中国生物化学与分子生物学报

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李弘剑,张毅

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 371-377.

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嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶Ⅰ及其取代突变酶８８（２５）的延伸突变是指在酶蛋白的Ｃ末端上连接一段随机肽链，从而改变了酶蛋白的结构．研究结果表明，这种延伸突变的方法非常有效地提高了酶的热稳定性，并且随机肽链的疏水性与其对应的延伸突变体酶的热稳定性呈现一定的负相关性，即随机肽链的疏水性越高，对应的突变体酶热稳定性越低

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重组逆转录病毒载体GTK的构建及HyTK基因转移的研究

张晓志,吴小兵,韩虹,彭朝晖,徐钤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 378-384.

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用逆转录病毒载体将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）导入恶性肿瘤细胞，随后可应用药物９－（１，３－二羟基－丙氧基－甲基）鸟嘌呤（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）选择性地杀死肿瘤细胞．将ＨｙＴＫ基因替换逆转录病毒载体ＧｌＮａ中的ｎｅｏ基因，构建成重组逆转录病毒载体ＧＴＫ，转染混合包装细胞（双噬性ＰＡ３１７细胞和单噬性ＧＰ＋Ｅ－８６细胞），通过“乒乓效应”获得高滴度重组病毒．用该重组病毒转染小鼠恶性黑色素瘤细胞系Ｂ１６细胞，用ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ筛选出阳性细胞克隆（ＨｙＴＫ＋），经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入肿瘤细胞中，且不含可复制的辅助病毒．分别用不同浓度的ＧＣＶ作用于ＨｙＴＫ－及ＨｙＴＫ＋的Ｂ１６细胞，光镜下观察２４ｈ和４８ｈ后细胞形态及进行活细胞计数．结果表明，ＧＣＶ浓度大于０．１μｍｏｌ／Ｌ时即对Ｂ１６／ＨｙＴＫ＋细胞有显著的杀伤作用

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人vigilin基因5'端调控区域的研究

曾星

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 385-390.

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在克隆了人基因组全长ｖｉｇｉｌｉｎ基因的基础上，对其５端转录调控区域再克隆，获得Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ克隆，再用限制酶ＡｐａⅠ和ＥｃｏＲⅠ切除３端约４ｋｂ部分，得到Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ３ＡＥ克隆，并对该克隆进行双向测序分析．结果表明：克隆Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ用ＡｐａⅠ酶消化后，用ｃＤＮＡ上游开始的２０个碱基组成的寡聚核苷酸做探针进行分子杂交，可见一条小于０．１ｋｂ杂交带，根据物理图谱分析，位于Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ３ＡＥ克隆的ＡｐａⅠ端，从而推断该克隆含有转录调控元件，５端序列分析得到二个ＴＡＴＡ盒，一个ＣＡＡＴ盒和一个ＧＣ盒以及二个可能的Ａｐ－１和Ａｐ－２结合位点．认为ＧＣ盒可能为人ｖｉｇｉｌｉｎ基因启动子的组成部分

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多瘤病毒癌基因产物对PDGF刺激应答的影响

于爱鸣,冈野幸雄,于秉治

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 387-489.

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多瘤病毒癌基因产物对ＰＤＧＦ刺激应答的影响于爱鸣冈野幸雄＊于秉治（中国医科大学基础医学院生化教研室，沈阳１１０００１）＊（日本岐阜大学医学部生化学教室，日本岐阜５００）多瘤病毒癌基因主要表达三种转化蛋白．其中，中等分子肿瘤抗原（ｍｉｄｄｌｅｓｉｚｅｄ...

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小鼠Sry基因和Sox基因的克隆分离与鉴定

张晓群,王申五,陈东,陈永福,陆道培

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 391-395.

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为了深入探讨性分化分子机制，构建了小鼠基因文库以ＳＲＹ探针筛选，分离到了两组阳性克隆，一组含ＥｃｏＲⅠ／３．５ｋｂ，此片段中载有小鼠Ｙ染色体上的Ｓｒｙ基因．另一组含ＥｃｏＲⅠ／３．０ｋｂ或ＳａｌⅠ／３．０ｋｂ，此片段有小鼠Ｙ染色体之外的Ｓｏｘ基因

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利用复感儿T淋巴细胞作为外源性ADA基因表达效应细胞的实验探讨

尤颖健,屈伸,何善述,王晓琳,沈关心

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 396-400.

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对４１例健康儿童和１７例反复呼吸道感染患儿（复咸儿）的外周血淋巴细胞ＡＤＡ活性进行了检测．两例ＡＤＡ活性明显低下的复感儿的外周血Ｔ淋巴细胞被选作实验样品，经体外培养后，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的的方法导入外源性ＡＤＡ基因．结果表明：体外培养的两例复感儿淋巴细胞中ＡＤＡ活性较基因转移前升高；细胞免疫学特性也在一定程度上获得改善

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脂多糖对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达及细胞增殖的影响

乔亚明,温进坤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 401-405.

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应用ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查脂多糖（ＬＰＳ）对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）一氧化氮合酶（ＮＯＳ）基因表达及ＮＯ合成的影响，用３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＬＰＳ对细胞ＤＮＡ合成的影响．结果表明，ＬＰＳ在诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳｍＲＮＡ表达和促进ＮＯ合成的同时，抑制ＶＳＭＣＤＮＡ合成．证明ＬＰＳ的作用与其浓度和作用时间有关

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TNF-α、IL-1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及作用机制研究

乔亚明,温进坤,魏素珍

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 406-411.

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通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因表达及ＮＯ生成的影响．结果表明，ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显著诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因表达和促进ＮＯ生成，其作用强度与浓度和作用时间有关；双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ，ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用．ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分抑制ＴＮＦ－α对ｉＮＯＳ基因表达的诱导作用及ＮＯ生成

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反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

罗振革,高杰英,李红,彭虹,朱锡华

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 412-417.

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将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ｃＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动子下游，构成ＣＤ４４Ｓ的反义ＲＮＡ载体．将其用电击法导入ＣＤ４４＋的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９，转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地抑制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达．ＣＤ４４的表达被抑制后，瘤细胞与透明质酸的结合力下降，细胞的体外生长速率不受影响．将其接种裸鼠皮下，发现其致瘤性明显降低

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美洲拟鲽抗冻蛋白基因(afp)导入番茄的研究

黄永芬,汪清胤,付桂荣,赵晓祥,杨志兴

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 418-422.

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将整合在Ｔｉ质粒上的ａｆｐ基因作为供体ＤＮＡ，用花粉管通道和子房注射方法导入番茄品种“中蔬四号”中，对Ｄ１、Ｄ２代进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交获得杂交带；田间抗寒性试验表明，在春季平均气温低于正常年份４·４℃条件下，转基因组植株生长势优于对照；致死温度也比对照降低２℃．说明ａｆｐ基因已整合到转化番茄基因组并获得表达

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人外周型苯二氮卓受体及其突变受体cDNA克隆和序列分析

徐国恒,胡本荣,罗超权,陈汝筑,邱鹏新

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 423-427.

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用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆了三种人外周型苯二氮卓受体ＰＢＲｃＤＮＡ，测序表明，４４２ｂｐ片段与文献报道相比缺失８４ｂｐ编码序列，其转录水平高于正常ＰＢＲ．该序列编码一个与ＰＢＲ结构相关但缺失了２８个氨基酸残基的突变受体蛋白．这一异常转录本可能是通过选择性剪接方式转录产生并只存在于中国人肝癌ＢＥＬ７４０２细胞系，表明ＰＢＲ基因表达具有细胞特异性和异质性．突变受体的发现为研究ＰＢＲ的结构和功能提供了理想的分子和细胞模型

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一种快速非同位素测定2',5'-寡聚腺苷酸合成酶活性的方法

冯云峰,杨开宇

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 428-431.

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介绍一种新的非同位素测定２′，５′－寡聚腺苷酸合成酶（２′，５′－ＯＡＳＥ）活性的方法．反应液经已糖激酶处理，点样于ＰＥＩ－纤维素薄层层析板上，经甲醇浸泡与预层析和在０．７５ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ３．５）缓冲液中的层析可使ＡＤＰ和２′，５′－Ａｎ分离开，系统偏差和２′，５′－ＯＡＳＥ测活分析表明，本方法可用于粗酶液及部分纯化酶液的２′，５′－ＯＡＳＥ活性测定，并可用于临床生化分析

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甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

沈润南,马清泉,尉迟力,李树本,陈勇

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 432-437.

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Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析，纯度大于９５％，纯化倍数为４．４，加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成，分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰，且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０，与其它黄素一铁硫蛋白相似，推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下，还原酶能够和ＮＡＤＨ作用，ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失，说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ，部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ，它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍，ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ

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红花菜豆(矮生红花变种)凝集素分子的色氨酸残基修饰与其活性的关系

施炜星,孙册

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 438-443.

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用各种化学试剂修饰红花菜豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｃｏｃｃｉｎｅｕｓｖａｒｒｕｂｒｏｎａｎｕｓ，Ｂｅｒｒｙ）凝集素（简称ＰＣＬ）分子，测定与其活性相关的氨基酸残基．经ＮＢＳ修饰表明ＰＣＬ具有８个Ｔｒｐ残基，其中４个暴露于分子表面，此４个Ｔｒｐ残基被修饰后，ＰＣＬ的凝血活性完全丧失．比较ＰＣＬ修饰前后的ＣＤ光谱表明修饰不改变其二级结构。修饰Ｔｙｒ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ残基和游离氨基及羧基不影响ＰＣＬ的血凝活性．巯基也不是血凝活性所必需，但是ＰＣＬ分子中的二硫键被还原，或被ＣＮＢｒ分解为两个片断则使蛋白质丧失血凝活性，提示分子的完整结构对ＰＣＬ的血凝活力是重要的

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小鼠金属硫蛋白 Ⅰ cDNA编码序列的克隆及其在昆虫细胞中的表达

殷慎敏,时晓冰,李令媛,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 444-448.

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将质粒ｐＢＸ－ＭＴ上的小鼠ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ片段切下作为模板，通过ＰＣＲ方法删除该片段的非编码序列，将编码序列克隆到质粒ｐＢＳ－ＳＫ中，经ＤＮＡ序列测定后证明其克隆序列正确．再将ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ编码序列插入到转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８的ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ位点之间，通过磷酸钙／ＤＮＡ共转染方法将其导入昆虫细胞Ｓｆ９中，以Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＤｏｔＥＩＡ方法对表达产物进行了检测，表达量为１ｍｇ／Ｌ

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尿激酶抗人交联纤维蛋白-D-二聚体单抗化学偶合体的制备

欧阳伟民,余瑞元,徐长法

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 449-453.

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利用双功能试剂Ｎ－琥珀酰亚胺－３（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ）作交联剂，合成了尿激酶（ＵＫ）－抗人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体单抗（ＭＡ－ＨＩＤ１）化学偶合体（ＵＫＭＡ－ＨＩＤ１），并用苯甲脒－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ及人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化，获得偶合体产物．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带，其分子量约为２０００００．纤维蛋白平板法测活结果显示，偶合体中酶比活为５３０００ＩＵ／ｍｇ尿激酶蛋白，与偶联前的５４３００ＩＵ／ｍｇ蛋白相仿．ＥＬＩＳＡ测试显示，偶合体对人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体有免疫反应性，并且与偶联前的抗Ｄ－二聚体单抗对此抗原的反应性相当

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兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

于静,周妍娇,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 454-459.

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制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ），然后脱掉其中的金属，获得不含金属的硫蛋白（ａｐｏＭＴ）．用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８１的金属蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合，将其β结构域用金属饱和，在３７℃，ｐＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域，获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ｉ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域．通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外扫描等鉴定，证明确实得到了Ｎ末端为Ｍｅｔ，分子量３０００左右，金属蛋白摩尔比为５～５．５１的ＭＴβ结构域，其氨基酸组成与理论值基本相符

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平滑肌肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白功能调节

陈明,李爱媛,周念辉,韩永根

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 460-463.

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在有Ｃａ２＋和钙调蛋白存在时，肌球蛋白轻链激酶催化肌球蛋白磷酸化，促使肌动蛋白激活的肌球蛋白（肌动球蛋白）Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性显著增加．然而，肌球蛋白磷酸化水平与Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶之间的关系是非线性的，原肌球蛋白可以进一步增加Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的活性，但仍不改变它们之间的非线性关系．肌球蛋白轻链激酶的合成肽抑制剂抑制了肌球蛋白磷酸化和Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性，并导致平滑肌去膜肌纤维的等长收缩张力与速度的降低．结果提示肌球蛋白轻链激酶参与脊椎动物平滑肌收缩的调节过程，肌球蛋白轻链磷酸化作用会引起平滑肌收缩

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胸腺淋巴细胞抑裂素的分离及其性质的研究

李梅,金以丰,李敏意,张鹤云,汤国枝

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 464-468.

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从猪胸腺分离到一种低分子量Ｔ淋巴细胞抑裂素，经凝胶过滤测定分子量约为１２００；等电聚焦显示二条带，等电点分别为６．６和７．２，此抑制素不是多胺类物质；蛋白酶处理可使之丧失抑制活性，核糖核酸酶处理不影响活性，证明为多肽物质；抑裂素在体外具有抑制淋巴细胞转化及刺激白介素－２产生的能力；这种抑制作用证明不是由于细胞毒所引起的；抑制是可逆的．体内试验此抑裂素可以抑制多种免疫反应，是一种有希望的免疫抑制剂

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钙调素拮抗剂对人肺癌细胞增殖抑制及与cAMP信号系统相关性之初探

张弘,柳惠图

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 469-473.

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对钙调素（ＣａＭ）拮抗剂—三氟拉嗪（ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ，ＴＦＰ）在人肺癌细胞ＰＬＡ８０１的增殖抑制中的作用和ＣａＭ与ｃＡＭＰ信号系统水平的变化进行了研究．用５、１０、１５和２０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理人肺癌细胞时观察到ＴＦＰ在抑制细胞内ＣａＭ活性的同时，抑制了细胞的增殖．药物处理的细胞在软琼脂中形成的集落数减少且明显小于对照组细胞．使用流式细胞光度术分析细胞周期的结果表明：１０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理抑制了Ｇ１期细胞向Ｓ期的转移．当用１０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ作用细胞５ｍｉｎ时，细胞内ｃＡＭＰ水平达到正常水平的１．８倍，直到３ｈ仍明显高于正常水平．同时，ｃＡＭＰ依赖的ＰＫＡ的活性在加药后１５ｍｉｎ上升到正常水平的２．８倍，直到加药３ｈ．活性仍保持较高水平，结果表明：钙调素功能的抑制，提高了ＰＬＡ－８０１细胞内ｃＡＭＰ系统的水平，Ｃａ２＋－ＣａＭ和ｃＡＭＰ－ＰＫＡ两个信号系统的协调作用，抑制了细胞的增殖

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衰老细胞转录因子AP_1/CREB结合活性对EGF的可诱导性下降

毛泽斌,张宗玉,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 474-477.

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转录因子与ＤＮＡ的结合是基因转录的关键环节．通过迁移位移法分析了转录因子ＡＰ１、ｃＡＭＰ反应元件结合蛋白（ＣＲＥＢ）、糖皮质激素反应元件（ＧＲＥ）结合蛋白在衰老细胞中的结合活性．结果表明，ＡＰ１与ＣＲＥＢ的结合活性在衰老细胞中对表皮生长因子（ＥＧＦ）的反应性低于年轻细胞；而ＧＲＥ结合蛋白的结合活性在衰老细胞中对ＥＧＦ的反应性无明显变化．这提示ＥＧＦ不能有效刺激衰老细胞增殖可能与其转录因子结合活性的改变有关

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微胶囊固定化过氧化氢酶的制取及对H_2O_2的分解作用

刘持标,黄葵,佘益民,单永奎,王玉洁

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 478-482.

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以乙基纤维素为膜材，用溶液干燥法制取了微胶囊固定化过氧化氢酶，探讨了制取过程中明胶的加入对微胶囊产率及固定化过氧化氢酶活性的影响，同时论述了存放时间、温度以及环境ｐＨ值对微胶囊固定化过氧化氢酶稳定性的影响．深入研究了微胶囊固定化过氧化氢酶对Ｈ２Ｏ２的分解作用，获得了十分有意义的结果

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粘质赛氏菌胞外蛋白酶的化学修饰

潘继承,汪劲松,向显智,黄阜峰

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 483-486.

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用九种化学修饰剂研究了粘质赛氏菌ＳｅｒｒａｔｉａＭａｒｃｅｓｃｅｎｓ４１００３（２）胞外蛋白酶分子中氨基酸侧链基团与酶催化活性的关系，结果表明组氨酸、丝氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸及天冬氨酸等残基与酶活性无关；半胱氨酸残基与酶活性也无直接关系；而酪氨酸和色氨酸残基侧链的修饰引起酶活力大幅度下降，说明酪氨酸和色氨酸残基为酶活力必需．

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槲皮素对凝血酶诱导的猪血小板肌动蛋白聚合的抑制作用

宋芝娟,刘文,梁念慈

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(04): 490-492.

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槲皮素对凝血酶诱导的猪血小板肌动蛋白聚合的抑制作用宋芝娟刘文梁念慈（广东医学院医用生化研究所，湛江５２４０２３）槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）有广泛的药理作用，如舒张血管〔１〕，抑制癌细胞ＤＮＡ合成〔２〕，诱发ＤＮＡ损伤〔３〕，抗超氧阴离子等〔４〕，...

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