中国生物化学与分子生物学报

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陈扬,陆祖宏

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 1-4.

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生物分子的标记和检测一直是生物分析领域的重要内容 .近年来 ,纳米材料与生物检测技术的结合 ,使得生物分子的检测有了重要的发展 ,这一交叉学科现已成为生物分析领域最具活力的研究方向 .对近期出现的新型纳米粒子标记物的性质、检测原理、特点和应用进行了评述 ,并分析了用该标记物进行分析的可能发展方向

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丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)生物学功能的结构基础

龚小卫,姜勇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 5-11.

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丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一 ,能对广泛的细胞外刺激发生反应 .蛋白激酶的空间构象是其功能的重要决定因素 .对MAPK蛋白结构的研究表明 ,MAPK的结构与功能之间具有密切的关系 .尽管MAPK各亚族的结构非常相似 ,但也存在着一些差异 ,这些差异是不同亚族对不同的细胞外刺激产生特异性反应的结构基础 .某些关键性结构 ,例如Loop12 ,在MAPK对上游激酶的作用、下游底物的选择以及亚细胞定位中都具有重要作用 .进一步深入研究MAPK的空间结构 ,探讨MAPK的生物学功能与其空间构象之间的关系 ,对于开发新的MAPK通路抑制剂用于治疗某些严重疾病有着重要的临床意义

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扩展青霉PF898碱性脂肪酶基因组DNA的克隆及序列分析

林琳,谢必峰,杨冠珍,施巧琴,林奇英,谢联辉,吴松刚,吴祥甫

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 12-16.

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扩展青霉 (Penicilliumexpansum)PF898可产生一种具有重要工业生产价值的碱性脂肪酶(PEL) .在通过 3′RACE和 5′RACE获得PEL完整的cDNA序列的基础上 ,通过PCR方法首次克隆了该脂肪酶的完整的基因组DNA序列 (GenBank登录号为AF330 6 35 ) .该脂肪酶DNA全长 14 0 4bp ,包括PEL编码区、3′非翻译区和部分 5′非翻译区基因的序列 .编码区DNA由 1135个碱基组成 ,含有 5个内含子 ,大小分别为 5 8bp、4 7bp、5 0bp、5 6bp和 6 9bp .在已报道的丝状真菌脂肪酶中 ,PEL基因的内含子数量最多 ,而其大小与其它丝状真菌脂肪酶基因的内含子一样 ,均为只有几十个碱基的小内含子 .PCR扩增获得的PLEDNA序列还包括由 195个碱基组成的 3′端非编码区序列 ,74个碱基的部分 5′端非编码区序列 .PELDNA全长序列中的 - 2 4至 - 2 7nt为TATAbox ,终止码TGA下游15 6nt出现AATAAA序列 ,TGA下游 182位出现poly(A)尾 ,为典型的真核基因结构 .同源性序列分析表明 ,PEL与其它真菌来源脂肪酶的基因组DNA序列同源性约为 39%～ 4 9% ,PEL内含子之间或PEL内含子与其它丝状真菌脂肪酶基因的内含子之间的序列同源性约 4 2 %～ 5 7% .

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山羊β酪蛋白基因克隆及序列分析

王强,陈美珏,任兆瑞,黄淑帧,曾溢滔

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 17-23.

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用LongPCR技术克隆山羊 β酪蛋白 (CSN2 )全基因 13.7kb的序列 (GenBank登录号 :AF4 0 90 96 ) .利用PCR RFLP方法鉴定第 14和 192位氨基酸残基相应的核苷酸序列中出现的 2个多态性位点 ,其中第 192位氨基酸残基处的TspRⅠ位点是Saanen奶山羊CSN2基因中新发现的 1个多态性位点 .生物信息学方法分析山羊CSN2基因可见 ,非编码区中的SINE和LINE序列内含多种乳蛋白基因表达调控元件 ,对其基因的顺式表达和转录后调控可能具有重要的作用

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核骨架基质结合区(S/MAR)提高逆转录病毒载体介导egfp在NIH3T3细胞中的表达

戴冰冰,梅文瀚,王家敏,钱关祥,卢健

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 24-30.

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为减轻逆转录病毒介导的外源基因的沉默 ,进一步提高逆转录病毒MFG载体介导的转移基因的表达 ,将人 β INF基因上游 80 0bp的核骨架基质结合区 (S MAR)分别反向和正向克隆至MFG载体 3′LTR上游 ,以egfp为报告基因观察S MAR对egfp基因表达水平以及对病毒滴度的影响 .结果显示 :反向和正向的S MAR在瞬时表达的情况都不能提高egfp的表达 ,但在稳定整合的情况下反向S MAR可明显提高egfp在NIH3T3细胞内的表达 ,而正向的S MAR作用不明显 ,另外反向S MAR可明显提高MFG逆转录病毒载体的滴度约 5倍 ;因此改造后的MFG逆转录病毒载体将能更好地用来介导外源治疗基因的表达 .同时还观察到 ,同一个载体骨架在稳定表达的情况下 ,磷酸钙介导较逆转录病毒载体介导的表达水平高 .提示逆转录病毒的生活史可能参与其介导的外源基因的沉默

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DNA烷基化损伤修复新机制

郑全辉 ,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 30-30.

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肿瘤相关抗原基因HCA520重组蛋白的表达纯化及其肝癌患者血清中相应抗体的分析

韩克军,杨美香,王歈,李燕,陈慰峰

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 31-35.

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HCA5 2 0是用SEREX(serologicalidentificationofrecombinantcDNAexpressingcloning)方法 ,即用肝癌病人血清从肝癌组织cDNA表达文库中筛选得到的肝癌相关性抗原编码基因 .利用RT PCR技术检测了HCA5 2 0mRNA在各种组织中的分布情况 ,构建了GST融合表达载体并且用亲和层析的方法纯化表达的融合蛋白 .最后用Western印迹检测了重组蛋白的免疫反应性 ,用斑点印迹检测了肝癌病人血清中HCA5 2 0的天然抗体的存在情况 .结果表明 ,HCA5 2 0在各种组织中呈丰度差异分布 ,构建好的pGEX 4T 3重组载体经IPTG诱导后高效表达GST HCA5 2 0融合蛋白 ,其分子量约 4 9kD .经GST Agarose亲和层析 ,重组蛋白得到高度纯化 .Western印迹证实 ,纯化蛋白为目的重组蛋白 ,重组蛋白具有与天然蛋白相同或相似的免疫反应性 .斑点印迹分析表明 ,2 0份肝癌病人血清中有 1份HCA5 2 0抗体阳性 ,而 4份正常人均为阴性 .HCA5 2 0的足量提供 ,可用以研究其在致癌中的作用 ,并可以免疫动物制备抗体 .它作为抗原 ,分析其抗体在不同肿瘤病人中的表达情况 ,评估其在临床肿瘤诊断中的作用

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大鼠神经元凋亡相关碱性蛋白ARBP cDNA的克隆和功能

白氡,明洪,周新富,陈虹,黄秉仁

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 36-40.

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利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法 ,得到凋亡相关碱性蛋白 (ARBP)的全长序列 ,进而构建了其真核表达体系以了解其功能 .ARBP的全长cDNA序列为 90 1bp ,其开放读码框架编码 10 9个氨基酸残基 .免疫组化分析表明 ,ARBP蛋白在大鼠体内有广泛的分布 .在R2L1细胞中转染ARBP反义cDNA表达载体后 ,既可以促进细胞增殖 ,又可以抑制去血清诱导的细胞凋亡 .因而 ,ARBP蛋白对神经元细胞的凋亡具有重要的调节作用 .

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MLP增强生肌素对nAChRγ亚基基因启动子的结合活性

鹿培源,邵世滨,倪菊华,贾弘褆

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 41-45.

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构建表达GAL4 MLP融合蛋白的真核表达质粒pBind MLP .哺乳动物细胞双杂交试验表明 ,MLP与生肌素E12复合物存在细胞内的相互作用 .构建表达GST融合蛋白GST MLP和GST E12的原核表达质粒pGEX 2TK MLP以及pGEX 4T 2 E12 .在E .coliBL2 1中诱导表达GST MLP、GST 生肌素和GST E12 ,并用亲和层析法纯化了这 3种GST融合蛋白 .这 3种GST融合蛋白进行的凝胶阻滞试验表明 ,MLP可以增强生肌素 E12复合物对AChRγ亚基基因启动子的结合活性 .研究初步阐明了MLP增强nAChRγ亚基基因启动子在分化C2C12细胞中的转录活性的分子机制 .

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新型肝癌相关性抗原HCA519及其变异体HCA90的基因克隆和表达

王歈,韩克军,屈伟,陈慰峰

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 46-52.

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通过利用肝癌病人体内血清中所含的对肿瘤抗原产生的特异性抗体筛选肝癌组织cDNA表达文库的方法 (SEREX) ,筛选得到了可以诱导肝癌病人抗体免疫应答的两个新抗原HCA5 19基因(GenBankAF14 6 731)及其变异体HCA90基因 (GenBankAF 2 872 6 5 ) .它们定位于染色体 2 0q11 2 ,HCA5 19含 18个外显子 ,HCA90含 19个外显子 .其中HCA90所特有的外显子序列长 10 8bp ,属Alu重复序列片段 ,插入于HCA5 19外显子 10和 11之间 ,原为HCA5 19内含子序列 .该插入片段位于HCA5 19开放阅读框架之内 ,不改变HCA5 19的读码框 ,使HCA5 19编码的 74 7个氨基酸增长至HCA90的 783个氨基酸 .通过Northern杂交和RT PCR分析发现 ,HCA5 19和HCA90基因分别在 9 9例和 6 9例肝癌组织中高表达 ,RT PCR显示 ,它们在正常肝组织和其它正常组织中有极低水平转录本表达 .而这种低表达转录本在Northern杂交中不能被检测到 .HCA5 19蛋白被首次发现在肿瘤病人中能够诱导机体的抗体免疫应答 ,为一个新的肿瘤相关性抗原分子 .其变异体HCA90抗原基因为首次发现的新基因 .其功能可能与细胞的恶性增殖相关 ,并可进一步研究其作为临床肿瘤治疗和诊断的靶分子的可行性

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人过敏毒素C5a反义cDNA的克隆、表达和拮抗作用

徐祥,吕凤林,胡承香,李磊

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 53-59.

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采用引物二聚体配对搭桥法成功扩增了人过敏毒素C5a全长的反义cNDA ,将扩增的反义cNDA克隆到原核表达载体pPROEXTM HTc上 ,与 6×His头形成融合基因 ,转化E .coliDH5α ,30℃下经IPTG诱导 ,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达 ,表达量达 10 % ;利用金属螯合亲和层析一步法纯化 ,得到纯度 80 %的融合蛋白 ;烟草蚀刻病毒蛋白酶酶切超滤浓缩后 ,得到高浓度高纯度人过敏毒素C5a反义肽 ,经N端蛋白测序鉴定 ,其氨基酸序列正确 .髓过氧化物酶 (myeloperoxi dase ,MPO)为单核细胞PMN所特有 ,其活性可以间接反映C5a趋化白细胞的能力 ,C5a刺激血管内皮细胞表达胞间粘附分子 (ICAM 1)、血管间粘附分子 (PCAM 1)等 ,后者能增加对PMN的粘附 ,检测MPO活性可间接反映出C5a的功能 .还观察了纯化的C5a反义肽对C5a刺激内皮细胞胞浆[Ca2 + ]浓度变化的影响 .高浓度高纯度的C5a反义肽对C5a过敏毒素存在拮抗作用 ,说明反义肽在补体系统C5a分子中是存在的 .这为深入研究C5a反义肽的结构与功能关系提供了物质保证

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2002年北京生物化学与分子生物学学术年会召开

唐建国

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 59-59.

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多发性骨髓瘤细胞中一个表达上调基因的克隆与分析

汤立军,胡维新,何莉芳,田菁燕,刘新发,谭达人

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 60-63.

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根据GenBank收录的多发性骨髓瘤细胞株 (ARH 77)表达上调ESTAF4 2 5 30 0设计引物 ,运用RT PCR检测了 5例多发性骨髓瘤患者及 4例正常人骨髓细胞中该EST的表达水平 .Northern印迹杂交分析该EST在多种组织中的表达 .进一步利用该EST作探针 ,筛选ARH 77cDNA文库 ,获得全长cDNA克隆 ,对该序列进行了分析 .结果显示 ,该EST在多发性骨髓瘤患者骨髓细胞中亦有较高的表达 ,而在正常人骨髓细胞中低表达 .经测序证实 ,该cDNA全长为 4 5 2bp(GenBank收录号 :AF4 87338) .预测其编码一个 5 7个氨基酸的小分子量蛋白质 ,属于与DNA复制有关的解旋酶引物酶基因家族的新成员 .该基因在多发性骨髓瘤细胞中表达上调 ,其表达水平的改变可能与多发性骨髓瘤的发生与发展有关

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皖南尖吻蝮蛇中11个C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA克隆和序列分析

余红秀,向开军,汪玉洁,刘兢

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 64-70.

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通过放射性标记DNA探针筛选和PCR克隆筛选 ,从皖南尖吻蝮蛇毒腺的λgt11cDNA文库中 ,克隆得到了 11个编码C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA .其中 2个克隆分别含有编码an tithrombinA的A链和B链的序列 .另外 6个则含有编码如下肽链的序列 :antithrombinC的A链和B链、agkisacutacin的A链和B链、抗凝血因素的A链和B链 ,其它 3个克隆含有编码未知蛋白质的序列 .有趣的是 ,在编码AntithrombinC的序列中 ,每条链中除了含有 7个与所有C型凝集素类似蛋白位置一致的Cys外 ,在B链上还含有一个额外的Cys3;2条B链上的Cys3可能形成一对新的链间二硫键 .氨基酸序列的比较及进化分析显示 ,C型凝集素类似蛋白B链起源于一个单系类群 ,A链至少有 4个进化起源

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骨形成蛋白诱导型真核载体的构建及其表达

朱帮福,卢兹凡,陈苏民,陈南春,纪宗玲,张斌,柴玉波,李毅

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 71-76.

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成骨分化相关基因骨钙素 (OC)等的启动子内均含有成骨特异性转录因子Cbfa1特异性作用元件 ,而骨形成蛋白 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)的促成骨分化作用正是通过其首先引起Cbfa1的升高 ,而后Cbfa1激活这些基因的表达 ,最终出现成骨分化表型 .为解决BMP没有理想的活性测定方法的问题 ,在RT PCR结果证实BMP 2可促进NIH3T3和C2C12细胞Cbfa1表达后 ,构建了串联6个Cbfa1作用元件的小鼠OC部分启动子 (6OCP)控制萤光素酶 (luciferase)报告基因的真核表达质粒 ,以期来放大BMP诱导报告基因表达的作用效果 .即通过细胞转染、rhBMP 2刺激后检测萤光素酶活性变化 ,从而间接定量测定rhBMP 2的生物学活性 .结果表明 ,pcDNA3 6OCP Luc转染细胞后其报告基因的基础活性较pcDNA3 Luc大为降低 ;而且在一定剂量范围内 ,转染细胞的萤光素酶活性 (荧光值 )随rhBMP 2剂量增加而升高 ,并呈线性正相关 ,为建立BMP活性定量测定的方法打下基础

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GFP为报告基因的酵母哺乳动物细胞穿梭载体的构建及其在人血管内皮细胞中的表达

王弘,郑文岭,杨连生,杨太成,刘佳,冼江,崔东,马文丽

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 77-81.

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为研究酵母作为载体在口服基因治疗及免疫中的作用 ,需要一种能够在酵母中复制而在哺乳动物细胞中表达的穿梭载体 .利用通用载体质粒融合系统 (UPS)构建了一种以GFP为报告基因的新载体 ,以常规的氯化锂法对酿酒酵母进行转化 ,证明该载体能够在酵母中复制 ;以脂质体介导向人血管内皮细胞进行了转染 ,有绿色荧光 ,证明该载体能够在哺乳动物细胞中表达 .所获得的新型的穿梭载体为口服酵母在基因治疗中的应用提供了物质准备

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对抗免疫细胞基因的HIV蛋白

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 81-81.

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重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)及其突变体的纯化

朱恒奇,徐秀英,黄培堂

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 82-86.

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稳定高效表达重组人组织型纤溶酶原激活剂 (rht PA)的CHO细胞株和表达组合突变体的细胞株进行了 3L转瓶培养 .将培养上清分别进行了Lys Sepharose 4B亲和层析和Zn2 + Sepharose 4B层析两步纯化 ,rht PA纯度提高了 5 34倍 ,比活达 2 5× 10 5IU mg ,产率为 73% ;突变体纯度提高了1119倍 ,比活达 5 9× 10 5IU mg ,产率为 6 9% .纯化产物SDS PAGE分析显示 ,rht PA和突变体基本都呈单一条带 ,扫描分析均达到 98%以上纯度 .rht PA和突变体在纯化系统中的行为作对照分析发现 ,突变体的构建思想在Lys Sepharose 4B亲和层析过程中有充分体现 .这两步层析组合是很好的纯化t PA及其突变体的方法 ,尤其是Lys Sepharose 4B纯化突变体效果更好

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抑制食欲的蛋白激素

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 86-86.

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藏红花凝集素分子化学修饰与其活性的关系

周长林,小田太雄,挂通一晃

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 87-91.

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对甘露糖专一性结合藏红花凝集素 (Crocussativuslectin ,CSL)分子进行化学修饰 ,测定酿酒酵母 (S .cerevisiae)凝集活性和寡糖专一性结合活性的变化 .实验结果表明 ,Cys的修饰与活性无关 ,Arg、Tyr和His的修饰降低了CSL分子的酵母凝集活性和寡糖结合活性 ,但对CSL的CD光谱无显著影响 ,表明其为凝集素的活性氨基酸残基 .Glu和Asp的化学修饰可使CSL的凝集活性大幅度降低 ,与特异性寡糖的亲和力增大 ,CD光谱变化明显 ,提示CSL分子中的Glu和Asp对其空间结构影响较大 ,氨基酸羧基的修饰导致CSL构象改变 ,蛋白与寡糖的结合位点暴露 ,可有效结合的位点数增加

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中国生物化学与分子生物学会2003年学术活动计划表

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 91-91.

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生肌素引起组蛋白H3和H4高度乙酰化及染色质溶解性增加

宫明,倪菊华,贾弘褆

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 92-95.

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为研究生肌素在染色质重建过程中的作用 ,采用生肌素真核表达载体转染C2C12肌细胞 ,细胞核经微球菌核酸酶消化后 ,提取DNA进行SDS PAGE分析 .生肌素转染的细胞 ,其核小体 (染色质 )在Mg2 + 溶液中的溶解性明显增加 ,提示染色质组蛋白乙酰化程度提高 .组蛋白经TAU SDS(2 D)双相凝胶电泳分析 ,发现在转染生肌素真核表达载体 2 4h后 ,组蛋白H4的乙酰化修饰程度最高 .采用抗乙酰化组蛋白H3和H4抗体进行的Western印迹分析进一步证明了乙酰化的发生 .上述变化与染色质的活跃程度相关 .RT PCR结果显示 ,生肌素的靶基因烟碱样乙酰胆碱受体 (nAChR)α亚基和肌酸激酶 (MCK)基因在转染后表达水平提高 .结果提示 ,强制性表达外源性生肌素可引起肌细胞核染色质重建 ,进而激活靶基因

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一种新杨树菇(Agrocybe aegerita)凝集素的纯化及生化特性

孙慧,赵辰光,仝鑫,齐义鹏

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 96-102.

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用硫酸铵分级沉淀、离子交换和分子筛等方法 ,从食用菌杨树菇子实体中分离纯化了一种凝集素 ,称作为AAVP(Agrocybeaegeritaantiviralprotein) .经SDS PAGE测定其亚基的相对分子质量为15 8kD ,凝胶过滤分析分子量为 32kD .IEF PAGE计算其等电点为 3 8.AAVP不含糖 ,是一种N端焦谷氨酰环化封闭的蛋白质 ,经N端去封闭后测得N端氨基酸序列为QGVNIYNIVAGA ,用胰蛋白酶消化后得到一大片段 ,测定的氨基酸序列为PDGPWLVEK .AAVP可以凝集供试的 12种动物血和3种血型人血的血红细胞 ,但对各种血红细胞凝集滴度不同 .糖抑制实验表明 ,在供试的 18种单糖和 3种糖蛋白中 ,只有猪胃粘蛋白强烈抑制AAVP的凝血活性 .AAVP具有较好的热稳定性 ,能够忍受极端的酸碱条件 .AAVP的凝血活性不受Ca2 + 、Mg2 + 、Zn2 + 等二价阳离子的影响 .抗肿瘤活性检测表明 ,AAVP对胃癌细胞株SGC 790 1,MGC 80 3,BGC82 3及人急性白血病细胞株HL 6 0有明显的抑制作用 .AAVP对小鼠腹腔注射的半致死剂量为 15 85mg kg .

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鸟嘌呤碱基与羟基自由基反应的密度泛函理论

张严,李波,戴柏青

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 103-106.

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羟基自由基 (·OH)进攻嘌呤碱基是破坏核酸造成DNA断链损伤的重要原因之一 .采用密度泛函 (DFT)理论中B3LYP方法在 6— 31G基组水平上对鸟嘌呤 (G)受羟基自由基进攻形成的各种可能产物自由基进行几何全优化 .根据总能量、键长和自旋密度的计算结果 ,从理论上确认了C 5和C 8位加成机制 .得产物自由基G5OH·、G8OH· ,且G5OH·易与N 11位H脱水得一个更稳定的产物自由基 ,而G8OH·不易发生开环反应 ,得到与实验一致的结论 .这些稳定自由基的形成造成DNA断链损伤

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2001年中国15种生物类科技期刊影响因子排序

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 106-106.

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人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系BUPH∶OVCA-3的建立及其生物学特性

刘广芝,冯捷,付天云,叶雪,昌晓红

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 107-111.

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介绍人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系的建立 ,研究其生物学特性 .以卵巢浆液性乳头状囊腺癌的腹水细胞为材料 ,进行体外培养 .将永生化基因———SV4 0T抗原基因转染第 2代细胞 ,得到永生化细胞系 .通过光学显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等 ,研究其生物学特性 ,并与其来源细胞的生物学特性进行比较 .建立了一株人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,命名为BUPH∶OVCA 3,现已传至 6 0余代 .其生物学特性为 ,细胞生长旺盛 ;具有人体恶性细胞的核型特征 ;细胞恶性度较低 ,不具有集落形成能力及裸鼠接种致瘤性 ;除较未永生化细胞生长速率增快 ,饱和密度增加外 ,仍保留上皮细胞的分化表型 .结果表明 ,BUPH∶OVCA 3为一株恶性度较低的人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,保留其来源细胞的生物学特性 ,可作为研究恶性度较低的卵巢上皮癌的体外模型

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炭疽菌的克星——噬菌体酶

李潇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 111-111.

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金雀异黄素对小鼠红白血病细胞系MEL的抑制作用

钟兴兰,王新娟,姚伟娟,李付英,张蕾

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 112-117.

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选择小鼠红白血病细胞系MEL作为金雀异黄素 (genistein)的作用对象 ,以探讨其对MEL的抑制作用及其可能的作用机理 .MTT和生长曲线表明 ,金雀异黄素对MEL细胞具有很强的生长抑制作用 (半数最大抑制效应浓度IC50 为 7 12mg L) .流式细胞术显示 ,金雀异黄素能够使MEL细胞发生G2 M期阻滞 ,但是诱导MEL凋亡作用并不明显 .DNA凝胶电泳发现金雀异黄素能够造成MEL细胞DNA的损伤 .联苯胺染色显示金雀异黄素对MEL细胞具有很强的诱导分化作用 ,且这种作用是时间和剂量依赖性的 .RT PCR显示 ,金雀异黄素能够抑制MEL细胞中原癌基因c myc的表达 .生物流变学检测发现 :金雀异黄素作用后 ,MEL细胞表面电荷密度减少、渗透脆性增大、细胞最大变形能力下降

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神经节苷脂GM_3对人白血病J6-2细胞PKC转位及DAG含量的影响

郭祯,李亚丽,马克里,夏泉,崔肇春

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 118-122.

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应用SDS PAGE及Western印迹技术检测神经节苷脂GM3 处理前后人白血病J6 2细胞不同类型PKC在细胞内的转位情况 ,同时利用高效薄板层析技术观察了细胞内DAG含量的变化 ,从而探讨GM3 抑制PKC活性的机制 .实验发现 ,GM3 处理后胞液PKCα明显增加 ,而颗粒结合PKCα则相对减少 ;GM3 对其它亚型PKC在细胞内分布无显著影响 .同时还发现 ,GM3 处理后细胞内DAG含量降低 (P <0 0 5 ) .结果表明 ,GM3 抑制PKCα由胞浆向质膜转位 ,对其它亚型PKC在细胞内转位无影响 .提示GM3 抑制的PKC亚型可能是PKCα .同时GM3 降低细胞内DAG含量 ,这可能与GM3抑制PKCα活性机制有关

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中国生物化学与分子生物学会2003年组织活动计划表

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 122-122.

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胰岛素样生长因子1(IGF-1)mRNA同源模板竞争性PCR定量方法的建立

梁东春,郭刚,郭若霖,张镜宇

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 123-126.

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胰岛素样生长因子 1(IGF 1)是一种多功能的细胞增殖调控因子 ,其表达水平受多种因素的影响 ,为了研究IGF 1基因在转录水平上的调控机制 ,建立了定量测定IGF 1mRNA的竞争性PCR方法 .同时 ,也建立了一种简便的制备同源性竞争模板的方法 .以构建好的重组pUC IGF 1质粒为基础 ,利用IGF 1mRNA序列上唯一存在 ,但是在pUC18质粒上多拷贝的MspⅠ酶切位点 ,以该限制性内切酶处理重组pUC IGF 1质粒 .在T4DNA连接酶作用下对酶切产物进行随机连接 ,以连接产物作为模板 ,用可扩增IGF 1cDNA的引物进行PCR ,由此得到因含有随机插入序列而与原IGF 1cDNA产生明显长度差别的重组IGF 1.以不同浓度的该DNA片段作为同源竞争模板与大鼠肝组织cDNA在同一反应体系中进行PCR ,对PCR产物进行分析 ,计算出样本中IGF 1cDNA的初始浓度 .成功地建立了IGF 1mRNA的竞争性PCR定量检测方法 ,为研究IGF 1基因的表达调控奠定了基础 ,同时也为对已克隆的基因进行mRNA定量测定提供了一种简便和灵敏的手段

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衣藻质体分裂相关基因CrFtsZ2的克隆及其进化分析

胡勇,王东,孔冬冬,鞠传丽,何奕昆

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 127-132.

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载脂蛋白E3的克隆及原核表达

李会成,李玉新,金萍,张聪,乌垠,陆军,杨红,麻彤晖,黄百渠

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 133-135.

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中国生物化学与分子生物学会2003年继续教育、技术培训计划表

中国生物化学与分子生物学报. 2003, 19(01): 135-135.

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