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  • 1994年, 10卷, 第01期
    刊出日期:1994-02-20
      

    论文

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    论文
  • 颜青,林青松,黄守勤,颜思旭
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 3-6.
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    本文研究无花果蛋白酶(EC.3.4.4.12)在不同浓度盐酸胍溶液中分子构象与活力变化关系。酶的内源荧光光谱,圆二色光谱与酶活力的变化表明:荧光光谱呈现二个明显的变化区域,低浓度胍(低于2mol/L)中,荧光发射峰基本不变,但荧光强度随胍浓度上升,随胍浓度断续增大(高于2mol/L),酶的最大发射波长明显红移。当胍浓度低于1mol/L时,不仅不会使酶失活,反而使酶激活,当胍浓度高于1mol/L以上时,酶逐渐失活,使酶完全失活的胍浓度为6mol/L酶的圆二色光谱也随着胍浓度的改变而发生复杂的变化。将荧光变化,CD谱变化及活力改变结合起来,表明活力的激活与构象的明显变化似是同步发生的,从另一角度进一步说明酶活性部位柔性是充分表现酶活力所必需。
  • 陈文玲,刘峰,林永齐
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 7-10.
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    本文研究了辣根过氧化物酶[EC1.11.1.7]同工酶的联苯胺动力学。结果表明:其酸性酶和碱性酶的最适pH均为5.8左右。二者最适有机溶剂浓度略有差异:酸性酶最适乙醇浓度为50%,最适二氧六环浓度为40%;而碱性酶则分别为60%和50%。在水溶剂中,酸性酶为米氏酶,碱性酶为正协同的别构酶;在有机溶剂(如:乙醇、二氧六环)中,酸性酶为正协同的别构酶,碱性酶则仍为正协同的别构酶。即有机溶剂可能使酶构象发生变化。
  • 傅旭春,蒋惠娣,刘志强
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 11-15.
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    对氨基二苯醚类化合物是结构色素P450(P450)的一种准不可逆抑制剂。本文测定了17种这类化合物生成P450代谢中间体络合物的活性和抑制P450催化氧化氨基比林脱甲基的活性。用逐步多元回归分析法导出了这两种活性与Hansch理化参数或分子轨道指数之间的定量结构与活性关系(QSAR)。结果表明:这两种活性都与取代基的脂溶性参数之(Σπ)和间位的立体性参数Es(3′)等Hansch理化参数或最低未占据分子轨道级(ELUMO)和原子净电荷的绝对值之和(ΣQ)等分子轨道指数相关;生成P450代谢中间体络合物的活性还与取代基的电性参数之和(Σσ)和邻位和立体性参数(Es(2′)相关。两种活性之间存在很好的相关性。
  • 何忠效,王治平,王秀奇,马晴,吴志奎
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 16-20.
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    本文比较了不同年龄的鼠肝DNA甲基化酶活力及DNA甲基化水平,发现它们均与鼠龄呈反相关。又以不同年龄的鼠肝DNA为模板,检验了其体外转录活力,发现其与鼠龄呈正相关。
  • 孙士勇,张乃蘅
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 21-24.
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    本文利用Northern印迹分析技术研究了完全致癌物二甲基苯蒽(DMBA)对小鼠表皮鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA和转化生长因子β(TGF-β)mRNA水平的影响。DMBA在15μg和900μg剂量下一次涂用于小鼠皮肤,可使表皮ODCmRNA和TGF-βmRNA表达增加。ODCmRNA为单一的2.0kb大小的条带,其表达在在36h时最为明显。而TGF-βmRNA大小为2.5kb和1.9kb,其表达在36h时最高,到48h几乎降至正常,但在72h又有增加。ODC和TGF-β可能在DMBA诱癌过程中起重要作用。
  • 樊艾,张宗玉
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 25-29.
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    本文以0.35mol/LKCl抽提不同年龄鼠肝细胞,将抽提后细胞核分别与抽提物、纯化的染色质高迁移率非组蛋白(HMG)及组蛋白H1进行重组。结果发现,0.35mol/LKCl抽提后老年鼠肝细胞与断乳鼠肝细胞核抽提物重组转录活性高于其与自身或青年鼠肝细胞核抽提液重组者。还发现高迁移率非组蛋白可提高抽提后鼠肝细胞核转录活性,对断乳鼠的作用最强;但不影响未经抽提的细胞核转录活性。相反,组蛋白H1则可抑制各年龄组鼠肝细胞核的转录活性。
  • 汤乃梅,孙士勇,柯碧波,张敏,陈伯荣,徐军,汤健,唐朝枢,周爱儒
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 30-33.
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    本文应用Northernblot杂交技术,观察了转化生长因子β基因在家兔动脉粥样硬化斑块、自发性高血压大鼠心肌组织和血管平滑肌细胞中的表达。结果表明,转化生长因子β基因在上述组织和细胞中的表达均明显增加,血管紧张素Ⅱ可以促进血管平滑肌细胞中转化生长因子β基因的表达,揭示转化生长因子β可能在心血管疾病发病过程中起作用。
  • 丁皓,吴晓俐,孙幼华,周兴华,朱运松,宋后燕
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 34-39.
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    本文报道用抗PAI-1单克隆抗体(McAb)亲和层析建立了纯化PAI-1的简便方法。经免疫亲和层析,SephacrylS200凝胶过滤,从HepG2细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的PAI-1,回收率为84%,PAI-1比活性6.1×104IU/mg。糖基化PAI-1分子量为50kD,比活性5.8×104IU/mg。非糖基化PAI-1分子量43kD,占总PAI-130%,仍具有PAI-1活性。用ConA-Sepharose亲和层析进一步纯化得到SDS-PAGE纯的糖基化PAI-1。
  • 张淑琴,周立惟,黄庭光
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 40-44.
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    人妊娠5-8周的胎盘绒毛经匀浆后,用2mo1/Lurea-PBS提取,通过Heparin-Sepharose4B亲和柱层析,再经SepharoseCL-6B凝胶过滤层析,得到人早期胎盘纤维连接蛋白(earlyplacentafibronectin,epFN)。经还原及非还原SDS-PAGE和免疫印迹电泳分析,epFN分子量约500kD,是由两个250kD亚基组成,与人足月胎盘纤维连接蛋白(termplacentafibronectin,简称tpFN)相似,而大于人血浆纤维连接蛋白(plasmafibronectin,pFN)。epFN与抗人pFN抗体及抗人羊水纤维连接蛋白(amnioticfluidfibronectin,简称amFN)的三个主要功能区单抗均可发生反应。与五种植物凝集素结合力实验表明,epFN在糖基组成上与pFN和tpFN均不相同。
  • 李晓楠,卢鼎厚
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 45-49.
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    本文提取人骨骼肌α辅肌动蛋白(α-actinin)是综合了文献报导有关提取兔肌α-actinin的和提取鸡胗α-actinin的方法,稍加修改而确定的。用Hasselbach-Schneider缓冲液提取骨骼肌中的肌球蛋白后,将残余物经硼酸-缓冲液提取、匀浆及高速离心去掉肌动蛋白和肌原纤维的其它成份,上清加硫酸铵至30%,35%饱合度所得的沉淀用220mmol/LTris-乙酸溶解、透析、离心后经DE-52柱层析可得电泳纯。α-actinin。将人骨骼肌α-actinin纯化制品免疫了三只大耳白纯种家兔,两个多月后,三只兔子都产生免抗人骨骼肌α-actinin的特异抗血清,用双向免疫扩散法和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定,产生的抗体效价较高,用双扩散法测定效价为1:32,用ELISA测定,用比率法判断结果,效价最高者为1:100,000左右,经免疫电镜观察结果证实,上述抗血清可以满足进一步实验要求。
  • 张昌敬,陈朝碧,林光平
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 50-54.
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    本文报告了从猪肺中用改进后的碱性氯化钠盐解法萃取的粗肝素为原料,以新型分离材料DEAE-Sephacel分离纯化,并与SephadexG-50进行比较,前者使粗肝素比活由13.9USP/mg提高到203.64USP/mg(美国药典单位),纯化系数达到14.65,回收率达86.93%,而通过SephadexG-50分离纯化后的肺肝素其比活性提高到102.10USP/mg,纯化系数为7.35,回收率为72.22%,其比活性、总活性回收率及纯化系数等,DEAE-Sephacel均优于SephadexG-50。纯化相当量粗肝素所需时间、次数亦大大减少,并用醋酸纤维薄膜电泳,高效液相色谱进行性质和纯化鉴定,用红外光谱进行基团分析鉴定。
  • 黄才,梁念慈
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 55-57.
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    本文合成了一种聚脯氨酸亲和层析凝胶,并用这种凝胶纯化了猪血小板外廓蛋白。纯化的外廓蛋白在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一蛋白带,分子量14kD;在体外能显著抑制肌动蛋白聚合。
  • 王克维,贾维红,张家萍,张昌颖
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 58-63.
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    本文动态观察了用平阳霉素诱发的大鼠白内障晶体中与谷胱甘肽代谢相关酶类活性和微量元素水平的变化,并与正常晶体进行比较,同时就酶活性与微量元素水平的相关性进行了检验。结果表明:(1)注射平阳霉素早期酶活性增高,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GSSG-R)及超氧化物歧化酶(SOD)等活性的升高达显著水平,后期酶活性均下降,尤以GSH-Px、GSSG-R和谷胱甘肽硫转移酶(GSH-S)等的活性降低明显;(2)GSH-Px和SOD酶活性分别与Zn具有相关性(P<0.05),这两种酶也分别与Se具有高度相关性(P<0.01),此两种元素在该类型白内障形成中可能有一定意义。
  • 顾利群,刘士辉,熊凌霜,黄培堂
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 64-69.
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    序列分析中发现tPAK2编码区结构基因中存在一段反转重复序列,富含G、C。利用计算机预测tPAmRNA二级结构证明tPAmRNA在此处可以形成△Gm=-25.5KCal/mol的发夹结构。本研究利用定点突变技术消除了这段反转重复序列,在大肠杆菌中进行了消除前后tPA转录和翻译水平的比较。结果表明消除之后,细菌总RNA中tPA特异mRNA含量减少,细菌表达产物中tPA蛋白占破菌沉淀物的百分比却基本不变。提示大肠杆菌中基因编码区mRNA二级结构一般不构成转录的终止,但有利于mRNA的稳定性,对翻译表达无影响。
  • 王保生,高山,王晓娟,王敏,陈卫东,贾佩臣,陈松森,梁植权,曲绍绅
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 70-75.
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    以聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定了331例辽宁满族新生儿脐带血血红蛋白F中Gγ/Aγ比值。结果显示:高Gγ(>80%)者4例,占1.21%,其基因频率(f)为0.00604,低Gγ(30-48%)者6例,占1.81%,其基因频率为0.00906,其余正常,Gγ平均值为65.23±6.38%。未发现AγT链。对其中八例异常者(4例高Gγ值,4例低Gγ值)的染色体DNA进行了基因图谱分析,确定4例高Gγ值者基因型有两种:Gγ-Gγ/Gγ-Aγ二例,Gγ-AGγ-Aγ/Gγ-Aγ二例;4例低Gγ值者基因型有二种,分别为:Aγ-Aγ/Gγ-Aγ二例和-GAγ/Gγ-Aγ二例。其中Aγ-Aγ基因型在中国人群中未见报道过。
  • 陈颖,黄立信,曹惠婷,施溥涛
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 76-80.
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    用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽CGRP五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为:CGRP-1(24-37);CGRP-2(14-37);CGRP-3(9-23);CGRP-4(1-23)和CGRP-5(1-13)。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现CGRP-2和CGRP-1能够很好地与抗CGRP抗血清结合。将CGRP-1;CGRP-3和CGRP-5分别免疫兔子,获得的抗血清分别与CGRP进行反应,发现只有抗CGRP-1的抗血清能够与CGRP很好地结合。因此,可以推测CGRP的羧端部分是其免疫活性部位。
  • 王克维,贾维红,张家萍,张昌颖
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 81-86.
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    本文通过出生后7天和24个月两组大鼠晶状体与20%三硝基甲苯(TNT)甘油:水(8:2)混悬液体外培养,培养箱通5%CO2,恒温37℃,观察TNT对晶状体上皮细胞DNA的损伤程度,结果以反映单链DNA断裂强度的F630/F530比值表示。HPLC分析发现经体外TNT孵育的晶状体内含有TNT及其代谢产物;当共同培养96h后,F640/F530比值随着TNT剂量增加而增大,达到40μL(11.74μmol/L)时趋向平稳;当用TNT浓度为4.40μmol/L的相同剂量培养时,48小时后单链DNA断裂最为严重F630/F530比值为1.50,明显高子正常对照组(P<0.01);幼鼠单链DNA断裂程度显著高于老龄鼠(P<0.01)。
  • 李生广,谢小松
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 87-92.
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    在KCl介质中牛脑V-型质子转运ATP酶复合体活力温度的Arrhenius图在33℃附近呈现明显的折点,同样做其N-[1-芘]马来酰亚胺(N-[1-P]M)的荧光-温度的Arrhenius图,发现其折点温度也为33℃,当加入100μmol/LNEM(N-ethylmaleimide),ATP酶复合体活力部分被抑制后的Arrhenius图折点下降为27℃,加入0.75-0.85mol/L尿素则活力的Arrhenius图的折点变为30℃。加入6%(V/V)的乙醇后,活力的Arrhenius图的折点上升为38℃。加入NEM,尿素和乙醇的内源荧光和N-[1-P]M标记的荧光测定,表明它们确实引起了牛脑V-型质子转运复合体构象的改变,这表明引起构象变化配基的加入,可改变牛脑V-型质子转运ATP酶复合体的Arrhenius图折点温度,也说明牛脑V-型质子转运ATP酶复合体Arrhenius图折点与酶复合体的构象直接相关。
  • 肖广庆,唐任寰,王素云,曹同庚,李令媛
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 93-97.
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    本文研究了不同剂量的稀土元素镱和铕,通过皮下注射对兔肝中金属硫蛋白生成的影响。用SephadexG50柱对兔肝提取液进行分离,收集的组分用紫外分光光度法、原子吸收光谱法和ELISA法进行分析。实验结果表明,低剂量(1-3ppm)的镱和铕不能明显地诱导兔肝内金属硫蛋白的合成,而高剂量(10-40ppm)的镱和铕可以诱导兔肝金属硫蛋白合成。
  • 徐文波,陈诗书
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 98-102.
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    本文利用PCR技术建立一种对HSV直接基因分型的方法。在HSV-Ⅰ、Ⅱ两型的DNA多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物(HDP-B)和两条型特异的下游引物(HDP-1、HDP-2)。三条引物共同组成一个扩增反应体系,在HSV-Ⅰ产生543bp条带,HSV-Ⅱ产生372bp条带,据此在基因水平上对HSV进行分型。5株不同来源的HSV(2株Ⅰ型,3株Ⅱ型)分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该反应体系与其它来源的DNA不产生特异反应,敏感性可达1fg。应用该法对151份临床可疑HSV感染的标本进行检测并分型,结果与免疫学方法完全一致。
  • 曾仲奎,郑建
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 103-110.
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    岩豆凝集素(MDL)的远紫外圆二色性谱(CD谱)显示216-217nm处的单一负峰。此时MDL分子含有16.2%的α螺旋,46.3%的β折叠和37.5%的无规卷曲。pH9.0时负峰红移至220nm,且在217-222nm处的峰值几乎相同;在20-40℃范围内,CD谱的变化甚微;60℃时谱峰蓝移;在80℃或100℃时,212nm处出现一大负峰。1mol/L或2mol/L脲时,MDL的CD谱已发生明显变化,二级结构单元也有变化,凝集兔红细胞的活性也随之减弱;随脲浓度的增加,MDL的谱峰蓝移,最终在212nm处出现大负峰。当胍浓度为0.75mol/L时,MDL的CD谱即有明显变化和活性丧失;胍浓度继续增加,CD谱逐渐成为特征的无规卷曲的谱形。在pH9.0、温度超过80℃、脲或胍浓度分别高于2mol/L和0.75mol/L时,MDL的CD谱发生显著变化的同时,其凝集兔红细胞的生物学活性全部丧失,分子的二级结构单元也发生很大改变。
  • 贺延春,王克勤
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 111-117.
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    本文对北京鸭apoA-Ⅰ溴化氰裂解片段的理化性质、部分结构和抗原性以及其与鸭肝细胞膜HDL受体的结合进行了研究。apoA-Ⅰ用溴化氰裂解后经HPLC分离得两个纯的肽段P5和P6,对二肽段作了氨基酸组成分析,并分别测定了P5,P6N端的14和9个氨基酸残基序列。通过与鸡apoA-Ⅰ的比较,根据同源性及肽段大小,定出P5、P6分别位于鸭apoA-Ⅰ的第138-170aa和第75-136aa的区域。Immuno-blotting法测定结果表明,P5、P6都含有鸭apoA-Ⅰ的抗原决定簇;用Western-blotting免疫检测,发现鸭apoA-Ⅰ的P5、P6二片段都能与鸭肝细胞膜HDL受体结合,提示鸭apoA-Ⅰ的中间区域即第75-170aa区域可能参予鸭apoA-Ⅰ与鸭肝HDL受体的结合。
  • 任向宇,王建平,张贺迎,吴经才
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 118-121.
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    国产硅藻土经氢氧化铵处理后可用于从发酰液中直接取青霉素G酰化酶,平均吸附量为90U/g。吸附的酶可用22%硫酸铵-0.3mol/LPBS(pH8.0)溶液洗脱。平均比18U/18Umg蛋白(NIPAB法)。硅藻土可反复使用。苯乙酰胺-Sepharose4B树脂可对酶作进一步的纯化。
  • 黄长晖,朱忠勇,唐玉钗
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(01): 122-124.
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    人红细胞NADH-细胞色素b5还原酶的分离纯化与鉴定黄长晖,朱忠勇,唐玉钗(南京军区福州总院全军医学检验中心实验科,福州350001)NADH细胞色素b5还原酶(Cytb5R,E.C.1.6.2.2.)是红细胞内催化高铁血红蛋白还原为血红蛋白的关键酶...