中国生物化学与分子生物学报

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张腾飞,陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 1-6.

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从人外周血单核细胞中抽提总RNA为模板，分别用5’含EcoRⅠ、3’含BamHⅠ限制性酶切位点的细胞因子基因特异引物合成合信号肽全长IL－2、γ－IFN及α－TNFcDNA．然后将这些细胞因子cDNA分别重组入含筛选标记基因Neo的逆转录病毒载体LXSN中．采用磷酸钙共沉淀法转染逆转录病毒包装细胞系PA317．分别收集到含IFN－γ、TNF－α和IL－2基因的缺陷型逆转录病毒上清及只具空白载体质粒pLXSN的病毒上清这四种病毒颗粒用于导入人肝癌、胃癌细胞，可获得单克隆化的细胞因子基因修饰株PCR，Southern，RT－PCR及Northern杂交证明，有相应细胞因子及筛选标记基因的转入和表达生物活性分析也证实各基因修饰株细胞培养上清液中有一定活性的相应细胞因子．结果表明逆转录病毒介导的细胞因子基因转移是成功的

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应用cDNA文库快速构建法克隆高粱肌动蛋白基因

周立,张筱林,吴乃虎

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 7-13.

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取生长一周的高粱嫩叶为材料，按照cDNA文库快速构建法，用λgt10为载体成功地获得了含有2×106个重组噬菌体的cDNA文库。以水稻RAclcDNA为探针，经噬菌体原位杂交筛选出两个阳性克隆片段，并对其中一个进行了Southern杂交鉴定．然后将重组体中含有的cDNA片段（SoAcl）亚克隆至pBluescriptSK-载体上测序．结果表明高粱肌动蛋白基因SoAcl的序列长度为1445个核苷酸，其中编码区长1134个核苷酸，共编码377个氨基酸和一个终止密码子．根据欧洲生物学数据库（EMBLBANK）最新资料检索，高粱的这一肌动蛋白基因以前还没见报导，与迄今为止已发表的其它植物肌动蛋白相比具有很高的同源性，如与水稻RAcl相比，核苷酸序列同源性为91．5％，氨基酸序列同源性达97．5％．另外，根据SoAcl的核苷酸序列推导的氨基酸序列与其它植物和动物相应多肽相比存在着十个高度同源的结构域，可能是肌动蛋白之间和（或）肌动蛋白与其结合蛋白之间相互作用的位点，对肌动蛋白的功能可能起重要作用．

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恶性疟原虫子孢子CS抗原融合基因的表达及其生物活性

李杰之,马清钧,曹诚,于秀琴,石成华

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 14-18.

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采用遗传工程技术获得了含有恶性疟原虫子孢子CS抗原融合基因的重组质粒pMC055－CS的工程菌株，能高效分泌CS抗原的融合蛋白至胞外，可达25mg／L．具有霍乱毒素B亚单位（CT－B）和子孢子CS的抗原性．将纯化的融合蛋白免疫C57纯系小鼠，免疫后抗CT－B抗体滴度可达1：3200～6400，抗CS抗体滴度可达1：320～640．免疫小鼠采用约氏疟子孢子腹腔攻击，保护率达34～45％．

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大鼠肝tRNA~(Ile)基因的克隆与体外转录

张璐,钟雄霖,彭朝晖,徐钤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 19-23.

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采用PCR扩增出大鼠肝tRNAIle基因，构建了重组质粒pGWIW，并用T7RNA聚合酶／启动子系统对其进行了体外表达．经过对转录产物片段大小及运用Northernblot鉴定，证明获得了不含修饰核苷酸的大鼠肝tRNAIle生物学活性检测显示：合成基因体外转录产物氨基酰化活性是天然tRNA的40％，提示修饰核苷酸在哺乳动物Ile－tRNA合成酶的识别过程中起重要作用

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重组人apoE基因表达活性和转基因小鼠研究

琦祖和,汝昆,孙明增,杨鹏

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 24-28.

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人apoE基因组DNA，去除其自身启动子，代之以小鼠金属硫蛋白启动子，重组质粒经脂质体介导转入小鼠NIH／3T3细胞后，以人apoE基因组DNA／EcoRⅠ片段为探针检测mRNA表达，可见apoEmRNA杂交信号很强，经重金属诱导后杂交信号更强，表明MT启动子功能良好，pME表达正常．将人apoE基因组DNA用显微注射法导入小鼠受精卵雄性原核，再将胚胎移植入假孕母鼠输卵管内，仔鼠分娩四周后，自鼠尾提取DNA，鉴定人apoEDNA在小鼠染色体上的整合，最终得到有人apoE基因整合的转基因首建鼠．

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人癌细胞内质网分子伴侣Grp94基因近3′端的初步分析

陈澄,陈誉华,宋今丹

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 29-33.

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采用PCR及RT－PCR方法结合核酸分子杂交技术，首次确定了与Grp94cDNA2231～2500碱基片段对应的Grp94基因序列上有内含子．含有内含子的扩增片段长约708bP．对三种癌细胞系进行了PCR和RT－PCR反应，电泳结果显示存在差异．研究结果为进一步探讨Grp94基因3'端精细结构及其在正常细胞和肿瘤细胞中表达的改变打下了基础．

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大鼠肝脏脂酶基因的PCR扩增、序列分析和克隆

余瑞元

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 34-38.

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报导了应用聚合酶链式反应（PCR）技术，扩增大鼠肝脏脂酶基因及其克隆和序列分析的结果．经31个循环的扩增，得到大鼠肝脏脂酶及其N端结构域的cDNA，前者为1508bp的片段，后者为1076bp的片段．克隆后，对此二片段进行了限制性内切酶物理图谱分析，测定了DNA序列，并已将它们克隆到表达载体pGT－d中．

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肿瘤坏死因子α对大鼠成骨样细胞增殖与甲状旁腺素受体表达的影响

丁卫,马硕,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 39-42.

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大鼠成骨样细胞ROS17／2．8经肿瘤坏死因子α处理后，发现其c－myc，c－fos，c－jun等原癌基因mRNA的表达降低，细胞增殖明显受到抑制；同时，其PTH受体的表达以及PTH受体经刺激后引起的胞内cAMP的增加也受到抑制．提示TNFα可抑制大鼠成骨样细胞ROS17／2．8的增殖和分化．

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人胚肺二倍体成纤维细胞端区长度的代龄变化

张宗玉,范新青,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 43-45.

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以体外培养的不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）为实验对象，HeLa细胞为对照，分别观察其端区长度随代龄的变化．结果显示年轻2BS细胞（24代）端区长度约9．13kb；衰老2BS细胞（64代）端区长度约7kb，丢失约2kb．2BS细胞端区长度随代龄的增长而缩短．密度扫描结果显示细胞每复制一代，端区平均丢失50bp，而HeLa细胞的端区长度未因代龄而变化．

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p53基因对人胃癌细胞系恶性生长的影响

王培新,王新娟,高汉林

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 46-49.

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以p53cDNA为探针，用Southern印迹法对人胃癌细胞系BGC823进行了检测，发现该细胞中P53基因存在异常．将可在真核细胞表达的重组野生型P53质粒PC53一SN3和突变型P53质粒PC53—SCX3，用脂质体介导法，分别导入BGC823细胞，获得了较长时间耐受G418的多个阳性克隆．Southern印迹法证实阳性克隆细胞中有外源性P53基因存在．比较BGC823细胞，转染野生型及突变型P53质粒的3种细胞生长曲线和软琼脂集落形成状况发现，野生型P53基因对BGC823细胞恶性生长有一定抑制作用．

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博莱霉素同系物对癌基因表达的影响

杨铭,张礼和,臧传兵,叶潮,胡齐悦

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 50-53.

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应用快速酶联免疫法（ELISA）及Northern印迹杂交法研究了博莱霉素（BLM）同系物诱导癌基因表达的作用．通过检测P21和c－myc蛋白表达的改变和药物在RNA的转录水平上对癌基因表达的影响，证明BLM能够抑制c－myc基因的表达．这种抑制作用不仅发生在蛋白质的翻译水平，而且可能发生在RNA的转录水平上．BLMA6及A2对Ras基因亦有极显著的抑制，提示其亦为以p21蛋白为靶点的抗癌抗生素．A6、A2与A5之间的区别提示在同系物之间可能存在不同的抗癌机理

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水稻氨基酰化酶的分离纯化与性质分析

施华芳,黄伟达,李宏杰,孙崇荣

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 54-58.

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氨基酰化酶（N－acylamino－acidamidohydrolase或acylaseⅠ，EC3．5．1．14）是专一水解N-酰基化L-氨基酸的蛋白酶．从水稻黄化苗得到的抽提液，经过硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和阴离子交换层析三个步骤，纯化得到了该酶，比活达到100U／mg蛋白，在无还原剂存在的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显单一条带，分子量为40kD．而凝胶层析分析表明活性分子的分子量约90kD，因此可推测它的活性分子由两个亚基通过非共价键作用组合而成．进一步研究此酶的性质，在所测的五种乙酰化氨基酸中，最适底物为N-乙酰-L-甲硫氨酸．该酶的最适温度为50℃，最适pH为7．0～8．0．Co2＋和Zn2＋能增强酶活性，但烷基化试剂对酶活性没有影响，表明酶活性中心不含活化的巯基或羟基基因

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重组人肿瘤坏死因子纯化方法的探索

刘韧,汪江淮,王涛,田昆仑,刘萍

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 59-62.

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TNF是一种具有多种生物学作用的细胞因子，高纯度TNF的获得是进一步研究其作用机理和探讨防治方法的基础．对克隆后工程菌表达的纯化进行研究，经盐析。透析、离子交换等步骤，成功地制备了高纯度的rhTNF．经SDS－PAGE测定，分子量17kD，纯度＞95％，比活性为3．44×107U／mg，与国外同类产品相似．

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草鱼生长激素单抗免疫亲和柱的制备及初步应用

邓文涛,陈松林,贺路

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 63-66.

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用纯化的草鱼生长激素单克隆抗体偶联到CNBr活化的Sepharose4B凝胶上，制成约10ml的亲和层析柱．用该柱一步纯化了重组鲤鱼生长激素基因的表达产物．偶联有13．65mg单克隆抗体的亲和柱一次可纯化得到约0．7mg重组鲤鱼生长激素．酶联免疫受体测定表明它具有强烈的生物学活性，SDS－PAGE表明它为单一蛋白带，分子量约为22000．

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无色杆菌蛋白酶Ⅰ肽链N端作用的突变研究

张红缨,张今,李绍良,崎山文夫

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 67-72.

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无色杆菌蛋白酶Ⅰ（AchromobacterproteaseⅠ，APⅠ）是高度专一于赖氨酸的丝氨酸蛋白酶．比较其它典型同类蛋白酶的一级结构，该酶的成熟体肽键在N端和C端分别长出9个和26个氨基酸践基．在其N端设计和构建了一些突变体，它们分别具有缩短或延长的N端．这些突变体低于天然酶的活性和稳定性的结果揭示，N端这部分延长在稳定该酶的活性构象方面起着重要作用．

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无色杆菌蛋白酶Ⅰ突变体的结构与稳定性研究

张红缨,张今,李绍良,崎山文夫

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 73-78.

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报道了用定住诱变技术，改变无色杆菌蛋白酶Ⅰ的酶原加工位点，使其向左或向右移动，导致突变体成熟酶的肽链从N端延长或缩短若干氨基酸残基．所获突变体显示了低于野生酶的活性．突变体的园二色谱和荧光光谱研究表明，它们的结构发生了某些微小的改变．在不同的pH值、温度和不同浓度的SDS和盐酸胍条件下，也表现了低于天然酶的稳定性．在N端延长的突变体中，酶原加工位点越远离天然加工位点的突变体，显示了越低的活性和稳定性．缩短的突变体活性和稳定性最低．这些结果表明，天然成熟酶的N端可能比较靠近酶的活性中心，并参与构成活性中心附近的局部构象由此可见N端区在成熟酶的结构与功能方面的重要作用．

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大肠杆菌表达的重组细胞色素P-450nor的分离纯化

刘德立,HirofumiShoun

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 79-82.

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用DE－52纤维素柱色谱法和FPLC法（fastProteinliquidchromatography）分离纯化了大肠杆菌表达的重组缣孢菌细胞色素P－450nor（recombinant　fusariumoxvsporumcytochromeP－450nor，rF．P－450nor）．经梯度洗脱MonoQ纯化后的rF．P－450nor为单一色谱峰，比活达55．20U／mg，纯化倍数约为1100倍，SDSPAGE检测为单一谱带．

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甲状腺素及维甲酸对成骨样细胞甲状旁腺素受体的调节作用

杜国光,李平风,杨非易,顾文霞

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 83-86.

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研究了甲状腺素（T3／T4）及维甲酸（RA）对大鼠成骨样细胞ROS17／2．8细胞林甲状旁腺素（PTH）受体的调节作用．实验结果表明：细胞经T3／T4处理后，可显著增高PTH受体结合率及碱性磷酸酶活性，以及PTH受体mRNA的表达．细胞经RA处理后，则相反地降低PTH受体结合率及碱性磷酸酶活性．

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GM_1激活环核苷酸磷酸二酯酶的作用

刘飞,黄树模,徐慧君

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 87-90.

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神经节苷脂GM1能激活CaM依赖性环核苷酸磷酸二酯酶，其AC50为1．56μg／ml．这种作用并不一定依赖Ca2＋的存在．在有Ca2＋存在时，GM1对PDE的最大激活活性低于CaM，仅为CaM的80．4％；没有Ca2＋存在时，GM1与CaM对PDE有同样的最大激活活性（100％）．GM1能使CaM对PDE的激活曲线左移，AC50降低，但不改变CaM对PDE的最大激活活性．三氟啦嗪能使GM1激活的PDE的活性降低，其IC50为16．3μmol／L．

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锌_7-与镉_7-金属硫蛋白对羟自由基损伤大鼠红细胞膜保护作用的比较

葛淑君,程时

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 91-94.

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用电子自旋共振自旋标记物氮氧自由基硬脂酸和马来酰亚胺标记大鼠红细胞膜脂和膜蛋白，测定膜脂流动性和膜蛋白构象改变，以硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化产物丙二醛含量．结果表明，锌7-与镉7-金属硫蛋白对羟自由基引起的膜脂流动性减低、脂质过氧化反应增强双膜蛋白构象改变有明显抑制作用，而且，前者的作用明显强于后者．

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ADPRT抑制剂对不同辐射敏感性人肿瘤细胞株的作用比较

杨素红,项晓琼,周平坤,夏寿萱

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 95-98.

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从细胞的克隆形成能力和细胞DNA双链断裂及修复几方面分析了两个人卵巢癌细胞株HOC8和A2780对电离辐射的敏感性并探讨了ADP-核糖基转移酶（ADPR）的特异性抑制剂3-氨基苯甲酰胺（3－AB）对二者的辐射增敏效应，结果表明A2780细胞的辐射敏感性大大高于HOC8细胞，其D0值分别为0．9和2．5Gy；γ射线所致两株细胞的初始DNA双链断裂水平没有显著差异，但A2780细胞对DNA双链断裂的修复能力比HOC8细胞低．3AB能降低受照细胞的克隆形成能力及细胞对双链断裂的修复能力，其中对HOC8细胞的作用更为明显．

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短裙竹荪多糖Dd-S3P的分离纯化及其性质研究

林玉满

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 99-102.

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短裙竹荪子实体经2％Na2CO3溶液提取，用蛋白酶法和Sevag法相结合除去蛋白，乙醇分级沉淀，级分3经DEAE－SephadexA－25柱层析纯化得到短裙竹蒸蒸荪多糖DdS3P．经测定该多糖为均一组分，分子量约为3．8×105，红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰，含有α-型糖苷连接键，紫外扫描无核酸和蛋白质的特征吸收峰．纸层析和气相层析分析得知Dd－S3P含有D-葡萄糖（D－Glc）、D-甘露糖（D－Man）和D-木糖（D－Xyl），其摩尔比为1．83：1．00：1．21．经动物试验表明此多糖对小鼠S-180有一定的抑制作用，抑瘤率约31．3％．

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黄腐酸引发软骨细胞产生过氧化氢及硒的抑制作用

郭平,许君辉,常淑云,许善锦,王夔

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 103-107.

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为探讨黄腐酸（FA）能否直接刺激软骨细胞产生活性氧以及硒能否抑制由此产生的活性氧，采用二氯荧光素双酯（DCFH－DA）作为软骨细胞产生过氧化氢的探针，用流式细胞技术定量地检测了在FA作用下软骨细胞产生的过氧化氢，并同时检测了硒存在时的过氧化氢含量．发现FA不但能够刺激软骨细胞产生过氧化氢（P＜0．05），并与FA浓度相关，随FA浓度增大，产生过氧化氢增多，当FA浓度为100mg／L时软骨细胞产生过氧化氢达到最大，之后再增大FA浓度，过氧化氢的产生量减少；硒的存在对FA刺激软骨细胞产生过氧化氢有抑制作用．

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稀土离子对磷脂酰胆碱脂质体及人红细胞膜自由基氧化的影响

王小芳,杨晓达,刘湘陶

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 108-112.

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通过荧光和电泳方法研究了稀土离子对磷脂酰胆碱（PC）脂质体及人红细胞膜脂质过氧化的影响．结果表明稀土离子（除钇外）都能够强烈的抑制膜的脂质过氧化，其作用强度随不同的稀土离子可有较大的差别．稀土离子对分离的人红细胞膜的脂质过氧化的抑制作用比对PC脂质体更强．但是，对完整红细胞用稀土离子处理反而会导致膜的脂质过氧化大大加强．

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离子对反相HPLC测定人红细胞PRPP合成酶活性

彭岚,卢义钦,刘俊凡

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 113-115.

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PCR-SSCP分析结合直接测序检测β-地中海贫血患者基因突变型

蔡辉国,吴志奎,陈佩贞,黄有文,王荣新

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 116-118.

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极低密度脂蛋白对巨噬细胞载脂蛋白E基因表达的调节

从容,冯友梅,宗义强,张建明,屈伸,邓耀祖

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 119-121.

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利用钙调素对乳酸脱氢酶活性影响定量测定钙调素

杜国忠,赵宝昌

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(01): 122-124.

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