此外，免疫共沉淀研究显示，HBP1在细胞内与该元件结合，并且抑制MIF的转录.功能分析进一步证实，在细胞培养液中加入重组MIF可部分消除HBP1对大肠癌细胞LOVO的抑制作用.这些结果提示，MIF是HBP1的一个靶基因.HBP1通过抑制促细胞增殖基因MIF的表达抑制肿瘤细胞生长.

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RECS1负调控肿瘤坏死因子受体2介导的NF-κB激活

蔡慈峰，吴明江，廖志勇

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 36-42.

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RECS1(responsive to centrifugal force and shear stress gene 1)是一血液剪切力应答蛋白.RECS1基因敲除的小鼠年老时易患主动脉囊性中层坏死并表现有大动脉扩张症，暗示RECS1可能参与调控血管的发育重塑.免疫组化分析发现,RECS1基因敲除(RECS1 knockout, RECS1 KO)的小鼠主动脉基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）的表达水平明显提高，但RECS1的结构与功能及相关作用机理仍不清楚.研究发现,RECS1是肿瘤坏死因子受体2（tumor neucrosis factor receptor 2, TNFR2）的结合蛋白质.报告基因检测实验表明,RECS1能特异地抑制TNFR2特异的激动性抗体或过量表达TNFR2诱导的核转录因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）活化.NPLY模体缺失突变的RECS1不能结合TNFR2，并丧失对TNFR2介导NF-κB活化的抑制能力.稳定表达RECS1的MEFS细胞中，TNFR2特异的激动性抗体诱导的IκB (inhibitor of NF-κB)降解和NF-κB靶基因白介素-6（interleukin-6，IL-6）的表达均受到明显抑制.该研究揭示了RECS1通过与TNFR2的相互作用，负调控TNFR2介导肿瘤坏死因子信号传递的新功能及RECS1参与血管发育重塑调控的可能机制.

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转萝卜过氧化物酶RsPrx1基因保护拟南芥氧化损伤

王一帆，王丽，彭高松，杨少华，范莉，杨静,王林嵩

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 43-47.

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为了研究萝卜过氧化物酶RsPrx1的功能，本实验构建了RsPrx1的cDNA克隆和表达载体pBI121-RsPrx1.通过农杆菌用浸花法转染拟南芥，获得转基因植株.对转基因植株的研究表明, 萝卜过氧化物酶RsPrx1可以抑制植物根和株高的生长，但不影响植物的成熟.当植物受到氧化应激时，RsPrx1可以保护植物免受氧化损伤. 因此，萝卜过氧化物酶RsPrx1参与植物的生长发育但不起主要作用，并具有抗氧化作用.

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慢病毒介导的甲胎蛋白敲减表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖

张艳,强冉，唐晓燕，李怡璇，刘民，李欣，汤华

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 48-54.

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甲胎蛋白（AFP）是原发性肝癌的标志物.本实验室前期研究表明,AFP的表达与肝癌细胞的增殖及细胞周期相关.为了建立高效稳定的AFPsiRNA细胞导入方法，本研究构建了AFP慢病毒siRNA干涉载体pRNAT-U6.2/AFPsiRNA.并将其转入HEK293细胞后，Western 印迹表明,pRNAT-U6.2/AFPsiRNA的干扰效率为88.7%（P<0.05）. pRNAT-U6.2/AFPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞包装成慢病毒后感染HepG2细胞，感染3 d时GFP的表达量达95%，感染35 d的子代细胞中GFP的表达量仍稳定在85%.GFP表达量的观察显示,慢病毒载体可以高效并稳定表达外源基因. Western 印迹结果也显示,HepG2细胞被病毒感染3 d和25 d后，AFP表达水平均有降低，抑制率分别为74.8%和63.4%(P<0.05).克隆形成实验表明,AFP沉默后，细胞克隆形成个数降低63%(P<0.01),表明HepG2细胞增殖能力受到抑制.

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RNA干扰敲减PIWIL1表达对人结肠癌细胞SW620增殖，粘附及侵袭能力影响

任超逸，吴海东，浦永，汤石明，李欣，刘民，汤华

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 55-61.

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PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins )PIWI亚家族的成员之一，在睾丸中特异表达. 其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平，首次证实了在SW620细胞中，PIWIL1相对PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4，其表达水平最高（P﹤0.05）.构建表达针对PIWIL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒，并用Western 印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中，通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验，分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力，增强了SW620细胞的粘附能力.提示PIWIL1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用.

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帕金森病患者脑脊液蛋白质组学分析

孙太欣,，彭国光，薛鹏，杨福全

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 62-70.

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帕金森病（Parkinson′s disease，PD）是一种中枢神经系统慢性进展性疾病.本研究采用双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）分离脑脊液（cerebrospinal fluid,CSF）蛋白，获得2-DE图谱，通过ImageMaster 2D Elite软件分析寻找两组的差异蛋白点.结果显示,PD患者CSF中有4个蛋白点丰度下降，22个蛋白点丰度上升.还利用电喷雾质谱（electrospray ionization-tandem mass spectrometric，ESI-MS）对差异蛋白点进行鉴定，发现丰度上升的蛋白点有电压依赖性钙通道α2/δ1亚基，结合珠蛋白，β2-微球蛋白和阿朴脂蛋白A-IV前体，丰度下降的蛋白点为转铁蛋白和转甲状腺蛋白.研究发现,PD患者与对照组CSF蛋白质表达有明显差异，对差异蛋白进行质谱鉴定并了解它们的功能，为以后进一步研究他们在PD发病机制和病程进展中的作用奠定基础.

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翘嘴鳜NADPH氧化酶2个催化亚基cDNA的克隆和表达特征

胡宝庆，刘毅，文春根

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 71-80.

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吞噬细胞NADPH氧化酶能生成用于清除病原微生物的活性氧(reactive oxygen species, ROS)，在机体的防御体系中起着非常重要的作用.本文利用RT-PCR结合RACE-PCR的方法，克隆到翘嘴鳜NADPH氧化酶的催化亚基gp91phox和p22phox的cDNA全长.并研究两者在正常的翘嘴鳜和注射了柱状黄杆菌灭活菌苗（FKG4）的翘嘴鳜组织中的表达模式.结果表明,gp91phox基因cDNA序列全长2 037 nt，开放阅读框长度为1 698 nt，翻译成565个氨基酸；p22phox 基因cDNA序列全长1 296 nt，开放阅读框561 nt，翻译成186个氨基酸.将这2个亚基推导的氨基酸序列与人的对应亚基相比，相似性分别为68.7%和60.8%，且具有相似的结构域和功能域，说明翘嘴鳜与人的NADPH氧化酶具有相似的功能活性.半定量PCR分析显示,在翘嘴鳜血液、脑、心脏、肾、肝、脾、胸腺等11种组织中均能检测到gp91phox和p22phox的基因表达.经FKG4免疫后，gp91phox在翘嘴鳜血液、头肾和脾3种组织中的表达量显著上升，p22phox在头肾和脾2种组织中的表达量显著上升.由此推断，NADPH氧化酶可能参与了机体的抗菌免疫应答.

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慢性阻塞性肺疾病与非慢性阻塞性肺疾病吸烟者肺组织蛋白质组学比较分析

欧阳卿,，胡瑞成，戴爱国，谭双香

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 81-87.

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吸烟是导致慢性阻塞性肺疾病（COPD）发生发展的主要原因之一.但吸烟者是否发生COPD存在个体差异，其机制尚未完全阐明.蛋白质组学研究能够高效率发现疾病相关蛋白并为深入研究疾病的发病机制提供线索.本研究运用二维凝胶电泳（2-DE）和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)蛋白质组学研究方法结合生物信息学数据,对吸烟COPD患者和非COPD吸烟者肺组织表达的差异蛋白进行筛选和鉴定,共鉴定出24种差异蛋白，涉及基本代谢酶类、氧化应激相关酶类、凝血/纤溶相关蛋白、蛋白降解相关酶以及细胞生长分化相关蛋白等.本研究结果为进一步探索COPD的发病机制提供了新的线索.

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本刊入选世界卫生组织西太平洋地区医学索引（WPRIM）

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 87-87.

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世界卫生组织（World Health Organization, WHO）于2005年启动了全球卫生图书馆（Global Health Library, GHL）项目，拟建立基于互联网的卫生虚拟图书馆，旨在便捷地向全世界提供卫生相关信息．GHL的一项重要内容是建立全球医学索引（Global Index Medicus，GIM），提供全世界的医学文献题录及文摘．WHO西太平洋地区医学索引（The Western Pacific Region Index Medicus, WPRIM）是GHL的一个重要组成部分，主要收录WHO西太平洋各成员国和地区所出版的覆盖卫生、生物医学领域的期刊及灰色文献的题录（包括文摘）信息．WPRIM检索服务平台（http://wprim.wpro.who.int）将于2010年5月正式开通．
经过WPRIM中国生物医学期刊评审委员会评审，并经WPRIM期刊评审委员会审核，本刊已获准加入WPRIM．

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电穿孔介导的人对氧磷酶1基因在小鼠原代骨骼肌细胞中的转移与表达

张驰，朱洁，臧宇辉，张峻峰，秦浚川

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(01): 88-94.

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非病毒载体介导的外源基因在哺乳动物骨骼肌细胞中的表达往往受限于基因转移效率的低下.本文利用电穿孔为基因转移方法，研究了人对氧磷酶基因（PON1）在原代培养的小鼠骨骼肌成肌细胞和成熟肌管中的转移与表达.在上述细胞中加入PON1的真核表达质粒后实施一定条件的电穿孔，通过测定不同时间点培养基与细胞裂解液中芳香酯酶活性的变化以衡量PON1的表达与分泌.结果显示，PON1在成肌细胞中表达的最佳电穿孔条件为800 V/cm, 20 ms and 50 μF；在肌管中为700 V/cm, 20 ms and 50 μF.在此条件下，细胞存活率均达75%以上，且表达的蛋白均可有效分泌.RTPCR分析同样验证了PON1 mRNA在骨骼肌细胞中的高效表达.电穿孔介导的PON1基因表达效率显著高于传统的基因转移方法如磷酸钙法和阳离子脂质体法.因此，以不同分化阶段的骨骼肌细胞为靶细胞，通过电穿孔介导外源基因表达切实可行，并可能在细胞工程与基因治疗等领域均具有潜在的应用前景.

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