中国生物化学与分子生物学报

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王建华,于丽莉,陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 137-143.

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从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印迹方法分别检测被 3种寡核苷酸转染的RF 4 8细胞在 1～ 5d内周期蛋白E2基因及它可能调控下游靶基因之一FGFR基因和蛋白质的表达 ,检测寡核苷酸转染的RF 4 8细胞周期和凋亡细胞 ,观察寡核苷酸转染RF 4 8细胞的软琼脂集落形成、运动能力和体外侵袭能力 .结果表明 ,修饰的反义寡核苷酸在有效地抑制RF 4 8细胞中周期蛋白E2表达上调后 ,RF 4 8细胞的迁徙能力被显著降低 ,其增殖、运动能力没有变化 .周期蛋白E2基因的主要作用并不是促细胞分裂 ,也与细胞的增殖、运动能力无关 ,周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌的迁徙性存在相关性 ,其触发肿瘤的侵袭性可能通过某种机制调控其下游靶基因之一成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)基因的表达来实现的

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重组乳酸乳球菌X-脯氨酰二-肽酰基-氨基肽酶的纯化及动力学特性(英文)

唐松山,吴洁,谢燕飞,明欣,胡卓逸,刘景晶

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 144-150.

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重组的乳酸乳球菌X 脯氨酰二肽酰基氨基肽酶是一个工具酶 ,它对基因构建的神经肽或活性多肽的转活具有重要意义 .通过细菌细胞的破碎 ,洗涤 ,冷冻离心 ,透析 ,DEAE 纤维素 5 2柱层析等工艺过程达到电泳纯 .该酶比活为 11.92 6U mg ,纯化倍数为 14.37倍和总活性收率为5 5 .5 6% .通过SDS PAGE和凝胶柱层析法 ,测得该二肽酶有单肽链组成 ,分子量 89KD .在该酶的动力学研究中 ,针对特异性底物L 甘氨酰 L 脯氨酰对硝基苯胺 ,求得该酶的米氏方程式 1 V =0 0 4 8 [S]+ 0 2 5 66(r =0 994 ) .它的Km 值为 0 1871mmol L ,最大反应速度Vmax为 3 897μmol·L-1·min-1.该酶可被苯甲酰基磺酰氟 ,胰蛋白酶抑制剂和Mn2 +,Ba2 +,Cu2 +andZn2 +等金属离子抑制 ,但可被Mg2 +激活 .进一步试验显示 ,当Cu2 +和Zn2 +浓度增加到 3 72 6mmol L ,抑制作用明显增强 .低浓度的EDTA Na2 (≤ 0 62 12mmol L)不影响酶的活性 .因此 ,该X 脯氨酰二肽酰基氨基肽酶是一个金属离子非依赖性的丝氨酸蛋白酶

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用基因工程菌酶法和化学法制备-D-对羟基苯甘氨酸(英文)

李志强,胡卓逸,刘景晶

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 151-155.

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D 对羟基苯甘氨酸 (D p HPG)是制备羟氨苄青霉素、羟氨苄头孢菌素和羟氨唑头孢菌素等β 内酰胺类抗生素的重要中间体 ,同时它也用于多种多肽类激素及农药的合成 .在D 对羟基苯甘氨酸的多种制备方法中 ,生物酶转化法具有原料易得、工艺简单、耗能少、产率高、成本低、光学纯度好、三废污染少等优势 .为利用生物酶转化法制备D 对羟基苯甘氨酸 ,首先用尿素、乙醛酸和苯酚合成底物D ,L 对羟基苯海因 ,然后利用D 海因酶基因工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht细胞作酶源 ,进行底物D ,L 对羟基苯海因到中间体N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸的酶法转化 ,最后用化学法将N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸进一步转化为D 对羟基苯甘氨酸 .结果表明 ,底物D ,L 对羟基苯海因的收率为 60 % .8L体积的发酵小试实验表明 ,发酵 12h ,工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht的海因酶活力为 30 0 0U L ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳薄层扫描结果显示海因酶表达量约占菌体总可溶性蛋白质的 60 % ,菌体收率为 6% .8L体积的海因酶转化实验表明 ,在 4 %底物D ,L 对羟基苯海因和 1%菌体 (湿重 )pH 9 0情况下 ,反应 5h ,D ,L 对羟基苯海因的转化率可达 96% .在酸性条件下 ,用NaNO2 将N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸转化为D 对羟基苯甘氨酸 ,反应 2h ,转

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应用抑制性消减杂交技术筛选流感病毒感染宿主应答基因

陈忠斌,杨静,王华,孙偶军,王升启

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 156-161.

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从宿主系统寻找病毒感染特异性相关的生物大分子是研究病毒药物靶标和诊断标志物的新方向 .为了筛选宿主细胞中流感病毒感染特异性基因 ,采用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,以流感病毒A 鲁防 93 9(H3N2 )感染MDCK细胞及正常MDCK细胞为材料 ,构建病毒感染特异性差减cDNA文库 ,PCR法扩增鉴定其中插入片段大小 .从差减文库中随机挑取 10 0个克隆进行测序 ,用生物信息学方法对其同源性和基因功能进行分析和预测 .结果显示 ,成功构建了流感病毒感染特异性差减cDNA文库 ,文库中cDNA片段长度在 2 5 0～ 10 0 0bp之间 .从文库中随机选取 10 0个克隆测序 ,获得了 95个有效序列 ,经blast同源性分析发现 ,大部分基因为参与宿主细胞能量代谢和蛋白质生物合成过程中的基因 ;其中 19个为无任何功能线索的新基因片段 .流感病毒感染特异性差减cDNA文库的建立和筛选出病毒感染应答候选新基因cDNA片段 ,为发现新型流感病毒药靶和诊断标志物以及病毒感染机制研究打下基础

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通过DNA改组技术获得高活性β-葡萄糖苷酸酶

熊爱生,姚泉洪,彭日荷,陈建民,李贤,范惠琴

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 162-167.

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β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构建了库容为 10 8的突变体库 .经过活性的筛选 ,得到活性提高的克隆 ,再以此为基础 ,经过新的改组、筛选得到活性大幅度提高的克隆GUS2 4 .基因测序显示 ,GUS2 4与GUS基因之间的同源性为 99 7% ,共有 6个核苷酸位点发生了改变 ,分别是 :379位的A突变为G ,396位的T突变为C ,711位的G突变为A ,95 8位T突变为C ,990位的T突变为C ,1649位的A突变为G .核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,3个氨基酸发生了突变 ,12 7位的Ser突变为Gly ,32 0位的Trp突变为Arg ,5 5 0位的Asn突变为Ser.X gluc染色检测和荧光测活结果显示GUS2 4基因表达的 β 葡萄糖苷酸酶基较GUS基因表达产物活性提高 3倍

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人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备

莫永炎,刘亚伟,王静珍,邓鹏,秦清和,杨志刚,姜勇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 168-172.

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为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗 ,为下阶段深入AWP1功能研究提供了重要的基础

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NIH3T3细胞恶变早期相关新基因的鉴定与功能分析

杨劲松,郑新民,陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 173-181.

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利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异片段 .发现其中含有 2 9种已知基因 ,12种已知ESTs ,6种未知ESTs .对EST片段 ,利用芯片拼接 (insilicocloning)的方法获得 2条新的带有完整开放阅读框 (ORF)的全长cDNA .利用生物信息学方法分析其同源性、二级结构、功能模体(motif)、保守区、结构域和家族分布情况 ,并且对这 2条新全长cDNA进行部分克隆测序鉴定 ,用半定量RT PCR实验证实其差异表达的真实性 .结果表明 ,这 2条全长cDNA为新基因 (GenBankAY0 35 2 12 ,AY0 35 2 13) ,它们在PTPα诱导表达前后确实存在差异表达 ,并与细胞能量代谢及酶功能相关 ,为进一步探讨肿瘤早期形成机理打下基础

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北非蝎昆虫毒素AaHIT1基因的原核表达和转基因分析

苏力坦·阿巴白克力,姬生健,朱玉贤

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 182-185.

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将北非蝎昆虫毒素 (AndroctonusaustralisHectorinsecttoxin ,AaHIT1)基因克隆入温度诱导表达载体pBV2 2 0 ,并在宿主菌E .coliDH5α中进行诱导表达 .表达定位分析发现 ,AaHIT1大部分存在于包涵体中 .蛋白质N 端测序证实了体外表达的AaHIT1蛋白的正确性 .将AaHIT1基因转化入烟草中并获得了转基因植株 ,基因组PCR、RT PCR及Northern印迹分别证实AaHIT1基因已正确地插入到烟草基因组中并已得到表达 .抗虫实验表明 ,该转基因烟草对白粉虱有明显的抗性 .该研究为蝎毒AaHIT1的生物学毒性实验以及获得抗虫转基因作物奠定了基础

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核苷酸切除修复基因XPA反义RNA表达载体的构建及其抑瘤功能

吴晓明,范玮,蒋易,周李承,郝巧玲,周宜开

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 186-189.

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采用RT PCR方法扩增出 4 2 6bp着色性干皮病A(xerodermapigmentosumgroupA ,XPA)cDNA片段 (2～ 4 2 7bp) ,反向插入pcDNA3 1质粒构建XPA反义RNA表达载体 .经测序证实 ,该片段序列与XPAmRNA对应片段完全互补 .通过脂质体Lipofectamine 2 0 0 0将重组质粒转染肺癌A5 4 9细胞 ,RT PCR检测表明转染XPA反义RNA重组质粒能够抑制肺癌细胞XPAmRNA表达 ;MTT实验表明转染XPA反义RNA的肺癌细胞对顺铂敏感性增强 .本研究为深入探讨NER途径基因功能及临床克服肿瘤耐药提出了一个新的思路

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前体mRNA剪接蛋白Tra2β1的抗体制备及鉴定

陈献华,李静,孙凯华,林万敏,徐平

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 190-194.

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Tra2 β1是Tra2 β前体mRNA剪接调节蛋白家族中的一个组织分布最广、表达量最多的成员 ,它在选择性前体mRNA剪接中有调节功能 ,而在基础性剪接中不是必需的 .为便于对该蛋白功能的进一步研究 ,需要制备能特异地检测Tra2 β1蛋白的抗体 .选择包含Tra2 β1的N端 12个氨基酸的特异编码序列的Tra2 β2全长编码序列 (共 117个核苷酸 ) ,将其克隆至pGEX 3X表达载体形成GST融合基因 ,并以诱导表达和纯化的该融合蛋白为抗原免疫新西兰兔 ,获得了相应的抗体 .Western印迹和免疫细胞化学分析结果显示 ,获得的抗体能特异地检测Tra2 β1蛋白

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重组虎纹捕鸟蛛毒素Ⅰ用pET_(31)b载体的表达和纯化

刁建波,刘君梁,梁宋平

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 195-200.

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化学全合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )基因在大肠杆菌中被表达 ,采用pET31b载体 ,表达产物N端为大肠杆菌酮基立体异构酶的融合蛋白 ,经亲和连续 6个组氨酸的亲和柱层析后 ,溴化氰切割融合蛋白 ,再经高效液相色谱反相柱纯化 ,得到了重组虎纹捕鸟蛛毒素Ⅰ .质谱分析及N端测序表明 ,rHWTX Ⅰ系正确表达产物 .还原复性的rHWTX Ⅰ表现出与天然HWTX Ⅰ一致的生物学活性

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小鼠2-细胞胚胎ATP合成酶6基因特异表达分析及鉴定

杨立新,郁卫东,陈清轩

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 201-204.

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合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个小鼠 2 细胞胚胎与成熟卵母细胞 (MII细胞 )中分离了 2个差异片段 ,片段 2同小鼠睾丸中表达的一个未知片段具有高度同源性 .经过cDNA文库构建、筛选 ,分离到其全长cDNA .序列分析结果表明 ,该基因为小鼠ATP合成酶亚单位 6基因 .ATP合成酶亚单位 6基因由线粒体DNA编码 ,与细胞内ATP的合成相关 .小鼠 2 细胞胚胎特异表达的ATP合成酶亚单位 6基因可能与胚胎正常发育相关

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MPT63核酸疫苗的制备及其免疫原性

潘怡,蔡宏,李淑霞,李唐,朱玉贤

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 205-209.

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扩增结核分枝杆菌分泌蛋白MPT63编码序列 ,克隆于真核表达载体pJW 4 30 3中 .转染COS 7细胞 ,用Western印迹检测表明该基因在细胞内得到正确表达 .用该质粒连续免疫C5 7BL 6小鼠 3次后 ,用纯化的重组蛋白MPT63检测小鼠血清中的抗体 ,发现抗体滴度达到 10 5,免疫动物中γ干扰素的含量达到 2 5 8± 0 2U ml ,为空载体DNA免疫对照组的 2 0倍以上 ,说明MPT63核酸疫苗在实验动物体内引起了较强的免疫应答

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杨树菇凝集素AAVP具有抗病毒和促进菌丝分化功能

孙慧,赵辰光,仝鑫,齐义鹏

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 210-214.

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杨树菇凝集素 (AAVP)是一种新的真菌凝集素 .用半叶法检测证明 ,AAVP具有抑制烟草花叶病毒 (TMV)侵染的活性 .等电聚焦法证实了AAVP可以与TMV的外壳蛋白结合 .用滤纸圆片法检测 ,AAVP对 3种植物病原真菌没有抑制作用 .AAVP滴加在菌丝的表面 ,显著地促进了杨树菇和毛木耳的菌丝分化 ,促进子实体的形成 .Western印迹表明 ,AAVP存在于菌丝、菌柄和菌盖等组织中 ;假猴头 ,香菇 ,草菇 ,杏孢菇 ,灵芝等大型真菌的子实体中存在着多种与AAVP的抗血清有交叉反应的蛋白质 .大多数大型真菌中可能存在着与AAVP具有相似血清学特征的蛋白质家族 ,在防御反应及菌丝分化等多种生理过程中发挥重要的作用

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温敏核不育水稻花药蛋白质组初步分析

谢锦云,李小兰,陈平,曹梦林,陈良碧,梁宋平

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 215-221.

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采用固相pH梯度 SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳对温敏核不育水稻 96 4 2S可育与不育条件下减数分裂期花药总蛋白进行了分离 ,通过银染显色 ,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱 .PDQuest 2DE图像分析软件可识别约 10 0 0个蛋白质点 .蛋白质点在 2D胶上的重复性为 :沿等电聚焦方向偏差为 1 4 5± 0 2 3mm(n =8) ,沿SDS PAGE方向偏差为 :1 15± 0 17mm(n =8) .对两种育性不同样品的 2D胶上部分共有的蛋白质点 ,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (matrixassistedlaserdesorption ionizationtimeofflightmassspctrometry ,MALDI TOF MS)进行了肽质谱指纹图分析 .通过采用PeptIdent软件对SWISS PROT数据库的查询 ,有 5 0个蛋白质点在数据库得到归属鉴定 .对育性不同的2种样品 2D较上明显差异的蛋白质点进行了分析鉴定 .在不育变化为可育的过程中 ,明显表达上调的蛋白质点包括几丁质酶 ,酸性磷酸酶 ,胞浆激酶 ,谷蛋白前体 ,以及ESTSC72 61蛋白 ,明显下调的蛋白质包括β expansin前体 ,谷氨酸氨甲酰转移酶和 1种未知功能的蛋白质

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呵护心脏、损害免疫的基因

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 221-221.

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高分子量激肽原富含组氨酸区域抑制细胞伸展的机制分析

杨威,宋永胜,李春义,徐大庆,陈世洁

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 222-228.

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活化型高分子量激肽原 (activehighmolecularweightkininogen ,HKa)是组织培养板上体外连接蛋白 (vitronectin ,VN)促使细胞伸展的潜在抑制物 ,已证实轻链的富含组氨酸区域 (histidine richdomain ,HRD)是HKa抗细胞伸展的活性区域 .HK的重组HRD (r HRD)能够促使成纤维细胞伸展 .通过基于HRD序列的选择肽分析 ,定位了HRD的细胞伸展序列 .5个肽中的 3个能够使TIG 3细胞伸展 .P 1肽引起的细胞伸展能够被可溶性P 5肽或HKa所抑制 .P 2肽不能抑制P 1或P 5肽引起的细胞伸展 .r HRD以及 3种肽介导的细胞伸展能够被RGD合成肽以及抗αvβ3或α5β1整合素抗体所抑制 .结果提示 ,选择肽引起的细胞伸展是由整合素介导的 ,尽管此区域不含有RGD序列

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胰岛素和佛波酯在蛋白质合成中经不同途径激活p70 S6激酶

赵咏梅,付伟,宋宇彤,王亚杰,刘奕,陈菲,宗志宏,于爱鸣,韩雅玲,于秉治

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 229-233.

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为研究佛波酯 (PMA)和胰岛素在蛋白质合成中的信号传递 ,应用激酶活性测定和Western印迹等方法 ,分别检测mTOR(mammaliantargetofrapamycin)特异性抑制剂rapamycin或磷脂酰肌醇 3激酶 (PI3K)的特异性抑制剂LY2 94 0 0 2预处理、PMA或胰岛素处理的血清饥饿的中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)中p70S6激酶 (p70S6K)和蛋白激酶B(PKB)的活性及表达 .结果显示 ,PMA或胰岛素刺激促进p70S6K的活化和表达 .而rapamycin预处理可阻断PMA和胰岛素对p70S6K的激活作用 ,表明PMA和胰岛素可能是通过mTOR 依赖性途径激活p70S6K .结果还显示 ,胰岛素刺激促进PKB的活化和表达 ,而PMA对PKB的活性和表达无影响 .LY2 94 0 0 2预处理可阻断胰岛素对p70S6K和PKB的激活作用 ,但不能抑制PMA刺激引起的p70S6K的活化 .表明胰岛素和PMA介导p70S6K活化的信号途径有所不同 ,胰岛素介导p70S6K的活化可能依赖于PI3K途径 ,而PMA介导p70S6K的活化不通过PI3K途径

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火菇素提取新工艺及其生物活性测定

周凯松,彭俊峰,常宁,张晗星,宫峰,张长铠

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 234-239.

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火菇素是一种具有抗癌活性的简单蛋白 ,从金针菇中分离纯化火菇素的改进工艺为 :金针菇子实体经乙酸液浸提、硫酸铵和乙醇分级沉淀后 ,通过DEAE SephadexA 5 0除去色素和部分杂蛋白 ,最后经CM SephadexC 5 0离子交换柱层析处理 ,得到了电泳均一的纯化蛋白 ,用微量透析法得到结晶 .理化性质研究结果表明火菇素为分子量 2 370 0 ,等电点pI 8 9,不含糖的简单蛋白 ,最大吸收波长λmax在 2 76～ 2 78nm ,最小吸收波长λmin在 2 5 0nm ,氨基酸组成不含蛋氨酸 .纯化产物对实验动物移植肿瘤的抑瘤作用实验的研究指出 ,火菇素对小鼠肉瘤S180 和艾氏腹水瘤有明显的抑制作用 ,且能延长小鼠的生存期 .毒性实验研究表明 ,未发现有明显的毒副作用

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蛋白激酶C_ζ对小鼠受精卵发育早期基因组转录活化的影响

付伟,赵咏梅,武迪迪,冯晨,宗志宏,王亚杰,刘莹,刘奕,于爱鸣,陈菲,于秉治

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 240-244.

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为研究蛋白激酶Cζ (proteinkinaseCζ ,PKCζ)在小鼠受精卵细胞早期发育过程中对胚胎基因组活化影响 ,采用免疫印迹和细胞免疫荧光的方法 ,观察PKCζ的抑制剂对小鼠受精卵 1 细胞期G1和G2 不同时期小鼠受精卵基因组活化的影响 .小鼠 1 细胞期受精卵蛋白激酶C (PKC)的活性不断增加 ,并在G2 期达到最高 .PKC的抑制剂calphostinC可以明显抑制PKC的活性达 4 7% .同时calphostinC对受精卵 1 细胞期基因组的早期活化具有显著的抑制作用 (P <0 0 1) .在小鼠 1 细胞期受精卵的G2 期 ,具有活性的磷酸化PKCζ的含量明显多于G1期和卵母细胞MⅡ期 ,分别比它们高2 7%和 110 % .PKCζ的特异性抑制剂可以抑制受精卵 1 细胞期基因的转录和活化 (P <0 0 5 ) .实验结果表明 ,PKCζ参与了小鼠受精卵基因组早期转录的调控

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尼古丁与SIDS综合症关系的小鼠试验

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 244-244.

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离心机训练后+Gz耐力相关基因的分离与鉴定

梁雪清,罗超权,刘丽,刘建斌,于立身,王烨,曹颖

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 245-249.

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为探讨离心机训练提高正向加速度 (forwardacceleration ,+Gz)耐力的分子机制 ,应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)和斑点杂交技术筛选离心机训练 12d后测试高耐力组 (耐受 + 16Gz)与未训练对照组大鼠全脑的差异表达基因 .将获得的序列表达标签 (expressedsequencetag ,EST)进行特异性鉴定后 ,获得 7个上调EST ,其中 5个为已知基因的部分序列 ,2个为新EST ,它们的表达量均在训练 6d组最高 ,表明离心机训练可明显影响大鼠全脑特定基因的表达水平 ,这些基因表达水平的变化很可能与离心机训练提高机体 +Gz耐力的分子机制有关

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血清饥饿可诱导人血管平滑肌细胞再分化

韩梅,温进坤,郑斌,聂磊

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 250-255.

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体外培养的分化型血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMC)以特异性标志基因表达、长梭形外观及对兴奋剂刺激产生收缩反应为其表型特征 .以血清饥饿法培养处于超汇合 (overconfluence)状态的人VSMC ,观察其分化型标志基因表达活性及其与细胞形态特征和收缩反应性之间的关系 ,探讨细胞生存环境对VSMC基因表达及表型的影响 .研究显示 ,生长至超汇合的VSMC由含血清培养转为血清饥饿后 ,收缩蛋白如SMα肌动蛋白 (SMα actin)、SM2 2α、h1 calponin、肌球蛋白重链 (MHC)SM1和SM2亚型的表达活性明显上调 ,证实血清饥饿诱导的收缩蛋白基因表达和血清应答因子 (serumresponsefactor ,SRF)与CArG顺式元件结合活性的增强有关 .同时 ,血清饥饿还可激活参与VSMC分化调节的转录调控因子SmLIM、Gax和分化相关蛋白HRG 1基因的转录 .随着血清饥饿培养时间的延长 ,VSMC逐渐形成多层、束状、成极性排列的形式 ,对兴奋剂刺激产生的收缩反应明显增强 .结果表明 ,超汇合状态的去分化型VSMC脱离血清刺激后 ,可以再分化成熟并重新获得收缩能力

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蛋白质Dalta-1使脐带血中干细胞高速增殖

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 255-255.

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从少量培养细胞中同时提取微量蛋白和RNA的方法探讨

熊仁平,刘苹,周元国,陈星云,王华

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 256-260.

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为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2～ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍苯酚氯仿一步抽提RNA法和分子克隆实验手册裂解液制备蛋白质的方法 ,作为对照 .自制试剂提取的总RNA ,18S、2 8S清晰可见 ,2 8S比 18S带亮度强 2～ 3倍 ,带与带之间无拖尾现象 ,5S隐约可见 ,而且成功地进行了Northern印迹、RT PCR分析 ,与经典方法差异不大 ;用此法所提蛋白质 ,经SDS PAGE检测 ,蛋白分离效果很好 ,无杂质 ,且Western印迹检测Giα蛋白 ,可见一条清晰的特异带 ,与常规提取蛋白质 ,结果相似 .从微量细胞中同时提取的RNA和蛋白质 ,得率高、纯度好 ,具有化学完整性和生物学性质

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长裙竹荪凝集素的分离纯化与部分生化性质

林玉满,苏爱华

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 261-263.

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Candida cloacae长链脂肪酸醇氧化酶基因的克隆与表达

葛正龙,Antoni R.SLABAS

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 264-267.

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与产生精神分裂症有关的基因

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 267-267.

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人白细胞介素22基因的分离及其在大肠杆菌中的克隆与表达

蔡欣,王利红,王嘉玺

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 268-271.

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合成药物2MD促进造骨作用

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(02): 271-271.

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