Adipophilin是PAT (perilipin/adipophilin/Tip47)蛋白家族的一个成员，定位于细胞质和细胞内的脂滴表面.Adipophilin能促进脂质蓄积和细胞内脂滴的形成，在泡沫细胞的形成中起重要作用，是动脉粥样硬化脂质蓄积的一个标记物.Adipophilin基因敲除小鼠能预防高脂饮食诱导的脂肪肝产生，且在脂肪组织分化过程中也起着一定的作用.本文概述了adipophilin在细胞内脂质代谢中的作用.
植物种子油是一种可再生资源，亦用作生物燃油和化学工业原料. 一些野生植物能高水平合成积累羟化、环氧化和共轭脂肪酸等具有重要工业应用价值的特异脂肪酸.催化这些特异脂肪酸合成的酶主要是类脂肪酸去胞和酶2(类FAD2). 由特异脂肪酸合成到三酰基甘油脂 (TAG) 形成还需要酰基转移酶 (如DGAT) 的参与. 在油料作物种子中表达类FAD2酶及其相关基因(如DGAT)，已培育出了能合成积累一定含量特异脂肪酸的工程油料品系，为基于农作物生产高附加值工业用油脂开辟了新途径. 本文论述了参与特异脂肪酸生物合成途径的关键酶基因、油料作物代谢工程策略，以及应用工程油料作物大规模生产重要工业用脂肪酸的研究进展、存在问题和应用前景等.
主要研究1个由Ds插入所造成的大片段缺失拟南芥突变体tgd(ten gene deletion)．这个突变体来自于基因陷阱拟南芥突变体库．对这一突变体的后代卡那霉素抗性分离比分析和Southern杂交表明,只有1个Ds拷贝插入此突变体基因组中，但是Tail-PCR和随后用特异基因序列为引物的验证PCR证实在Ds插入过程中造成了30 kb基因片段的缺失．根据对拟南芥基因组序列的注释，这30 kb的序列中包含10个基因．这一多基因缺失突变体有多效性表型．整株表现为株型矮小，发育迟缓，根系不发达，极易失水而死，茎细弱，较短，花序不正常．其中,莲座叶的表型最为明显，突变体叶形较细，叶片较厚．为了研究这些基因在多效性表型产生中所发挥的功能，对来自ABRC种子库中所有基因的T-DNA插入突变体，即salk line的表型进行了分析，发现所有基因的T-DNA插入突变体均没有可见的表型．这一现象暗示,突变体tgd的表型是10个基因缺失的综合效应，但是10个基因的相互关系以及与tgd表型的相互关系仍有待于继续研究．
外部引导序列（EGS）技术（The EGS-based technology）是一种新型的基因沉默技术，能诱导内源性的核酶 P（RNase P）对靶mRNA进行有效切割. 以人类巨细胞病毒（HCMV）UL49基因mRNA片段为靶序列，基于前人实验基础上设计出更为精简与高效的改进型EGS (miniEGS)，DNA片段长度仅为12 bp. 构建稳定表达HCMV UL49的细胞系，通过应用荧光定量PCR及Western 印迹分别鉴定miniEGS对内源性UL49的抑制效率.结果显示，miniEGS能在HeLa细胞中能达到很高的转染效率（97.9%），并且在转染稳定表达UL49的HeLa细胞系后，发现UL49基因的mRNA与蛋白表达水平都出现明显下降（50%）.研究表明, 改进型的EGS序列不仅能有效抑制目的基因的表达，同时因其序列设计的精简性与高效性，可更好地应用到以后的抗病毒研究中.
粗毛栓菌（Trametes gallica）能够分泌多种胞外氧化酶并且快速降解木质纤维素.为了快速高效分离鉴定粗毛栓菌木质纤维素降解酶相关基因，用Trizol试剂提取不同培养条件下粗毛栓菌总RNA，用CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit和Advantage®2 PCR Kit成功构建了该菌全长cDNA文库.原始文库滴度为1.5×105cfu，重组率达99%，插入片段在0.7～2.0 kb之间，平均大小约1 kb. 随机取16个重组子进行测序，全长cDNA序列完整性率为85.7%；并筛选到1个漆酶基因，编码区长1 551 bp，预测的蛋白质由517个氨基酸残基组成，分子量为55.41 kD，等电点为4.76.用半定量RT-PCR法分析了该漆酶基因在不同培养条件下的表达水平. 结果显示，高浓度的碳源，氮源，Cu2＋均能诱导此基因的表达，该结果为漆酶基因的表达调控机制的深入研究奠定了基础.
透明质酸合酶3（hyaluronan synthase 3，HAS3），是一个参与透明质酸合成的酶分子，在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制，本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE（rapid amplification of cDNA ends，cDNA末端快速扩增）技术鉴定了HAS3基因的转录起始位点，发现了丰度和转录起始位点不同的两种新的HAS3基因剪接变异体.通过PCR定向克隆策略，构建了覆盖HAS3基因5′端侧翼区起始密码子ATG上游约4.3 kb区域的一系列HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明，HAS3基因启动子定位于转录起始位点附近约450 bp的区域内.转录因子结合位点分析表明，HAS3基因启动子缺乏典型的TATA盒，但含有典型的GC盒以及C/EBP等其它潜在的转录因子结合位点. 结果提示,Sp1和C/EBP等转录因子可能参与HAS3基因的转录调控.
为了研究过氧化酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达在β胡萝卜素影响乳腺癌MCF7细胞活力中所起的作用，采用MTT法测定细胞活力、Western 印迹检测细胞中PPARγ的蛋白质水平，用RT-PCR从mRNA水平检测细胞内PPARγ、P21WAF1/CIP1、COX-2和P27表达.研究发现，β胡萝卜素显著抑制人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的生长，β-胡萝卜素对细胞生长的抑制作用呈现出时间和计量依赖关系；β-胡萝卜素能够呈现时间效应地从mRNA和蛋白质水平显著上调PPARγ的表达，β-胡萝卜素能够通过PPARγ调节P21WAF1/CIP1和COX-2mRNA水平；PPARγ的抑制剂GW9662和抗氧化剂还原型谷胱甘肽（GSH）都能部分阻止由β-胡萝卜素引起的细胞活力下降.研究结果提示，激活PPARγ途径和调制细胞氧化状态是β胡萝卜素对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制效应原因之一.
HIV-1复制需要HIV-1整合酶将其环状DNA整合进宿主DNA中，这其中包括2个重要反应，即“3′-加工”和“链转移”，两者均由HIV-1整合酶催化完成.阻断其中的任一反应,都能达到抑制HIV-1复制的目的.因此,了解HIV-1整合酶的完整结构和聚合状态,对深入探讨其作用机理及设计新型抑制剂具有重要的指导作用.然而，迄今为止仅有HIV-1整合酶单独结构域的晶体结构可供参考，而其全酶晶体结构尚未获得解析.本研究利用分子模拟技术，通过蛋白质蛋白质/DNA分子对接、动力学模拟等方法，构建了全长整合酶四聚体的结构模型、HIV-1 DNA与整合酶复合物的结构模型，进一步从理论上证实HIV-1整合酶是以四聚体形态发挥催化作用,明确“3′-加工”和“链转移”在HIV-1整合酶上的催化位点.同时，通过与作用机理相似的细菌转座子Tn5转座酶等的结构比对，推测HIV-1整合酶的核心结构域中应有第2个Mg２＋存在，其位置螯合于Asp64与Glu152之间.在HIV-1整合酶结构研究的基础上，有望进一步设计出新的抗艾滋病药物.
近年来研究发现,成纤维细胞生长因子(FGF)-21是一种新的代谢调节因子.为了深入研究人源FGF-21（hFGF-21）的生物活性，本实验利用SUMO高效表达载体，高效表达成熟的hFGF-21，并利用小鼠3T3-L1脂肪细胞检测hFGF-21的糖代谢活性．实验结果表明，hFGF-21可促进脂肪细胞的葡萄糖吸收，且葡萄糖吸收效率呈剂量依赖性．hFGF-21作用4 h即可促进脂肪细胞糖吸收，其活性可持续24 h以上．hFGF-21与胰岛素共同作用的葡萄糖吸收效果，明显优于它们的单独作用结果，说明hFGF-21与胰岛素发挥协同作用．脂肪细胞经hFGF-21预处理后，显著增加了胰岛素促进脂肪细胞吸收葡萄糖的效率，说明hFGF-21可以增加胰岛素的敏感性．本实验为临床应用hFGF-21治疗糖尿病，增加胰岛素敏感性提供了依据．
探讨在体外高良姜素对人食管鳞癌KYSE-510细胞的抑制作用以及可能的作用机制.MTT结果表明，高良姜素对人食管鳞癌KYSE-510细胞具有很强的生长抑制作用.光学显微镜、激光共聚焦显微镜以及流式细胞仪的分析结果表明，高良姜素可诱导KYSE-510细胞分化.荧光定量RT-PCR和Western印迹分析结果表明，高良姜素诱导P21waf1、抑制细胞周期蛋白B1和细胞周期蛋白D1的表达，推测上述基因可能是高良姜素实现细胞分化诱导作用的靶基因.
曲古抑菌素A (trichostatin A, TSA) 作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor, HDACi)，是近年来发现的一类新型抗肿瘤药物，对多种实体瘤及血液系统肿瘤具有显著抗肿瘤作用.体外实验及动物模型显示,TSA对于乳腺癌也有一定杀伤作用.目前认为，TSA可以通过抑制组蛋白去乙酰化作用而影响细胞内基因转录，但其抗肿瘤作用的分子机理尚不清楚.本文通过MTT法检测不同剂量的TSA对乳腺癌细胞生长的影响，发现TSA可以剂量依赖地抑制乳腺癌细胞MCF-7的生长.膜联蛋白（annexin）-Ⅴ/PI双染法和PAPR水解检测证实TSA同时促进MCF-7细胞凋亡.Western 印迹分析表明，在分子水平上，TSA诱导MCF-7细胞中的周期抑制蛋白p21表达，同时使得抗凋亡因子Bcl-2的表达水平降低，表明TSA可能通过调控p21和Bcl-2的表达来实现抑制乳腺癌细胞生长并促使其凋亡，从而发挥抗肿瘤作用.
蛋白酶体抑制剂MG132诱导人白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa凋亡，用3个不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa，通过MTT检测、annexin Ⅴ/ PI 双染法、流式细胞术、酶标仪和Western 印迹分别检测MG132对K562细胞和HeLa细胞的生长效应、细胞凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平和caspase-3活性变化的影响.蛋白酶体抑制剂MG132诱导K562细胞凋亡明显，对HeLa细胞诱导凋亡不明显.结果表明,蛋白酶体抑制剂MG132特异性诱导不同肿瘤细胞凋亡的程度存在明显差异.
异戊烯基化吲哚类生物碱广泛存在于麦角菌、青霉菌和曲霉菌中，具有一定的药理学活性，与未异戊烯基化的前体在生物活性方面具有明显的差异.曲霉菌中的某些异戊烯基化吲哚类生物碱具有抗癌活性，如烟曲霉毒素C（fumitremorgin C）、tryprostatin B，但其天然产量低且不易分离，利用化学酶合成法可很容易地将前体转化为异戊烯基化吲哚类生物碱.异戊烯基转移酶FtmPT1对二甲丙烯基二磷酸（dimethylallyl diphosphate，DMAPP）具有专一性，但可以接受不同的芳香族底物.早期研究发现，FtmPT1能接受含色氨酸的不同环二肽为底物，但以cyclo-L-Trp-L-Tyr和cyclo-L-Trp-L-Phe为底物时，酶的相对活性很低，其产物量少，无法用于合成产物.本实验通过优化酶反应条件来提高其产量.将已构建的含ftmPT1的质粒在大肠杆菌中诱导表达，经Ni-NTA亲和柱纯化后用于酶反应.实验结果表明，通过增加酶量（终浓度2.8 μmol/L）、延长培养时间（37 ℃，24 h），以cyclo-L-Trp-L-Tyr和cyclo-L-Trp-L-Phe为底物的酶反应产率分别达到49.3%和21.3%，产物经1H-NMR、1H-1H-COSY和ESI-MS鉴定，其结果与预期吻合.据检索，这2个化合物均为新化合物，分别命名为cyclo-C2-1′-DMA-L-Trp-L-Tyr和cyclo-C2-1′-DMA-L-Trp-L-Phe.
