中国生物化学与分子生物学报

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田小利，刘红，陈兰英，方福德

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 499-503.

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将注射２４ｋｂ小鼠肾素－２（Ｒｅｎ－２）基因的４２５枚受精卵再植于２２只假孕大鼠输卵管内（每只约２０枚）。怀孕的１６只母鼠共生得子代鼠９７只，用ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术对存活的６０只子代鼠进行鉴定，发现有两只大鼠携带Ｒｅｎ－２基因。此两只转基因大鼠整合外源基因的拷贝数约为１～２个，血压均未见升高。

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用重组痘苗病毒表达pGHcDNA的研究

路丹红，朱宝利，周顺伍，齐顺章

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 504-509.

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构建了含有ｐＧＨｃＤＮＡ的重组痘苗病毒，用ＥＬＩＳＡ证明该重组病毒在被感染的ｈ１４３细胞中，可表达出猪生长激素并将之分泌到培养基中，表达量约为１．０５μｇ／１０￣６细胞（２４ｈ）。用定位免疫化学法进一步证明该病毒可感染小鼠并在小鼠体内表达ｐＧＨｃＤＮＡ。同时还构建了含双拷贝ｐＧＨｃＤＮＡ的重组痘苗病毒，并证明其ｐＧＨ表达量比单拷贝重组病毒有明显提高，约为１．５０μｇ／１０￣６细胞（２４ｈ）。

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hBMP－2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达

赵明，王会信，刘莉，周廷冲

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 510-515.

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研究了骨形态发生蛋白ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ在ＣＯＳ细胞和小鼠肌肉中的表达的情况，从ｐＳＰＳ６５ＢＭＰ－２质粒中回收ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ，删除５＇端的非翻译序列，插入ｐＳＶＬ载体中，构建了含有ＢＭＰ－２全长编码序列的重组表达质粒ｐＳＶＬＢＭＰ－２。将表达质粒导入ＣＯＳ－７细胞中，细胞ＲＮＡ点杂交结果表明，转染ＢＭＰ－２基因的细胞内ＢＭＰ－２的ｍＲＮＡ水平明显升高；细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ显示，转染ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ后，细胞分泌产生的ＢＭＰ－２显著增加。小鼠实验发现，在肌肉内用注射法导入ＢＭＰ－２重组质粒后，局部组织内ＢＭＰ－２的ｍＲＮＡ转录水平也明显提高。

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鸡AChRγ亚基基因远端E盒子与myogenin的相互作用

肖国芝，贾弘，张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 516-520.

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业已证明，鸡ｎＡｃｈＲγ亚基基因５＇连接区，－５０９／－３０２，－３２４／＋３６片段可独立激活异源启动子ＳＶ４０的转录活性；γ基因近端两个Ｅ盒子（ＣＡＮＮＴＧ）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用及转录激活分析表明，近端两个Ｅ盒于是γ启动子活性必不可少的，但却是不充分的。利用胶阻滞和ＤＮａｓｅⅠ足纹试验观察了鸡ｎＡｃｂＲγ基因远端Ｅ盒子与ＧＳＴ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ融合蛋白的相互作用。胶阻滞试验证明，－５３８／－２８８片段可与ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互结合，引起（３２）￣ｐ标记的ＤＮＡ片段在ＰＡＧＥ中迁移率减慢，这种胶阻滞现象可被含Ｅ盒子的未标记片段消除，并被抗鸡ｍｙｏｇｅｎｉｎ单克隆抗体或抗血清所改变。ＤＮａｓｅⅠ足纹试验证明，ｍｙｏｇｅｎｉｎ系通过γ基因转录起始点上游－４２９／－４２４及－４６３／－４５８两个Ｅ盒子与γ基因５＇连接区－５３８／－２８８相互作用。

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鸡AChRγ亚基基因远上游增强子样作用依赖生肌因子

肖国芝，贾弘，张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 521-524.

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先前曾报告鸡ＡＣｈＲγ亚基基因５＇连接区－５３８／－２８８片段（含一对Ｅ盒子）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用，为进一步观察ＤＮＡ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互作用对γ基因转录激活功能的影响，利用瞬时表达体系研究了鸡ｎＡＣｈＲγ亚基基因５＇端－５３８／－２８８片段调控机能。ＣＡＴ分析表明：γ基因－５３８／－２８８片段可显著激活ｔｋ启动子在分化的Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性，但不能激活在未分化Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性。这种组织特异性转录激活作用与距离无关，因而是一个典型的增强子；－５３８／－２８８片段的增强子样作用既依赖于两毗邻Ｅ盒子的完整性，又依赖于ｍｙｏｇｅｎｉｎ等生肌调节因子的存在。强化表达ｍｙｏｇｅｎｉｎ可激活ｐＢＬＣＡＴ２－γ（－５３８／－４３３）和ｐＢＬＣＡＴ２－γ（－４３２／－２８８）（各含一个Ｅ盒子）在分化肌细胞中的表达，究竟是克隆片段中的独立Ｅ盒子对这种表达起贡献还是出现在克隆位点附近的反向Ｅ盒子（ＧＴＣＧＡＣ）或ｔｋ启动子中的另一个Ｅ盆子起作用？尚不十分清楚。

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正常的和转化的C3H小鼠胚胎成纤维细胞neu基因结构的初步研究

李滨，彭勇，童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 525-528.

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应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术并结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交从基因水平对正常和￣３Ｈ－ＴｄＲ恶性转化小鼠胚胎成纤维细胞ＮＣ３Ｈ１０和ＴＣ３Ｈ１０中ｎｅｕ基因进行研究。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交结果表明恶性转化的ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因出现重排和扩增，ＳＳＣＰ分析未发现ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因跨膜区突变。上述结果说明ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因结构异常可能在跨膜区外，ｎｅｕ基因异常在￣３Ｈ－ＴｄＲ诱导的细胞恶性转化过程中可能有重要的作用，ＥＧＦ可促进ｎｅｕ基因表达增高，研究发现在ＥＧＦ持续作用下，ＮＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因甲基化水平无显著变化，说明ＥＧＦ可能是通过其它途径调控ｎｅｕ基因表达增高的，排除了ＥＧＦ通过改变ｎｅｕ基因甲基化水平而调控ｎｅｕ基因表达的可能性。

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表皮生长因子对游离细胞核特异基因体外转录的影响

李建义，童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 529-534.

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ＥＧＦ作用于ＮＣ３Ｈ１０和ＴＣ３Ｈ１０细胞核，对ＲＮＡ聚合酶Ⅱ有促进作用，但对ＲＮＡ聚合酶Ⅰ和酶Ⅲ没有影响，此外还发现转化细胞核内的ＲＮＡ聚合酶Ⅰ和酶Ⅱ的活性比正常细胞高１倍多。但两种细胞的ＲＮＡ聚合酶Ⅱ差别不大。同时，以非放射性标记的ｃ－ｆｏｓ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ３探针进行点杂交，结果发现，ＥＧＦ直接作用于细胞核可使ｃ－ｆｏｓ、ＣＬＮ１基因的转录水平提高；但是，对ＣＬＮ３无影响。

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人白介素6受体功能区片段在E．coli中的表达

段聚宝，王嘉玺，邹民吉，王利红，马贤凯

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 535-540.

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通过ＤＮＡ体外重组技术，以ｐＥＴ－３ｂ为表达载体，构建了重组表达质粒ｐＥＴ－６Ｒ（Ｂ）和ＰＥＴ－６Ｒ（Ｂ）４，分别编码２８ｋＤ的ｈＩＬ－６Ｒ配基结合区片段及其５３ｋＤ的二联体蛋白，并为酶切分析和ＤＮＡ序列分析所证实。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，含有重组表达质粒的菌株可分别表达出２８ｋＤ的蛋白ｒＩＬ６Ｒ－２８和５３ｋＤ的ｒＩＬ６Ｒ－５３。重组蛋白分别占菌体总蛋白的４５％和２９％左右。重组蛋白主要以包涵体形式存在，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明重组蛋白具有ＩＬ－６Ｒ的抗原性。

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DNA修复基因RAD_（24）的分子克隆和序列分析

朱应葆

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 541-550.

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利用缺口修复（ｇａｐｒｅｐａｉｒ）方法克隆啤酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）野生型ＲＡＤ_（２４）基因，并将其亚克隆到Ｍ１３ｍｐ１８和Ｍ１３ｍｐ１９，用双脱氧末端终止法对该基因的两条链均进行了序列测定。ＤＮＡＳｔｒｉｄｅｒ程序分析显示该基因编码２６８个氨基酸的蛋白质；基因缺失试验表明，该基因为细胞生存所必需。

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GSTs同工酶基因在乳腺癌中的扩增与基因的表达

周江，齐春会，徐元基，郭山春，陆雅芬，李春海

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 551-556.

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采用ＤＮＡ和ＲＮＡ的斑点杂交分析方法，对３２例乳腺癌和相应的癌旁正常组织中ＧＳＴ－π、ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ基因的ＤＮＡ扩增和ＲＮＡ转录表达情况进行研究，发现ＧＳＴ－π在乳腺癌中存在基因扩增和明显的ｍＲＮＡ表达升高，ＧＳＴ－π基因表达调控主要在转录水平进行的；ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ在乳腺癌中表达水平较低，但仍可见α和μ类ＧＳＴ同工酶ｍＲＮＡ转录在肿瘤和正常组织中发生了较大的变化。结合乳腺癌中雌激素受体（ＥＲ）表达情况还发现ＧＳＴ－π表达水平与ＥＲ的表达存在负相关性。

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外源性GM_3／GD_3对人肝癌培养细胞原癌基因表达的研究

何伟，刘银坤，张夏英，宋家

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 557-559.

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应用原位分子杂交技术及细胞图象分析证实了人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１细胞经１０μｇ／ｍｌ的ＧＭ_３／ＧＤ_３处理后，ＧＤ_３处理组细胞内Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号弥漫分布于整个细胞，而经ＧＭ_３处理组和对照组阳性信号集中于核膜。ＧＭ_３／ＧＤ_３处理组及对照组ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号均集中于核膜，但ＧＭ_３处理组信号强度最大。上述结果提示，ＧＤ_３可使某些肿瘤细胞向更加恶性的方向发展，而ＧＭ_３则可使某些肿瘤细胞向正常方向转化。

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天花粉蛋白小结构域N端同源片段的溶液构象：T18肽的圆二色性和荧光研究

胡红雨，鲁子贤，杜雨苍

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 560-566.

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应用圆二色性，内源荧光和疏水荧光探针法进一步研究Ｔｌ８肽的溶液构象及其相互转化。发现Ｔ１８肽在水溶液中为β折叠结构，且在高浓度（＞１ｍｇ／ｍｌ）时形成疏水聚合物；Ｌｙｓ１５和Ｉｌｅ３－Ｉｌｅ４是形成β折叠疏水簇的关键因素。并讨论了蛋白质肽链和溶剂环境对肽段二级结构的调制作用。

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红花菜豆（矮生红花变种）凝集素的生物学作用

施炜星，孙册

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 567-573.

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红花菜豆（矮生红花变种，Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｃｏｃｃｉｎｅｕｓｖａｒ．ｒｕｂｒｏｎａｎｕｓ）凝集素（ＰＣＬ）识别高甘露糖型寡糖并与之结合，它的生物学作用都与其糖结合专一性有关。ＰＣＬ的血凝作用不显示供血动物专一性和和血型专一性。ＰＣＬ除凝集红细胞外亦凝集动物其它细胞，如小鼠脾细胞、人精细胞及某些肿瘤细胞如黑色素瘤细胞Ｍ２１、胄癌细胞等。此外ＰＣＬ亦凝集某些微生物如野生型和Ｈ．Ｂ．１０１大肠杆菌以及面包酵母。ＰＣＬ具有促细胞分裂作用，使小鼠脾细胞和人外周血淋巴细胞转化的ＰＣＬ的最低浓度为２５０μｇ／Ｌ。ＰＣＬ能抑制某些癌瘤细胞的生长，在测试的几种细胞中，对人黑色素瘤细胞Ｍ２１生长的抑制较为明显。ＰＣＬ亦能抑制野生型大肠杆菌和面包酵母的生长，ＰＣＬ的细胞凝集、促淋巴细胞转化和抑制细胞生长的作用，都是首先通过它的糖结合部位与细胞表面的糖基结合导致的。

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天花粉凝集素的固定化及其应用

孙建忠，王克夷

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 574-579.

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制备了天花粉凝集素ＴＫＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ的亲和柱，用来分离其它来源物质中与ＴＫＬ相互作用的糖复合物，发现从兔红细胞的血影细胞的抽提物中可以得到分子量为６２ｋＤ，４０ｋＤ等糖蛋白，这可能就是ＴＫＬ凝集兔红细胞的分子基础。从人及骆驼、绵羊血浆中也能得到与ＴＫＬ结合的、分子量不等的糖蛋白，进一步鉴定人血浆ＴＫＬ结合物中含有α＿１－抗胰蛋白酶等，为从血浆中分离这些糖蛋白提供了较为便利的方法。在寻找天花粉植物体内此凝集素的内源受体时，探讨了它可能的生理功能。

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细胞色素c在氨基酸及二肽修饰金电极上的电化学反应

曲晓刚，于秀娟，周成立，陆天虹，董绍俊

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 580-583.

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系统地研究了细胞色素ｃ在多种氨基酸和多肽修饰电极上的电化学反应。并对影响加速细胞色素ｃ电化学反应的因素进行了讨论。

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PKC、PKA和TPK在血小板激活中的作用

陈日炎，江黎明，覃燕梅，梁念慈

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 584-588.

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利用~（３２）Ｐ－ＮａＨ_２ＰＯ_４标记猪血小板，然后以ＰＭＡ、凝血酶、ＰＧＥ_１、腺苷等处理，结果表明，随着ＰＭＡ激活ＰＫＣ，血小板发生聚集。３５μｍｏｌ／ＬＰＧＥ_１或１ｍｍｏｌ／ＬｄｂｃＡＭＰ不能抑制５０ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的血小板聚集，腺苷却能抑制ＰＭＡ诱导的血小板聚集（ＥＣ_（５０）＝０．１ｍｍｏｌ／Ｌ），ｄｂ－ｃＡＭＰ、腺苷都不能抑制１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的４０ｋＤ蛋白磷酸化。ＰＫＡ激活不能抑制ＰＭＡ激活的ＰＫＣ。在ＰＭＡ、凝血酶激活的血小板中，ＰＫＣ、ＴＰＫ都发生激活，４０ｋＤ底物既是ＰＫＣ的底物又是ＴＰＫ的底物，ＰＫＣ和ＴＰＫ在血小板聚集中起着重要的调节作用。

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人胎盘催乳素多型性研究

房金波，孙立群，麦荫乔

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 589-592.

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通过纯化和分析人胎盘催乳素，发现其有两个等电点，与文献报道不一致，利用等电聚焦制备电泳分离了两个等电点组分。免疫学活性测定的结果表明，两个组分均有活性，且活性有差别，等电点高的组分，免疫学活性强。通过Ｎ端氨基酸分析发现，两组分的Ｎ端均为缬氨酸。推测人胎盘催乳素存在亚型，为进一步研究人胎盘催乳素的结构和功能以及临床上正确地利用此激素提供了有价值的依据。

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线粒体呼吸链复合体Ⅱ＋Ⅲ的电子传递与质子转移的偶联

魏影允，焦选茂，刘树森

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 593-599.

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研究了鼠肝线粒体内膜体呼吸链复合体Ⅱ＋Ⅲ的Ｈ~＋／２ｅ比与Δψ的相关性及其调节因素。证明：（１）用光谱法测得复合体Ⅱ＋Ⅲ的电子传递与质子转移初速度的Ｈ~＋／２ｅ比值接近４，与铁氰化钾脉冲法测得的结果相同。Ｈ~＋／２ｅ随着ΔμＨ~＋升高而逐渐下降。荧光透析法测定不同Ｆｅ~（３＋）还原速率建立的不同Δψ时，证明Ｈ~＋回漏对Δψ和Ｈ~＋泵出速度的依赖性。讨论了呼吸链复合体Ⅱ＋Ⅲ电子传递与质子转移之间的偶联以及“Ｒｅｄｏｘｓｌｉｐ”和“ｐｒｏｔｏｎｌｅａｋ”的现象。（２）抑制剂实验说明线粒体内膜中Ｃａ~（２＋）、Ｐｉ与Ｈ~＋的协同运输系统对线粒体内膜Ｈ~＋泵出及Ｈ~＋回漏作用有一定的调控作用。

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无花果蛋白酶在阴离子交换树脂上的固定化

刘德富，董文彦，白虹，张东平，黄春莉，伍惠玲，胡文卫

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 600-603.

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无花果蛋白酶通过８％戊二醛活化载体，共价结合到聚苯乙烯阴离子交换树脂ＧＭ２０１上，固定化作用在ｐＨ７．７，酶浓度０．８ｍｇ／ｇ树脂，４℃下进行６ｈ。得到的固定化酶表观Ｋ_ｍ值（酪蛋白，１．１１×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）小于溶液酶Ｋ_ｍ值（１．９６×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）；固定化酶活性在ｐＨ６～８保持稳定，溶液酶最适ｐＨ为７．２；固定化酶最适温度由溶液酶的５０～６０℃移至３７℃；固定化酶２５℃保持７ｄ，重复水解酪蛋白７次后，保留８３．３％活性。固定化酶对酪蛋白水解度达４７．５％，对大豆球蛋白达１１．６％。

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重组PAI－1对u－PA抑制活性的研究

隋广超，孙红，胡美浩

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 604-608.

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利用大肠杆菌表达的重组纤溶酶原激活物抑制因子－１（ｒＰＡＩ－１）具有许多与天然ＰＡＩ－１相同的性质，ｒＰＡＩ－１对ｕ－ＰＡ抑制活性研究的内容包括：几种化学物质（盐酸胍、尿素、硫氰酸钾、ＳＤＳ、氯化钠等）对ｒＰＡＩ－１的激活作用、盐酸胍激活ｒＰＡＩ－１的浓度与温度效应、显色底物法和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纤维蛋白自显影对ｒＰＡＩ－１活性的测定、活性态ｒＰＡＩ－１向潜状态的转变及其与盐浓度和ｐＨ值的关系。

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博安霉素与DNA相互作用的分子机理研究

杨铭，朱树梅，刘洁，张礼和，许鸿章

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 609-614.

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通过光谱分析、粘度测定及~１ＨＮＭＲ研究证实：博安霉素（ＢｌｅｏｍｙｃｉｎＡ_６，ＢＬＭＡ_６）是通过双噻唑基嵌插入碱基对之间与ＤＮＡ结合的。同时测定了ＢＬＭＡ_６与ＤＮＡ的结合常数、结合位点数并与博莱霉素Ａ_２（ＢＬＭＡ_２）、Ａ_５（ＢＬＭＡ_５）进行了比较，证实了末端胺基对ＢＬＭＡ_６与ＤＮＡ结合的贡献，琼脂糖凝胶电泳对ＢＬＭＡ_６及其Ｃｕ（Ⅱ）、Ｆｅ（Ⅱ）络合物断裂ＤＮＡ的研究表明，在ＤＮＡ断裂中某种氧自由基的存在及金属螯合部位与ＤＮＡ嵌插部位之间的相互影响，对于ＢＬＭＡ_６及同系物对小鼠肺毒性的差异与不同尾链结构的关系进行了探讨。

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长循环脂质体的研究

张俊梅，杨红，侯新朴

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 615-618.

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将ＰＥＧｓ（聚乙二醇单甲醚的衍生物）掺入脂质体，研究了该类脂质体在血清诱导下的体外稳定性及其经静脉注入鼠体后的体内分布。结果表明，该类脂质体在体外的稳定性明显提高，在血循环中的滞留时间也相应延长。也就是说，ＰＥＧｓ脂质体是一种长循环脂质体。

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用PT－PCR法从U937细胞系克隆CD44H的cDNA

罗振革，高杰英，孔祥英，苏新，朱锡华

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 619-621.

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用ＰＴ－ＰＣＲ法从Ｕ９３７细胞系克隆ＣＤ４４Ｈ的ｃＤＮＡ罗振革，高杰英，孔祥英，苏新，朱锡华（军事医学科学院微生物流行病研究所，北京１００８５０）（第三军医大学免疫教研室，重庆６３００３８）ＣＤ４４是分布于多种细胞表面的糖蛋白分子，属粘附分子的成员，...

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在有机介质中用固定化木瓜蛋白酶合成生物活性短肽的研究

王旭，张学忠，陈松明，吴晓霞，李建军

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(05): 622-624.

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在有机介质中用固定化木瓜蛋白酶合成生物活性短肽的研究王旭，张学忠，陈松明，吴晓霞，李建军（吉林大学酶工程国家重点实验室，长春１３００２３）近年来，利用酶法合成多肽的方法由于与化学法和基因工程法比较有诸多优点，而越来越引起人们的重视，并进行了大量研究。...

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