中国生物化学与分子生物学报

Select

童新,孟祥兵,董燕,孙志贤

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 645-651.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

新近的研究揭示：ｃａｓｐａｓｅ蛋白酶在细胞凋亡中起着死亡执行者的重要功能．一些蛋白相继被证明在细胞凋亡中可被ｃａｓｐａｓｅ特异切割，其中参与ＤＮＡ损伤修复过程的聚ＡＤＰ核糖聚合酶（ＰＡＲＰ）以及ＤＮＡ依赖的蛋白激酶（ＤＮＡ－ＰＫ），在细胞凋亡过程中被ｃａｓｐａｓｅ选择性切割具有特殊的功能意义．为探索与ＤＮＡ－ＰＫ催化亚基有较高同源性，含有ｃａｓｐａｓｅ切割位点，且功能上目前也被认为是感受ＤＮＡ损伤和参与信号传导途径的ＡＴＭ（Ａｔａｘｉａｔｅｌａｎｇ－ｉｅｃｔａｓｉａｍｕｔａｔｅｄ）蛋白，是否在凋亡过程中也可被切割而降解？应用体外转录与翻译系统获得ＡＴＭ蛋白的ＰＩ３Ｋ结构域，同时通过建立无细胞反应体系获得含ｃａｓｐａｓｅ活性的细胞抽提液，将两者在体外共同保温．结果发现：ＡＴＭ蛋白与ｃａｓｐａｓｅ－３能免疫共沉淀，ＡＴＭ蛋白的ＰＩ３Ｋ结构域可被ｃａｓｐａｓｅ－３特异切割，并观察到辐射诱发细胞调亡中ＡＴＭ蛋白的降解．从而进一步证实了ＤＮＡ损伤修复的抑制，促进细胞凋亡的发生．

Select

3个六肽的胰岛素受体结合和体内生物活性

汪成富,黄超群,张新堂,钮经义

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 652-654.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为了研究胰岛素受体结合部位的结构和功能，设计并用固相方法合成了３个六肽．在浓度大于１×１０３ｎｍｏｌ／Ｌ时，ｃｙｃｌｏ（Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ）具有明显的胰岛素受体结合活力；Ｈ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－ＯＨ的这一活力则不明显；而Ｈ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－ＯＨ则增强胰岛素和其受体的亲和性．然而，它们都没有体内生物活性．这表明：环六肽部分模拟了胰岛素受体结合部位的空间构象；胰岛素受体结合部位的疏水性和其中的Ｂ２３Ｇｌｙ－Ｂ２４Ｐｈｅ－Ｂ２５Ｐｈｅ对胰岛素和其受体的结合起重要作用．

Select

Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究

侯宇,赵利淦,张美英,何丽容,边六交,张玲,杨瑞仪,林剑

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 655-660.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰＫ－Ａ．表达产物为可溶性的非融合蛋白，占菌体总蛋白４２％．斑点ＥＬＩＳＡ法鉴定表明表达产物与ＮＤＰＫ－Ａ标准抗血清呈阳性反应．以ＤＥＡＥ纤维素弱阴离子交换层析、ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化ｒＮＤＰＫ－Ａ，得纯度为９６．７％的目标蛋白．以反相高效液相色谱法进行酶活性分析，表明纯化的ｒＮＤＰＫ－Ａ能催化ＡＴＰ＋ＵＤＰ＝ＡＤＰ＋ＵＴＰ的反应，比活性为８００Ｕ／ｍｇ蛋白．

Select

日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达

程继忠,皇甫永穆,海涛,梁驹卿

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 661-667.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

研究了外源基因日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）在卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ，ＢＣＧ）、耻垢分枝杆菌（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）和大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达．运用重组ＤＮＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等分子生物学技术，以表达Ｓｊ２６ＧＳＴ的Ｅ．ｃｏｌｉｐＧＥＸ衍生质粒为模板，经ＰＣＲ得到编码Ｓｊ２６ＧＳＴ的全长ｃＤＮＡ片段．将其按正确的阅读框顺序，克隆到人结核杆菌热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）７０的启动子下游，再将ＨＳＰ７０启动子和Ｓｊ２６ＧＳＴ基因一起亚克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中，得到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达质粒ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６．ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６电转化入ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓｍｃ２１５５中表达Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原，所表达的天然重组Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）为可溶性蛋白，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带．其表达量分别占ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ菌体总蛋白的１５％和１０％．可见，Ｓｊ２６ＧＳＴ基因能在ＢＣＧ中高效表达．

Select

玉米21kD富硫种子贮存蛋白的cDNA克隆及其序列分析

邹竹荣,卞茂华,刘思泽,俞梅敏

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 668-672.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

利用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从玉米掖单－２０开花后１０ｄ的叶片中分离到２１ｋＤ玉米种子贮存蛋白ｃＤＮＡ（Ｎ２１ＫＺＹ），并进行了序列分析．其编码蛋白包含２１１个氨基酸，极其富含甲硫氨酸，高达２７％；其Ｎ端有一个２１个氨基酸的信号肽．Ｎ２１ＫＺＹ及其编码蛋白和Ｃｈｕｉ等人分离的该基因的基因组克隆及其编码蛋白的同源性分别为９５．１％和９０．５％；两者的编码蛋白与玉米１０ｋＤ醇溶蛋白极其相似，其中间多出一个５４氨基酸的肽段和一个６氨基酸的肽段，这表明它们可能是来源于同一个祖先基因，后来通过基因重排、缺失或不均等交换等过程而形成的不同的蛋白质．

Select

重组尿激酶型纤溶酶原激活物受体在酵母系统中的表达及鉴定

唐辉滨,何诚,彭鲁英,于伟英,应其龙,朱运松

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 673-679.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

构建截断型可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（ｕ－ＰＡＲ）的原核及酵母表达质粒并分别在大肠杆菌和Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母中高效表达．利用ＰＣＲ扩增截断型可溶性ｕ－ＰＡＲｃＤＮＡ片段，并分别连入酵母及原核表达载体中，构建成表达质粒．后者经诱导表达的蛋白被用于免疫家兔，获得抗ｕ－ＰＡＲ的抗血清，用于对酵母表达产物的鉴定．前者在甲醇的诱导下表达，产物分泌至培养液中．结果表明，原核表达的ｕ－ＰＡＲ蛋白免疫家兔后获得高效价的抗血清，利用此抗血清所作Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实酵母表达蛋白具有ｕ－ＰＡＲ的免疫原性，表观分子量４０ｋＤ左右．Ｍｕｔ－表型在第５ｄ为最高（２．５μｇ／ｍｌ），Ｍｕｔ＋表型在第４ｄ为最高（７．５μｇ／ｍｌ）．因此，构建的可溶性ｕ－ＰＡＲ表达质粒在Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母细胞获得表达，为进一步竞争拮抗受体功能的研究奠定了基础．

Select

人Nmi mRNA编码区存在变异形式

王玉刚,刘红涛,马大龙

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 680-683.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

Ｎｍｉ基因编码一种可与Ｍｙｃ相互作用的蛋白质．在人红白血病细胞系ＴＦ－１细胞去细胞因子ＧＭ－ＣＳＦ后８ｈ，发现ＮｍｉＲＮＡ表达水平升高．利用ＰＣＲ方法从中扩增ＮｍｉｃＤＮＡ编码区，发现除正常大小的扩增片段外，还有一比公布核酸序列小约１００～２００ｂｐ的扩增片段．序列分析表明该片段为编码区第３３７～５０９位的碱基缺失，由ＧＴＴＣＣＡＴＴＧＣＧ１１个碱基取代，形成一个开放读码框架，编码２５４个氨基酸，比野生型Ｎｍｉ编码的３０７个氨基酸少５３个氨基酸．

Select

人促红细胞生成素基因组基因的克隆及全序列分析

崔振中,寿思明,朱宝利,刘朋朋,齐顺章

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 684-690.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为了克隆到全长的人促红细胞生成素基因，从而在真核系统中及转基因动物乳腺中进行表达，从一个中国人的血细胞中提取基因组ＤＮＡ，构建了不完全基因组噬菌体文库，文库效价为５×１０４．这种文库的构建方法是用ＢａｍＨⅠ对基因组ＤＮＡ进行完全酶切，回收１０．５ｋｂ左右的酶切片段，插入到λ－噬菌体ＥＭＢＬ３载体中．筛选文库所使用的探针是用ＰＣＲ方法从基因组ＤＮＡ模板中扩增的５５６ｂｐ的ＥＰＯ基因片段．从该文库中筛选到了一个含有完整ＥＰＯ基因的插入片段长度为１２．５ｋｂ的阳性克隆．经全序列分析证实，所克隆的ＥＰＯ基因编码正确，但在５′－侧翼及第一内含子处与国外发表的序列相比较，发现两处核苷酸差异，这两个核苷酸的差异改变了５′－调控区的两个小的开放阅读框——ＯＲＦ１和ＯＲＦ３，其在基因表达调探方面的作用值得进一步探讨．

Select

促红细胞生成素基因表达载体的构建及其在CHO细胞中表达的研究

崔振中,沈恒,刘维全,刘朋朋,齐顺章

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 691-696.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

用从基因文库中所克隆的促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因组基因，构建了３种由不同启动子调控的表达载体——ｐＯＰ１３／ＥＰＯ，ｐＲＳＶ／ＥＰＯ，ｐＣＭＶ／ＥＰＯ，在这３个表达载体的构建过程中对基因的转录起始效率、内含子的剪接、５′非翻译区和３′非翻译区对基因表达的影响等因素都加以考虑．用脂质体转染法分别将上述３个载体导入ＣＨＯ细胞，经瞬时表达，用ＥＬＩＳＡ方法检测，表达量分别为１９０ｍＩＵ／ｍｌ、１６０ｍＩＵ／ｍｌ、４４７ｍＩＵ／ｍｌ．用表达载体ｐＯＰ１３／ＥＰＯ转染ＣＨＯ－Ｋ１２细胞，在４００μｇ／ｍｌ的Ｇ４１８浓度下筛选稳定表达细胞克隆，获得了表达量约为１６０ＩＵ／１０６细胞（４８ｈ）的Ｃ１０细胞株．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测发现了ＥＰＯ阳性条带．用ＴＦ－１细胞对ＥＰＯ进行了生物活性检测，初步证实所表达的ＥＰＯ有生物活性．

Select

大肠杆菌tRNA~(Leu)的提取、纯化及性质研究

涂华民,孟建新,杨燕生,李勇,刘文,王恩多

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 697-703.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

采用高表达大肠杆菌ｔＲＮＡＬｅｕ菌株提取、纯化了亮氨酸等受体转移核糖核酸ｔＲＮＡＬｅｕ１和ｔＲＮＡＬｅｕ２．利用稳态动力学手段研究了ｔＲＮＡＬｅｕ１及脱镁ｔＲＮＡＬｅｕ１在不同稀土离子作用下与纯化亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶的氨酰化作用．ｔＲＮＡＬｅｕ１与亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶的结合及催化效率均受参与稀土离子的影响，表观Ｋｍ值有较明显的变化．结果表明，亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶催化的ｔＲＮＡＬｅｕ１氨酰化反应所需Ｍｇ２＋能够被稀土离子取代，但亲合性能不同．

Select

酶、多肽电荷数的理论计算及误差研究

张光先,李学刚,刘发敏,张明晓

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 704-709.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

对酶的电荷数随ｐＨ变化的定量关系进行了理论推导，将推导出的酶的电荷数与ｐＨ的关系式应用于多肽等电点的计算，理论计算结果与文献实验结果完全一致，并推导出酸性氨基酸、碱性氨基酸及中性氨基酸等电点的计算式，与现有计算式完全一致．应用荧光光谱和荧光偏振对肌酸激酶带电性随ｐＨ值的变化关系的研究表明，理论计算符合实验结果，表明：此文理论关系式是可靠的．

Select

地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediteranei)U-32硝酸还原酶的定位、纯化及性质

李果龙,杨蕴刘,焦瑞身

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 710-714.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

在力复霉素ＳＶ研究中，发现硝酸盐对抗生素合成呈现多效性作用，不仅大幅度提高产量，还对产生菌——地中海拟无枝菌酸菌生理产生多方面的影响，从而提出整体性调节的结论．这一多效性作用是由硝酸盐所引起的，为此对硝酸还原酶进行了研究．首先，通过原生质体渗透裂解发现地中海拟无枝菌酸菌Ｕ－３２的硝酸还原酶是一个胞质酶．该酶极不稳定，缓冲液中加入硝酸钾、甘油等保护剂能极大地提高其稳定性．通过硫酸鱼精蛋白沉淀，硫酸铵分级分离，Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ、Ｂｉｏ－ＧｅｌＡ１．５ｍＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析等多步纯化得到了电泳纯的硝酸还原酶．该酶为一７９ｋＤ的单亚基酶，每分子酶含有约２．２９原子的钼，但并不含有非血红素铁、酸不稳定硫、ＦＭＮ及ＦＡＤ，其等电点为６．２，反应最适ｐＨ为７．２，最适温度为４０℃．对硝酸根的Ｋｍ值为１３．３μｍｏｌ／Ｌ．同时分析了该酶的吸收光谱．

Select

岩豆凝集素分子修饰与圆二色性的关系研究

鲍锦库,曾仲奎,周红,杨莉

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 715-720.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

天然态岩豆凝集素（ＭＤＬ）远紫外圆二色性（ＣＤ）谱显示２１６ｎｍ处单一负峰，是一种高β－折叠构象凝集素；近紫外ＣＤ谱呈现２８２ｎｍ处负峰和２６０～２７５ｎｍ及２９５ｎｍ处的负肩，经Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺（ＮＥＭＩ）和对氯汞苯甲酸（ＰＣＭＢ）修饰ＭＤＬ的巯基，其近紫外ＣＤ谱未发生变化，远紫外ＣＤ谱仅发生细微变化，ＭＤＬ凝集活性保持不变；ＰＣＭＢ过量时，ＣＤ谱呈现典型的无规卷曲谱形，ＭＤＬ完全丧失凝集活性，去除ＰＣＭＢ后，活性又全部恢复．二硫苏糖醇（ＤＤＴ）修饰ＭＤＬ的二硫键并用碘乙酸（ＩＣＨ２ＣＯＯＨ）保护巯基，ＭＤＬ远紫外ＣＤ谱２１６ｎｍ处的负峰红移至２２５ｎｍ，且显著减小；同时，近紫外ＣＤ谱２８２ｎｍ处负峰几乎消失，两负肩分别保持完整，分子中α－螺旋降低，无规卷曲增加较多，ＭＤＬ凝集活性未发生变化．用Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）修饰ＭＤＬ分子中的色氨酸，导致２１６ｎｍ负峰蓝移至２０８ｎｍ且变小，分子中无规卷曲和α－螺旋增加，β折叠减少，近紫外ＣＤ谱２９５ｎｍ负肩消失，２８２ｎｍ负峰红移至２８７ｎｍ，ＭＤＬ凝集活性完全丧失．

Select

蚯蚓纤溶酶原激活剂(e-PA)小亚基活性中心的酶学性质及CD光谱的研究

杨嘉树,郭亚迁,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 721-725.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

蚯蚓纤溶酶原激活剂（ｅ－ＰＡ）具有多种底物特异性．对构成其的小亚基的活性中心的研究有利于阐述ｅ－ＰＡ的结构与功能的关系．利用胰蛋白酶的特异性抑制剂ＴＬＣＫ（Ｎ－α－ｐ－ｔｏｓｙｌ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｋｅｔｏｎｅ）对小亚基进行抑制活性的研究，结果表明ＴＬＣＫ对酶促反应的抑制曲线与可逆抑制曲线相似，但在抑制剂存在下的最大反应速度与抑制剂不存在时的最大反应速度不同．结合小亚基在ＴＬＣＫ存在下的ＣＤ光谱变化，证明了小亚基分子表面存在两个活性位点，这两个活性位点对ＴＬＣＫ的敏感性不同，从而造成ＴＬＣＫ抑制行为的异常．推测不同的活性结构对应于不同的底物特异性．

Select

血红素加氧酶系的共固定化及部分性质研究

龚兴国,曾冬云

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 726-731.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为了检测血红素加氧酶系分子间的相互作用和共固定化酶系的反应动力学，利用２′，５′－ＡＤＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱对血红素加氧酶、ＮＡＤＰＨ－细胞色素ｃ还原酶和胆绿素还原酶进行非膜重组，再以纤维素为载体，用重氮化法固定此重组的酶复合物和共固定非重组的３种酶，发现固定化的重组酶系比非重组酶系能更好地发挥协同作用，在室温条件下可催化血红素一步合成胆红素．共固定化酶的最适ｐＨ为７．２，最适温度为３８℃，Ｋｍ值为０．９３μｍｏｌ／Ｌ．巯基试剂和金属卟淋对固定化酶有抑制作用，共固定化酶比游离酶系稳定性提高，３８℃下的操作半寿期可延长至４２０ｈ，在０～４℃保存两个月其酶活力无明显变化．

Select

多形胶质母细胞瘤细胞系端粒酶活性的测定

刘佳,郭丽,江岩,李宏

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 732-735.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

端粒缩短见于星形细胞瘤发展过程中，但其长度在胶质母细胞瘤／细胞系相对稳定，提示胶质瘤细胞内存在端粒修复机制的可能性．为证实此点，利用端粒重复片段扩增技术（ＴＲＡＰ），对８株人／大鼠多形胶质母细胞系的蛋白提取液中端粒酶活性加以测定．结果显示：８例胶质瘤样本的反应液均可见端粒ＰＣＲ扩增片段；用无ＤＮａｓｅ的ＲＮａｓｅ事先处理蛋白提取液，可明显降低或消除ＰＣＲ产物的出现，说明ＴＲＡＰ反应中的ＰＣＲ扩增是在端粒酶的介导下进行而非ＤＮＡ污染或其它端粒修复因子所致．从而不但建立起检测人癌细胞内端粒酶活性的可靠方法，也为针对端粒酶的胶质母细胞瘤生物／药物治疗提供了实验依据．

Select

大鼠骨骼肌多催化功能蛋白酶的提取、鉴定及其抗血清的制备

倪兵,周建新,董燕麟

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 736-741.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为了研究多催化功能蛋白酶（ｍｕｌｔｉｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＣＰ）在负氮平衡形成中的作用，以大鼠骨骼肌为原料，提取此酶并制备其抗血清．将大鼠骨骼肌粗提物经４５％～６５％饱和度硫酸铵分级盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤，最后从Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析柱上获得单一活性洗脱峰．酶活性用Ｃａｒｂｏｂｅｎｚｏｘｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－４－ｎｉｔｒｉｎｉｌｉｄｅａｃｅｔａｔｅ作底物检测．非变性ＰＡＧＥ银盐染色显示单一区带的骨骼肌多催化功能蛋白酶，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银盐染色显示１０条亚基电泳区带，分子量在２５～３２ｋＤ之间．纯化的酶免疫兔８周后，抗血清效价达１３２，用分级盐析和离子交换层析纯化抗血清，显示单一电泳区带的ＩｇＧ．Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析显示只在２５～３２ｋＤ之间出现多条亚基区带．这些结果提示已获得电泳纯ＭＣＰ及其较高特异性的多克隆抗体．

Select

用定位突变方法对人脑己糖激酶活性位点的研究

陈丽蓉

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 742-745.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

哺乳动物己糖激酶Ⅰ的分子量是１００ｋＤ．目前已经认为是由分子量５０ｋＤ酵母型己糖激酶通过基因复制和融合进化来的．己糖激酶Ⅰ的Ｃ端半分子包含了底物葡萄糖的结合位点即催化位点．Ｘ射线衍射结构的结果已经推测在酵母型的己糖激酶分子中Ｓｅｒ－１５８、Ａｓｐ－２１１是和葡萄糖的结合及催化活性有关，这些氨基酸残基相当于人脑己糖激酶Ⅰ分子中的Ｓｅｒ－６０３、Ａｓｐ－６５７，它们正好位于该酶分子的Ｃ端半分子中．定位突变这两个氨基酸残基得到４个该酶的Ｃ端半分子酶（ｍｉｎｉ－ＨＫⅠ）的突变体，它们是Ｓｅｒ－６０３→Ｃｙｓ，Ｓｅｒ－６０３→Ｔｈｒ，Ａｓｐ－６７５→Ｇｌｕ，Ａｓｐ－６７５→Ｖａｌ．实验结果指出４个突变体酶的Ｋｍ值变化不大，但酶活性只保留野生型酶的０．２８％～１１％，园二色谱分析４个突变体的ＣＤ谱与野生型酶基本一致，因此说明二级结构没有变化．这些研究结果和Ｘ射线衍射结构的推断是一致的，显示了Ｓｅｒ－６０３和Ａｓｐ－６５７氨基酸残基在该酶结合底物葡萄糖或催化作用上起了重要的作用．

Select

山豆根木葡聚糖的研究

董群,丁思炜,方积年

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 746-750.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

研究了山豆根中一种木葡聚糖的结构．用１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ提取，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析，Ｆｅｈｌｉｎｇ试剂分级得到山豆根木葡聚糖组分ＳＳｂ－１ＦＡ，用完全酸水解，甲基化分析，部分酸水解，三氧化铬氧化和１Ｈ，１３ＣＮＭＲ等方法对其结构进行研究．结果表明：ＳＳｂ－１ＦＡ的分子量为２．６×１０４，比旋光度［α］２０Ｄ＝＋１０．９°（ｃ０．２２，Ｈ２Ｏ），由Ｌ－Ｆｕｃ，Ｄ－Ｘｙｌ，Ｄ－Ｇａｌ和Ｄ－Ｇｌｃ组成，摩尔比为：２．９２９．９７．５５９．８．ＳＳｂ－１ＦＡ由１→４连接的β－Ｄ－Ｇｌｃ残基构成主链，分枝有α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→，β－Ｄ－Ｇａｌ（１→２）α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→等类型，部分非还原末端由Ｌ－Ｆｕｃ（１→构成．

Select

极大螺旋藻多糖IPⅡA、IPⅡB的理化特性及抗肿瘤活性研究

吴洁,张成武,刘义峰

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 751-755.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

极大螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｍａｘｉｍａ）经碱性热水抽提，酶解和Ｓｅｖａｇ法结合脱蛋白，醇沉淀得胞内多糖ＩＰⅠ．ＩＰⅠ经ＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５柱层析得到组分多糖ＩＰⅡＡ和ＩＰⅡＢ，糖含量分别为７４．９％和６８．４％，ＩＰⅡＡ分子量为１．３×１０６，ＩＰⅡＢ分子量为５．０×１０５．以完全酸水解、薄层层析、气相层析、红外光谱、核磁共振氢谱对二者进行化学结构分析，证明均为酸性杂多糖；ＩＰⅡＡ糖苷键为α型，ＩＰⅡＢ中同时存在α和β型糖苷键．离体条件下，ＩＰⅠ与血癌细胞ＨＬ６０和Ｕ９３７分别共同培养，半固体琼脂培养法检测，结果表明，ＩＰⅠ对二者的作用具有选择性，同时ＩＰⅠ的促进和抑制作用均表现出一般药物所具有的剂量效应．

Select

AG555对猪血小板胞浆钙离子浓度的影响

宋芝娟,刘文,梁念慈,Ａ．Ｇａｚｉt

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 756-759.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

将荧光标记物Ｆｕｒａ２－ＡＭ参入到血小板中，利用荧光分光光度计检测胞浆钙离子浓度的变化来研究ＡＧ５５５（一种合成的酪氨酸蛋白激酶抑制剂）对猪血小板胞浆钙离子浓度的影响．结果发现ＡＧ５５５可降低血小板胞浆钙离子浓度，并对凝血酶诱导的胞浆钙离子浓度的升高有明显的抑制作用．ＡＧ５５５可能对血小板功能有一定的影响，这对于进一步阐明ＡＧ５５５的作用机理将有重要意义．

Select

介绍一种PCR鉴定重组体DNA插入方向及转染的方法

曹国栋,王申五,陈德喜

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 760-762.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

介绍一种用ＰＣＲ方法鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及其是否导入细胞的方法．其原理是选择紧靠载体克隆位点上游的一段序列为上游引物，以扩增插入序列的上、下游引物分别作为下游引物进行ＰＣＲ．载体上游引物加插入序列的上游引物可扩出产物者为反向连接；加插入序列的下游引物可扩出产物者为正向连接．该法简单、快速，可广泛用于鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及基因转染时外源基因是否导入细胞内．

Select

硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸抗HBV细胞的实验研究

韩金祥,王玉林,张翠,朱有名

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 763-769.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

针对ＨＢＶ的５个基因位点作为靶序列，设计合成硫代反义寡聚核苷酸（Ｓ－ａｓＯＤＮ）．应用ＥＬＩＳＡ方法、ＭＴＴ比色法、电子显微镜等手段，观察Ｓ－ａｓＯＤＮ对ＨｅｐＧ２２２１５细胞ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ抗原的表达，及细胞的毒性、细胞形态和超微结构的影响．结果显示不同靶位点的Ｓ－ａｓＯＤＮ对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ表达都有显著的抑制作用，且表现为序列特异性、剂量相关性、联合协同性和一定的抗核酸酶性，在浓度为２０μｍｏｌ／Ｌ时，对细胞无明显杀伤作用，对细胞的超微结构无显著的改变．结果提示Ｓ－ａｓＯＤＮ有望发展为抗ＨＢＶ的有效药物，但靶序列的选择、透细胞膜性及联合用药配伍等仍值得进一步研究和解决．

Select

CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究

袁泉,郑德先,肖声,刘士廉

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 770-774.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

研究了ＣＤ３ε和ＰＭＡ对细胞凋亡基因ｆａｓ的转录调控作用．根据已知的人ｆａｓ基因５＇上游序列设计引物，用ＰＣＲ法从人胸腺细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ｆａｓ５＇上游长为４４６ｂｐ的启动子片段．将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体ｐＸＰ２中．经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒ＤＮＡ的结构和序列正确．用此质粒（ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ）瞬时转染人ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞，分析报告基因的表达水平．结果表明ｆａｓ基因上游－５０６到－６０的区域有弱启动子活性，约是阴性对照的１．５倍．抗ＣＤ３ε抗体和ＰＭＡ处理均可增强ｆａｓ启动子的活性，促进报告基因的表达，其虫荧光素酶活性分别是未经处理的ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ转染细胞的１．７倍和３．３倍，但二者没有协同作用．ＰＫＣ的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ＰＴＫ的抑制剂ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ可抑制ＰＭＡ诱导的ｆａｓ基因转录，使虫荧光素酶基因的表达降至未用ＰＭＡ处理的水平．但ＰＴＫ的另一种抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可与ＰＭＡ发挥协同作用，上调ｆａｓ基因的转录，使虫荧光素酶活性增加到５倍．这些结果为阐明ＣＤ３ε及ＰＭＡ介导Ｔ淋巴细胞激活和凋亡的分子机制

Select

iNOS在不同种属血管细胞中诱导表达差异的比较研究

韩梅,温进坤

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 775-779.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为了探讨不同种属血管细胞中ｉＮＯＳ基因诱导表达的差异及其分子机制，采用Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ印迹、电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）和细胞转染实验对ｉＮＯＳ基因在人、牛、大鼠血管内皮细胞（ＥＣ）和兔、大鼠平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）中的诱导表达和转录调控机制进行了研究．结果显示，ＩＬ－１β可诱导人、大鼠的ＥＣ和大鼠的ＶＳＭＣ表达ｉＮＯＳ，但对兔ＶＳＭＣ和牛ＥＣ无诱导作用．在ＩＬ－１β＋ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ作用下，人和大鼠血管细胞ｉＮＯＳ的表达活性显著高于牛和兔，同一种属动物的ＶＳＭＣ比ＥＣ更易被诱导活化．用含有大鼠ｉＮＯＳ基因上游－１０３７～－４３８片段的报告基因转染这些细胞，经细胞因子和ＬＰＳ处理后，被转染细胞的ＣＡＴ活性变化与细胞的ｉＮＯＳ表达活性相一致．上述结果表明，ｉＮＯＳ表达调节具有种属特异性和细胞特异性．ＥＭＳＡ证实在不同种属的ＥＣ和ＶＳＭＣ中，与ｉＮＯＳ基因表达调控区（－１０３７～－７８７）相互作用的蛋白因子是不均一的．提示不同种属血管细胞内特异转录因子的种类及浓度不同和（或）反式因子与顺式元件相互作用的方式不同可能是这种差异的分子基础．

Select

佛波酯对NIH3T3细胞整合蛋白α_5亚基表达的影响

涂立宇,范俊,查锡良

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 780-783.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

１００ｎｍｏｌ／Ｌ佛波酯（１２－Ｏ－ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｂｏｌ１３－ａｃｅｔａｔｅ，ＴＰＡ）作用于ＮＩＨ３Ｔ３细胞２４ｈ，流式细胞仪检测到细胞表面整合蛋白α５亚基含量增加５２．３％．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法测定结果亦表明整合蛋白α５亚基ｍＲＮＡ量增加，于２ｈ时达到高峰，为对照的４．１４倍．蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）的活性增加趋势与之基本一致．运用ＰＫＣ的抑制剂鞘氨醇（ｓｐｈｉｎｇｏ－ｓｉｎｅ）和酷氨酸激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ，ＴＫ）抑制剂４，５，７－三羟基异黄酮（ｇｅｎｅｓｔｅｉｎ）进一步研究，发现两者均可抑制佛波酯对整合蛋白α５亚基表达的上调作用．提示佛波酯对ＮＩＨ３Ｔ３细胞整合蛋白α５亚基表达的调控与ＰＫＣ和ＴＫ均有关．

Select

酵母系统表达TPO与E.coli表达TPO N端结构域生物半衰期比较

刘丽,田生礼,王颖,芦兴武,孟岩,谢宝树,刘立忠,冷爱军

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 784-789.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

为了探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其生物半衰期的关系，首先纯化了巴氏毕赤酵母系统分泌表达的人ＴＰＯ成熟肽和大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ端结构域蛋白．纯化产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定和活性分析后，两种蛋白以相同浓度或相同活性单位给Ｗｉｓｔｅｒ大鼠尾静脉注射，利用酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）和ＴＦ１细胞测定不同时间点实验动物血浆中ＴＰＯ浓度或生物学活性，求出两种ＴＰＯ的生物半衰期（ｔ１／２）值．结果显示，以相同浓度和相同活性单位给药，ＴＰＯ成熟肽的ｔ１／２均比其Ｎ端结构域的长，前者分别是后者的１．６５倍和１．２７倍．

Select

梭曼和沙林对电鳐电器官乙酰胆碱酯酶抑制作用动力学

陈久祯,王惠芳,李艳军,刘威,温巨芳

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 790-792.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

梭曼和沙林是毒性很强的有机磷神经毒剂，它们的共同特点是对胆碱酯酶（ＡＣｈＥ，ＥＣ３．１．１．７）都有很强的抑制作用，但两者又不完全相同．过去人们对梭曼和沙林的毒性、毒理研究得较多，而对其对ＡＣｈＥ抑制作用动力学研究得较少，且相互间差异较大．为了对这一...

Select

含翻译增强子的表达载体pSC34的构建及初步应用

柴玉波,刘慧萍,赵忠良,陈苏民,陈南春,高辉,刘新平

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 793-795.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

１９８８年Ｏｌｉｎｓ［１］发现Ｔ７噬菌体基因１０的先导序列（Ｔ７ｇ１０Ｌ）具有明显的促进基因翻译的作用．本文构建了含Ｔ７ｇ１０Ｌ的表达载体ｐＳＣ３４，并尝试表达了几个不同类型的基因．１材料与方法１．１菌株大肠杆菌菌株ＴＡＰ１０６为本室储存．ＴＡＰ１０...

Select

小葱叶胞质中3种Cu·Zn-SOD的纯化及性质研究

唐双焱,邹国林,金建明

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 796-799.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是一种消除体内氧自由基损伤的重要因子，可分为ＣｕＺｎ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ和Ｆｅ－ＳＯＤ．作者在小白菜叶中曾发现５种ＳＯＤ，已鉴别其中一种为Ｍｎ－ＳＯＤ，来源于线粒体［１］；其余４种为ＣｕＺｎ－ＳＯＤ，其中２种分别来源于胞质［...

Select

菠菜中的乙醇酸氧化酶是一个同工酶

徐杰

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 800-804.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

乙醇酸氧化酶（ＥＣ．１．１．３．１５．ＧＯ）是光呼吸途径的关键酶，降低其活性可提高Ｃ３植物如水稻的产量，在目前中国乃至世界人口不断增加和可耕种土地日益减少的情况下，对ＧＯ的研究具有重要的理论意义和实际应用价值．在光呼吸途径被提出后的几十年间，人们对如...

Select

耐热性碱性磷酸酯酶作为非放射性标记物的研究

朱运良,盛小禹,董海,周宗祥,毛裕民

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 805-807.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

通过生物素与亲和素－酶复合物系统或地高辛与抗地高辛－酶复合物系统可把酶间接标记到探针上．Ｒｅｎｚ等通过不同的化学方法直接把酶标记到探针上［１～３］．耐热性碱性磷酸酯酶ＦＤ－ＴＡＰ（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）具有耐...

Select

小麦胆色素原脱氨酶的纯化及部分性质研究

范军,郭蔼光

中国生物化学与分子生物学报. 1998, 14(06): 808-811.

摘要 ( ) PDF全文 ( )

可视化

生物中四吡咯化合物合成的共同途径是由δ－氨基酮戊酸（δ－ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃａｃｉｄ，ＡＬＡ）在δ－氨基酮戊酸脱水酶（δ－ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎａｔｅｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ，ＡＬＡＤ）作用下合成胆色素原（ｐｏｒｐｈｏ－ｂｉｌｉｎｏｇｅｎ，Ｐ...

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

过刊目录

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

过刊目录