中国生物化学与分子生物学报

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孟琨,刘亚兵,张世荣,杜国光,周爱儒,顾文霞

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 641-645.

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本文研究了EGF、PTH和RA对UMR106细胞EGF受体的调节作用。结果显示PTH能上调EGF的受体,UMR106细胞经bPTH(1-34)处理3天,EGF受体的相对结合率与对照比较提高了40.3％,每个细胞的EGF受体数目从7.22×10~3增加到1.44×10~4,Kd从2.02×10~(-11)增加到3.68×10~(-11)mol/L。而RA则能下调EGF受体,以RA处理3天,EGF受体数目从7.22×10~3下降到4.28×10~3,Kd则从2.02×10~(-11)增加到4.17×10~(-11)mol/L。提示PTH和RA可能通过调变其EGF受体而分别起到正性和负性生长调节作用。

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用聚合酶链反应-指纹图法分析HLA-DRB基因型

刘晓荣,王申五,李丹,于燕

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 646-649.

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将不同个体的DNA经聚合酶链反应(PCR)扩增其HLA-DRB基因的高度多态区域,扩增产物经12％的聚丙烯酰胺凝胶电泳,照像后分析不同个体的指纹图型。PCR-指纹图法(PCR-Fingerprinting)为一种简便,快速的基因分析方法,可加速无关骨髓供者的筛选,它在器官移植及法医的个体识别中有一定实用价值。

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克山病心肌线粒体氧化损伤的实验研究

李芳生,张秀芳,邹黎明,关金阳

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 650-655.

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用克山病区粮喂养豚鼠证明其红细胞、肝等组织及其线粒体、上清中的硒及谷胱甘肽过氧化物酶活性明显降低,心肌线粒体脂质氢过氧化物、荧光色脂等增加、同时膜脂组成异常,内膜界面脂的心磷脂(CL)减少,细胞色素C氧化酶(CCO)活性降低;园二色性(CD)异常,近208nm及222nm区的峰值降低,病区粮加喂青菜的动物,随其线粒体硒及CL水平的增加。CCO活性和CD谱均明显恢复;通过外源性磷脂与纯化CCO的重组复性实验,只有CL可使病区粮组酶活性完全达到正常对照水平。表明心肌线粒体膜结合酶CCO活性的降低是CL含量降低引起酶的二级结构(构象)改变的结果。

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大鳞大马哈鱼垂体生长激素的分离、纯化与鉴定

陈松林,Bernard Breton,Pierre-YvesLeBail

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 656-660.

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应用ConA-Sepharose 4B亲和层析、凝胶过滤及离子交换层析等技术从大鳞大马哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)垂体中分离纯化了具有生物活性的生长激素(sGH)。用放射受体测定法(RRA)检测sGH组分的生物活性,结果表明纯化的8GH制品具有与兔肝细胞GH受体结合的生物活性。用放射免疫测定法(RIA)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测了另两种垂体激素-催乳激素(PRL)和促性腺激素(GTH)在纯化的sGH制品中的残留量均在0.5％以下。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE评价sGH制品的电泳纯度并测定了其分子量为22000左右。等电聚焦电泳表明该种鱼GH由等电点分别为6.3和6.6的两种形式的分子组成。

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交联葡聚糖结合无花果蛋白酶的制备与性质

任维栋,耿秀芳,孙风祥

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 661-665.

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本文报道了将Sephadgx G-200与对β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)首先醚化制备对氨基苯砜乙基交联葡聚糖(ABSE-Sephadex G-200),然后经重氮化固定无花果蛋白酶。固定化酶的活力回收达69％。BANA对该酶固定化过程中的活性变化有保护作用。天然酶与固定化酶都具有良好的耐热性,在69°～70℃,80min固定化酶较天然酶稳定。用苯甲酰-DL-精氨酰-β-荼胺(BANA)为底物,在半胱氨酸存在下,测定了两种形式酶的动力学性质。在pH7.7的磷酸盐缓冲系统中,37℃,天然无花果蛋白酶的K_m=0.32mol/L;在间歇振摇下固定化酶的表观K′m=1.02mmol/L。最适pH无明显改变,均为pH7.7。

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心磷脂电化学行为的研究

程昆蓉,程伯基,施明连,林克椿

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 666-670.

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对心磷脂及其与细胞色素C复合物的研究表明,心磷脂具有电化学活性;它与细胞色素C的结合使细胞色素C的克式电位下降、表观电子转移数减少、电极反应变慢。说明心磷脂和细胞色素C之间可能发生了电子转移。

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人白血病细胞癌性促凝物(CP)的分离纯化及其特性的初步研究

徐荣臻 ,沈良华 ,张克奇 ,李翠琴 ,徐淮生 ,王振生

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 671-675.

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用三步纯化法从人M_3型白血病细胞中分离纯化出人类肿瘤癌性促凝物(CP)。促凝活性回收率为24％,CP纯化倍数为2481倍。纯化CP在SDS-PAGE上为单一区带,其理化和酶学特性类似于动物肿瘤CP,分子量约为70 000,PI为4.8,在FVⅡ缺乏血浆中以及在含有组织因子(TF)抑制剂情况下仍能激活FX。CP促凝活性能被半胱氨酸蛋白酶抑制剂HgCl_2抑制,纯化CP能与抗动物肿瘤CP抗体形成免疫沉淀反应。

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鸡乙酰胆碱受体γ亚基基因5′连接区含多元顺式调节元件

贾弘禔,J.Schmidt

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 676-679.

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本工作利用瞬时表达研究了鸡Ach Rγ亚基基因5′连接区的调控机能。CAT分析表明,γ基因5′连接区-509/-302和-324/+36序列均可独立激活SV40启动子的转录,这种激活作用具有组织特异性,与方向、距离无关,符合增强子样作用。

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脂蛋白、载脂蛋白和脂蛋白受体与衰老

施秉仪

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 680-684.

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本文观察了新生儿(脐带血),青年(18—24岁),老年(55—65岁)各40例的血脂、脂蛋白、载脂蛋白和低密度脂蛋白LDL受体功能的变化。结果表明,新生儿的血脂,脂蛋白和载脂蛋白含量在各年龄组中最低(P<0.01),其LDL受体结合水平最高,(P<0.01)。血清TC,TG,LDL-C,apo B和CII随增龄上升,但LDL受体水平和HDL-C,apo AI,AII的增龄变化不明显。该结果指出,衰老对LDL受体的结合水平和HDL-C,apo AI,AII的影响似乎不大。另方面说明,TC,LDL-C和apo B浓度随增龄增加而不伴有相应的LDL受体结合水平及HDL-C,APO AI,AII浓度的上升,使老年期的脂蛋白代谢平衡被打破,因而促使高胆固醇血症和动脉粥样斑块的形成。

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肿瘤坏死因子α对ROS17/2.8细胞甲状旁腺素受体的下行调节

张建民,李平风,顾文霞,袁越,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 685-689.

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肿瘤坏死因子α(TNFα)是激活的单核巨噬细胞分泌的蛋白质,分子量17kD。其多功能性和选择性抑制肿瘤细胞生长的作用受到高度重视。我们的实验表明:TNFα(3×10~(-10)-1×10~(-7)mol/L)能显著降低大鼠成骨肉瘤细胞株ROS17/2.8的甲状旁腺素(PTH)受体总结合率,比对照降低7.47-37.45％,且与TNFα的浓度呈正相关。时间曲线显示,TNFα作用时间越长,受体总结合率降低越明显。Scatchard作图表明PTH受体数目降低而其亲和力无显著变化。细胞周期分析显示,TNFα(3.83×10~(-10) mol/L作用3天)能抑制S期DNA合成。可见TNFα通过减少PTH受体数目以调节骨代谢。同时通过抑制DNA的合成以调节骨细胞的增殖。

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癌基因及癌发育基因在裸小鼠人肝癌移植瘤中表达

许凯黎,屠华成,关赛芳,周瑾,沈兆忠

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 690-694.

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本文采用Northern blot,斑点杂交,western Immunoblot,凝集素亲和电泳及聚丙烯酰胺梯度电泳方法分别检测裸小鼠肝癌移植瘤中C-ras基因簇(N-ras,H-ras及K-ras),甲种胎儿蛋白以及γ谷氨酰转肽酶(GGT)基因及其产物的表达。结果提示C-ras基因簇均有不同程度的表达,其中N-ras基因表达水平要比H-ras高8倍,比K-ras高20倍左右,同样AFP及GGT基因均有较高水平的表达。经ras-p21单克隆抗体检测,发现肝癌组织抽提液中p21呈现阳性反应;AFP亚型分析提示AFP分子变异体属肝癌特异性分子亚型;GGT同Ⅰ酶酶谱分析表明组织中仅合成肝癌特异性GGT同Ⅰ酶酶谱(Ⅰ’,Ⅱ’)。上述结果充分表明癌基因及癌发育基因的高表达可能与癌细胞去分化性,分裂旺盛程度及细胞恶性度相关。最后文内还对裸小鼠人肝癌移植瘤中二类基因的相关性作一定的讨论。

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用酵母α因子启动子前导肽系统表达tPA

吴雅旭,石成华,李平

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 695-699.

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本文首次选用酵母α-因子启动子前导肽系统有效地表达了组织型纤溶酶原激活剂基因。我们的实验结果表明3′端不翻译区的长度对表达有影响。

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广东汉族健康人载脂蛋白AⅠ-CⅢl-AⅣ基因簇DNA多态性及其单倍型分布

罗超权,杨英浩,胡学强,刘煦文

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 700-705.

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本文研究了中国广东汉族健康人群apoAI-CⅢ-AIV基因簇DNA限制性内切酶PstI、SstI和EcoRI片段长度多态性。其中等位基因P_1,P_2,S_1,S_2,R_1和R_2的频率分别为0.98,0.02,0.96,0.04,0.90和0.10。经卡方检验符合Hardy-Weinbery氏遗传平衡,与其他种族比较,本文结果显示中国广东汉族人P_2等位基因频率低于日本人、亚洲印第安人和高加索人,S_2等位基因频率低于日本人、菲律宾人、沙特阿拉伯人和亚洲印第安人,而与高加索人相近,R_2等位基因频率稍高于高加索人。不同种族间apoAI-CⅢ-AIV基因簇DNA多态频率无疑存在差异,这种差异可能是由于遗传漂变和自然选择单独或联合作用所致。对P_1、P_2,S_1、S_2和R_1、R_2构成的单倍型和连锁平衡程度进行了分析,结果显示这些单倍型处于连锁不平衡状态。

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表皮生长因子对转化的小鼠成纤维细胞DNA拓扑异构酶活性的影响

王丽辉,童坦君,郑玉荣

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 706-710.

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我们用表皮生长因子对用氚标记的脱氧胸苷转化的C_3H_(10)T1/2 CL8细胞进行刺激,研究了表皮生长因子对该细胞胞浆及胞核内DNA拓扑异构酶活性的影响,结果发现,表皮生长因子可以使转化的小鼠成纤维细胞胞浆和胞核内的DNA拓扑异构酶活性增加。

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海藻糖对载药脂质体在干燥-再水化过程中的保护作用

童桥,聂松青,林克椿

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 711-714.

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包载抗肿瘤药物阿糖胞苷及阿霉素的脂质体,在真空干燥-再水化后,其内含物大部分漏出(保存率在20％以下)。在有足够数量海藻糖存在时,其内含物保存率可达80％以上。干燥状态下贮存,明显地比水化状态脂质体具有更良好的稳定性,本文所用方法对载药脂质体在临床中的应用有一定意义。

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甾类雌激素叠氮化物与雌二醇17β-脱氢酶的激光亲和反应

王春霞,肖云宣,金长振

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 715-718.

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以雌酮为原料,经过硝化、还原、重氮化及叠氮化钠处理,得到2-叠氮雌酮、4-叠氮雌酮、2-叠氮雌二醇和4-叠氮雌二醇。本文测定这四种叠氮衍生物作为雌二醇17β-脱氢酶底物的表观条件K_m依次为;1.75×10~(-4)mol/L、2.37×10~(-4)mol/L、1.39×10~(-4)mol/L、1.97×10~(-4)mol/L。在280nm波长激光照射下,它们均使雌二醇17β-脱氢酶失活,并遵循准一级动力学规律。如果这类亲和反应发生在雌激素依赖性肿瘤细胞内的雌激素酶或受体上,使酶或受体失去活性而不能发挥其正常的生理功能,可能会抑制肿瘤细胞的生长。用320nm波长激光照射时,四种化合物都没有使酶失活的作用。

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直组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的纯化与鉴定

周圆,金冬雁,徐荣辉,侯云德

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 719-723.

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本文利用SDS-PAGE及蛋白质电泳印迹技术,从带有相应表达质粒的重组大肠杆菌裂解液中,将所表达的重组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8(NAP-1/IL-8)转移至聚偏二氟乙烯膜上,直接进行N-末端15个氨基酸的序列分析,从而确证该目标蛋白得到高效表达和正确加工。随后采用Bio-Gel P30凝胶过滤层析和Mono-S阳离子交换层析对重组人NAP-1/IL-8进行了分离纯化,纯化产品达到SDS-PAGE纯。利用琼脂糖平板法测定了纯化产品的嗜中性白细胞趋化活性,推算其比活为2.8×10~5U/mg蛋白。又利用SDS-PAGE测出重组NAP-1/IL-8的分子量约为8.5kD,但根据凝胶过滤层析的洗脱时间推定,在溶液中确实存在分子量稍大于14.4kD的NAP-1/IL-8二聚体。

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神经节苷脂GM_3对人单核样白血病J6-2细胞中磷脂代谢的影响

崔肇春,张新波,汤乃梅,朱正美

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 724-729.

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用50μmol/L GM_3处理J6-2细胞6天,经组化与细胞学检查,证实细胞沿单核巨噬细胞途径分化。以[~(32)P]Pi或[CH_3-~(14)C]胆碱冲激(Pulse)后,将洗净的细胞进行Folch分配。取下相进行薄层层析,再做放射自显影。结果表明:GM_3的处理能促进[~(32)P]Pi或[CH_3-~(14)C]胆碱向磷脂酰胆碱的参入,而抑制向其他磷脂组分的参入。用[CH_3-~(14)C]胆碱冲激的Folch分配上相含水溶性胆碱代谢物,经TLC,结果表明CM_3的处理使[CH_3-~(14)C]胆碱向CDP-胆碱的参入减少。本研究证实,GM_3能调节J6-2细胞的磷脂代谢,其调节机制值得研究。

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致癌剂DEN、促癌剂巴豆油对大鼠肝α_1抑制因子3基因表达的影响

赵玫,赵清正,张春燕,侯充,郭金利,王萍,刘立新,姚红芸,于树玉

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 730-734.

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本文对致癌剂二乙基亚硝胺(DEN)和促癌剂巴豆油对大鼠肝α_1-抑制因子3(α_1- I_s)基因表达的影响进行了观察。结果表明:在腹腔注射DEN(200mg/kg·b.w.)后2h,α_1- I_3 RNA水平即显著下降;4h左右有所回升,约为正常水平的四分之一;然后又下降至极低水平,并一直保持该水平至24h。同时,c-myc RNA在2h则被诱导,约为正常水平的2-3倍;之后,即在4至24h内虽有波动,但基本处于正常水平。在腹腔注射巴豆油(18mg/kg.b.w.)后1h,α_1-I_3RNA水平即下降,约为正常水平的1/8,此后有所回升,约为正常水平的1/3-1/4;在同样条件下,ODC和C-fos RNA能被巴豆油诱导而增加。我们以前的工作表明,在大多数(75％,12/16)由DEN所诱发的大鼠肝癌中,α_1- I_3RNA水平显著下降,且基因结构发生了变化。综合这些结果,说明α_1- I_3基因或与该基因表达有关的蛋白调控因子可能是致癌剂DEN或促癌剂TPA的作用靶分子。该基因表达异常的意义及机理正在深入研究中。

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绿色木霉产生的葡萄糖苷酶类

高培基,曲音波,王祖农

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 735-740.

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由绿色木霉(Trichoderma viride)A10菌株的粗酶制剂中分离纯化得到 6个β-葡萄糖苷酶组分,对它们的物理、化学性质和对20种糖苷类化合物的水解作用进行了测试。其中5个组分都是既能水解β-构型的糖苷化合物,又能水解α-构型的糖苷化合物,表明它们对α-、β-异头专一性的要求并不象文献中报导的那样十分严格,对糖基和糖苷配基专一性的要求也并不十分严格。由此,对葡萄糖苷酶类的命名分类方法提出了讨论,并对在纤维素酶系研究中纤维二糖酶活力的检测方法进行了讨论。

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五步蛇蛇毒磷脂酶A_2的纯化及部分性质

范礼斌,冉永禄

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 741-747.

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经Sephadex G-75和QAE-Sephadex A-50离子交换层析等方法,从湖南产五步蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒中纯化一种均一的酸性磷脂酶A_2。SDS-PAGE测得分子量为15.8kD,按氨基酸残基计算其分子量为14.352kD,IEF-PAGE测得等电点为5.32。氨基酸组份分析表明磷脂酶A_2分子由128个氨基酸残基组成,富含Asp和Glu,不含中性糖。PLA_2酶活性的最适温度为45℃,最适pH为8.5左右,没有抗胰蛋白酶的活性,具一定的热稳定性。K~+、Ca~(++)和Na~+离子激活,而Cd~(++)、Sn~(++)、Cu~(++)、Li~+、Hg(++)、Zn~(++)、Fe~(++)和Co~(++)离子可抑制或完全丧失酶活力。手工微量顺序分析测得PLA_2分子N-末端氨基酸为Leu。此酶对小白鼠的LD_(50)至少大于10mg/kg(ip)。

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弓形虫特异DNA片段顺序分析及体外基因扩增

夏爱娣,王克敏,顾允中,张惠民,杨惠珍,徐克继,钱宗立

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 748-754.

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从弓形虫(ZS_2株)基因组文库中筛选出了一个弓形虫特异DNA片段的克隆,对克隆的片段进行了部分顺序分析。根据所得DNA顺序,自行设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立了体外扩增弓形虫特异DNA顺序的聚合酶链反应(PCR)方法。4种不同来源的弓形虫株DNA、人工感染弓形虫的三头幼猪白细胞和胸腺DNA经过PCR扩增,均出现特异的扩增条带;而正常人、正常幼猪外围血白细胞、正常小鼠脾脏、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、溶组织内阿米巴和人巨细胞病毒DNA均不出现特异的扩增条带。对扩增产物进行了Southern印迹和限制性内切酶图谱分析,证明该PCR产物是弓形虫DNA特异的顺序。该方法可测出少至1pg的弓形虫DNA或1个弓形虫体的裂解液。本文分析的DNA顺序和设计合成的引物顺序数据,经电脑DNA数据库检索,证明无相同的顺序。本方法并具有简便、快速等优点,便于推广应用。

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用亲和层析技术分离纯化天冬氨酸酶

阎伯旭,马林,左汉田,孟庆繁,阎岗林,黄仲立,于靖,程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 755-758.

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<正> 亲和层析技术做为现代生化实验室常用的提纯方法,具有专一性强,活力损失小,分离步骤少等优点。天冬氨酸酶是重要的酶制剂,以往见报的分离纯化工艺步骤繁琐,活力损失大。本文报道的新工艺是用聚乙二醇(PEG)/磷酸钾双水相抽提;DEAE-sophadex A-50柱层析除PEG和部分杂蛋白;环氧氯丙烷活化载体,底物作配基的亲和层析技术获得了电泳纯的天冬氨酸酶。

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生物化学杂志第8卷1992期总目录

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(06): 759-768.

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