中国生物化学与分子生物学报

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周平坤,魏康

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 513-517.

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本文将反向交变电场和六角形电极电场这两种脉冲电场凝胶电泳技术应用于X线照射小鼠乳癌细胞SR-1所致DNA双链断裂的检测,在本实验条件下,用这种电泳都能检测到低至1.5Gy照射所产生的DNA双链断裂,并且用六角形电极电场电泳获得了DNA双链断裂程度与照射剂量之间的良好线性关系,此外,还用此方法观察了不同浓度自由基清除剂DMSO对X线照射SR-1细胞所致DNA双链断裂的保护作用,结果进一步证实本方法的可靠性。

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大肠杆菌中rnc与era基因的共表达

陈苏民,Donald L.Cort

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 518-524.

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rnc,era基因是大肠杆菌两个相邻的基因。用S_1核酸酶图谱法测得转录从rnc基因伸延到era基因。当rnc基因突变使所产生的RNaseⅢ丧失活性时,大肠杆菌中RNaseⅢ和Era蛋白的合成速度同对上升,且上升幅度相同,合成量相等。将此二基因分别或一起克隆入质粒并置于P_L起动子下游时,rnc能表达产生RNaseⅢ;rnc-era能表达产生RNaseⅢ和Era两种蛋白质,单独era则虽能转录却不产生Era蛋白。实验证明:era基因的表达依赖于rnc基因的表达,在体内两者共表达体现在转录和翻译水平上,两个基因同属于一个操纵子,共同受RNaseⅢ活性的反馈调节。单独转录的era-mRNA因缺乏有效的翻译起始序列而不能被翻译。

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阿片肽对骨髓未成熟B细胞的免疫学效应

李刚,于杰

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 525-529.

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已经证明一些细胞象脾淋巴细胞、血T细胞、自然杀伤细胞和血小板存在有阿片受体。本文在骨髓细胞上的研究提示未成熟B细胞表面也存在有这类神经肽的受体,通过阿片肤类结合到细胞上可以观察到不同的效应。试验结果显示M-脑啡肽、L-脑啡肽和α-内啡肽对骨髓未成熟B细胞抗体生成反应的抑制分别为76.6％、68.6％和67.7％。相反,β-内啡肽增进抗体反应达78.0％。M-脑啡肽和两种内啡肽在未成熟B细胞上的效应能够被拮抗剂纳络酮所逆转,提示反应涉及阿片肽受体机制。

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波叶大黄多糖对胰腺五种酶的抑制作用

姚文兵,唐朝晖,陈琼华

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 530-534.

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本文报道波叶大黄多糖(Rheum hotaoense polysaccharide,RHP)对胰腺五种酶的抑制作用。结果表明。(1)RHP对胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶、胰弹性蛋白酶和胰激肽释放酶均有很明显的抑制作用。IC_(50)分别为250μg/mL、21μg/mL、18μg/mL,189μg/mL和300μg/mL。(2)动力学研究表明,RHP对胰蛋白酶和胰脂肪酶的抑制均是非竞争性的,Km值分别为1.2×10~(-4)μmol/mL和1.2mg/mL,Ki值分别为355.0μg/mL和63.85μg/mL。(3)牛血清白蛋白(BSA)对RHP抑制胰蛋白晦和胰脂肪酶具有拮抗作用。当BSA浓度达72.0mg/mL时,对胰蛋白酶活性的恢复率为71.54％。当BSA浓度达20.0mg/mL时,对胰脂肪酶活性的恢复率为63.64％。上述结果表明,RHP对胰腺五种酶的抑制作用,可能是大黄治疗急性胰腺炎作用的生化机制之一,预示RHP在临床上将有重要应用前景。

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纤维素固相化木瓜蛋白酶

吴显荣,朱利泉

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 535-538.

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本文用叠氮法制备了纤维素固相化木瓜蛋白酶(简称CMCP)。与相应酶液水解酪蛋白的反应相比,它表现出较低的酶活性,较高的最适pH值和较高的稳定性。CMCP的比活回收率约为24％,最适pH值向碱性范围移动约为0.5个单位。CMCP经60℃热处理,持续3h活性无明显下降,在4℃下保存127天,活性只下降了40％左右。对这些参数,本文都根据CMCP的结构特点进行了分析。 CMCP柱还表现出明显的对啤酒的防浊能力。过柱的啤酒,氨基酸的含量大大增加。

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HL-60细胞诱导分化与细胞膜流动性变化研究

张希红,杨渝珍,夏庆苏,邵超鹏,陈兆聪

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 539-543.

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本实验以二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)为诱导剂,诱导人早幼粒白血病细胞系HL-60沿粒系统成熟分化。动态观察了诱导后1—6天HL-60的形态、功能成熟度改变、膜流动性和增殖活性的变化。结果表明,早幼粒细胞由诱导前的78％降至5％,杆核与分叶核细胞由6％和1.5％分别增加至32.5％和5.5％。NBT(Nitroblue tetrazolium,四唑氮蓝)还原试验显示其功能亦渐超成熟。诱导后HL-60 DNA合成速率明显降低(降低40～75％),膜脂流动度亦显著降低(降低30％,P<0.01)。提示诱导分化后的HL-60细胞不仅获得了与正常成熟粒细胞相似的形态功能特征,同时还失去了膜流动性增高及快速繁殖增生的恶性特征。

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人胃癌Ha-ras基因及上游区片段甲基化对转化效率及表达的影响

陈瑞环,施华,张维,薛力泉,顾健美,韩复生,吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 544-549.

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本文将克隆于pBR322的人胃癌Ha-ras基因(PGC6.6)和带有上游区片段的Ha-ras基因(PGC9.1)的CC~*GG位点甲基化后,转化NIH3T3细胞。发现pGC6.6甲基化与非甲基化对转化效率无明显影响,而pGC9.1甲基化后转化效率明显低于非甲基化pGC9.1者,甲基化/非甲基化pGC9.1的转化效率均明显高于甲基化/非甲基化pGC6.6者。本文又对人胃癌组织及癌旁组织DNA中Ha-ras基因的HpaⅡ、Msp Ⅰ限制性内切酶图谱作了比较,并同对比较了癌及癌旁组织中Ha-ras基因的mRNA水平,发现一例病人癌组织中Ha-ras基因的CC~*GG位点甲基化程度较癌旁组织中者低,且该例中Ha-ras基因表达水平在癌组织中明显地高。这些结果,结合我们以前的研究表明:在人胃Ha-ras癌基因上游区可能存在一增强子样作用的区域,对Ha-ras基因起调控作用。该上游区CC~*GG位点的甲基化能降低这种调控作用。仅Ha-ras结构基因的CC~*GG位点甲基化不足以明显影响其转化活性。在体内,Ha-ras基因甲基化水平降低可能与其达表水平升高以至诱发癌症有关。

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妊娠期家兔子宫内膜的鞘糖脂表达

程腊梅,朱正美,崔肇春

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 550-554.

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妊娠期家兎子宫内膜的神经节苷脂(Gls)的含量明显低于动情期的,而中性鞘糖脂(NGSL)的含量则以妊娠中、晚期的最高,动情期最低。鞘糖脂组成变化最显著的是妊娠早期,由动情期到早孕GM_3从28.0％增加到52.7％,CMH.CDH由未测出分别增加到29.2％和21.9％,而糖链复杂的组分GD_3,GTlb和CPH的百分含量则明显减少,到妊娠中、晚期、短糖链组分逐渐减少,而复杂糖链组分渐增。中期妊娠内膜的(GIs)以GD_3为主要组分,占45％,明显高于其它各期。NGSL在妊娠中、晚期CPH增高达70％,与动情期水平相当。结果提示,妊娠期间子宫内膜的鞘糖脂含量与组成均发生明显变化,这些变化可能与子宫功能密切相关。特别是早孕对的变化,推测与子宫内膜和胚泡的识别,粘连特性的获得有关。

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胰蛋白酶的固定化及其性质研究

隋德新,陈天,姜涌明

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 555-559.

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以自制的脱乙酰壳多糖作载体,戊二醛为交联剂,对胰蛋白酶的固定化条件及其固定化酶的性质进行了研究。考查了交联剂的用量、pH值、以及载体与酶的比例等因素对胰蛋白酶固定化的影响。在所选择的固定化条件下,固定化酶的活性回收可达50％以上。同时研究了固定化胰蛋白酶的一些性质;最适温度60℃,最适PH8.0,Km值比可溶性酶升高,热稳定性、pH贮存稳定性以及在乙醇水溶液中的稳定性明显高于可溶性胰蛋白酶。在柱式反应器内,以2％酪蛋白为底物对,操作半衰期为40天。

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鲤鱼垂体mRNA反转录模板活性的研究

宋德秀,刘勇,孙霁凌,赵大健

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 560-565.

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本实验用不同方法研究鲤鱼垂体mRNA反转录为互补DNA的活性。用硫氰酸胍法,从垂体中提取总RNA,经过Oligo(dT)-纤维素柱层析,得到poly(A)~+RNA。以mRNA为模板,30％反转录成单链cDNA。利用RNaseH-DNA聚合酶Ⅰ-E.coli DNA连接酶合成双链cDNA。单链cDNA拷贝成双链cDNA。经放射自显影分析,证明合成了全长cDNA。用水解法合成双链cDNA,大多数为不完整的双链cDNA。平末端的双链cDNA连接上Eco RI-linker经Sepharose-4B分离,收集大片段cDNA,与pUC 19载体相连接,经转化构建成10~5克隆/μg mRNA的cDNA文库。

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北京地区家蝇对拟除虫菊酯的抗药性与α-乙酸萘酯(α-NA)酯酶的关系

杨俭美,李令媛

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 566-570.

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通过1988年以来对北京地区家蝇(Musca domestica L.)抗药性的研究表明,北京朝阳、回龙观、宣武、景陵地区的家蝇种群与海口种群LD_(50)比较,对溴氰菊酯的抗性为5.4—17.2倍,对二氯苯醚菊酯的抗性为2460—3080倍。不同抗性水平的家蝇种群中,α-NA确酶活性大于0.5(A600值(0.01头·15分))的个体频率与其溴氰菊酯和二氯苯醚菊酯的抗性程度具有显著相关(相关系数分别为0.94和0.98)。抗性程度较高的宣武种群平均酯酶活性为280μmol/(mg蛋白质·分),是海口敏感种群的10.5倍。海口种群α-NA酯酶的米氏常数值(Km)为4.49mol/L,分别是朝阳、回龙观、宣武种群的4.7、4.2和2.3倍,说明抗性种群α-NA酯酶对底物的亲合力高于相对敏感的海口种群。

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截流荧光法研究米曲霉氨基酰化酶的快速胍变性动力学

王道宾,姜坪,何炳林,林华宽,陈荣悌

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 571-577.

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用荧光光谱法、截流荧光法和酶活力测定法研究了在盐酸胍溶液中米曲霉氨基酰化酶变性动力学。我们发现在4.8mol/L盐酸胍溶液作用下(0.05mol/L磷酸缓冲溶液,pH7.4,25℃),氨基酰化酶二聚体解离成单亚基过程是一个十分快速的过程,反应速率常数k为3361l/s,即约需3ms时间完成;而单亚基分子的构象变化需要约20min方能到达平衡态,这是一个逐渐变化的缓慢过程。酶分子在胍作用下的失活现象同酶分子的结构变化紧密相关,在胍浓度大于4mol/L时酶完全失活。在高浓度盐酸胍下酶失活主要是因为酶二聚体迅速解离成单亚基的过程和单亚基构象逐渐变化的缓慢过程。双亚基解离常数大小标志着酶分子亚基间作用力的强弱。

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大鼠肾脏组织cDNA文库的制备和葡萄糖转运蛋白cDNA克隆的筛选

程振起,许卫东,蒋玉玲,黄永芬,汪清胤

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 578-582.

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大鼠的肾脏组织经匀浆后,提取纯化总RNA和mRNA合成cDNA,进行甲基化,加人工接头,最后连入载体(λgt11)和外壳蛋白包装步骤制成肾脏组织的cDNA文库。插入载体的cDNA长度为0.5kb到8kb之间。经反复稀释,测定出该文库的效价为1.5×10~7pfu/mL。

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红细胞外HbA_2与HbA间的相互作用

秦文斌

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 583-587.

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1.为了阐明血红蛋白A_2现象的发生机制,研究了红细胞外Hb A_2与HbA有无相互作用。结果表明,这些血红蛋白在离开红细胞后仍能发生相互作用。 2.我们是用交叉电泳来验证这个问题,主要实验结果如下: (1)单向交叉电泳结果表明,溶血液HbA穿过另一溶血液的Hb A_2时,出现明显的交叉电泳图象。 (2)双向交叉电泳实验使上述结果更加明确。 (3)用提纯的Hb A做实验,证实了Hb A与Hb A_2间的相互作用。 (4)血浆白蛋白穿过Hb A_2、Hb A及CA时,没有看到交叉电泳图象。说明Hb A与Hb A_2之间的作用是特异的。 4.初步结论,不仅在缸细胞中Hb A_2是与Hb A结合存在,就是在离开红细胞的条件下,这两种血红蛋白之间仍能发生相互作用。我们认为,这就是血红蛋白A_2现象的发生机制,很可能如此。

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猪脾脏酪氨酸蛋白激酶的研究

张光毅,陆梁,赵文君,赵升皓,向仁德

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 588-594.

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采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析和Tyrosine-agarose亲和层析,首次从猪脾脏30000Xg颗粒中部分纯化了酪氨酸蛋白激酶,其比活性约为12000pmol.min~(-1).mg~(-1)。磷酸氨基酸分析表明,该酶能催化合成多肽poly(Glu.Ala.Tyr)_n(6:3:1)中的酪氨酸(Tyr)磷酸化,对该多肤废物和ATP的Km值分别约为2mg/mL和15μmol/L。Mn~(2+)对部分纯化的酪氨酸蛋白激酶的最大激活活性高于Mg~(2+),其AC_(50)分别约为1.4mmol/L和8mmol/L;发现红花素能强烈地抑制该酶活性,其IC_(50)约为125μmol/L。

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组织型纤溶酶原激活剂的发光分析法及其应用

蒋滋慧,王会信,谢支光,王芳,刘农乐,徐秀英,周廷冲

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 595-601.

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本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活性。该方法的标准曲线范围对t-PA为0.156IU/mL～40IU/mL。灵敏度可达0.156IU/mL。回收率为98.6％(n=27)。批内批间变异系数分别为6.6％及10.3％。该方法曾用于检测细胞培养液中提取t-PA样品及t-PA基因表达时培养液中t-PA的活性。也曾用于检测从组织中纯化t-PA样品及血浆中t-PA活性的测定。文中讨论了该方法与其它方法优缺点的比较。

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氨甲喋呤-人血清白蛋白-单抗79结合物的制备及其体外细胞毒作用

刘晓坤,殷惠君,沈倍奋

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 602-607.

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本研究采用间接连接法,应用异型双功能连接剂SPDP,形成以酰胺键和二硫键连接的氮甲喋吟-人血清白蛋白-单抗79(MTX-HSA-McAb79)结合物。其中McAb79与HSA克分子比有效地控制在1:1～2,且结合物的纯度及产率均较高,有一定的制备价值。对靶细胞Nalm-6的体外细胞毒试验结果表明:MTX-HSA-McAb 79的杀伤活性显著强于MTX-HSA-nIgG,但较游离MTX的杀伤活性为弱。且MTX-HSA-McAb 79的杀伤作用依赖于McAb 79与靶抗原CALLA的抗原抗体反应。

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脂质体包裹阿霉素的体外抗肿瘤作用

胡兰荣,温伟,郑昌学,吴健,董志伟

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 608-612.

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我们用超声法制备了内部包裹阿霉素,表面有抗人胃癌细胞M85的单克隆抗体3Hll或非相关抗体IgG的阿霉素靶向脂质体和阿霉素非靶向脂质体,研究了这些脂质体和游离阿霉素抑制靶细胞M85和非靶细胞HeLa细胞生长的能力。结果表明,一方面,与游离阿霉素或阿霉素非靶向脂质体相比,阿霉素靶向脂质体抑制M85细胞生长的能力提高了2—4倍,而在抑制非靶细胞HeLa细胞的生长方面,阿霉素靶向脂质体的效力还不如游离阿霉素或阿霉素非靶向脂质体。过量的游离单克隆抗体3Hll可以有效地抑制阿霉素靶向脂质体对M85细胞的细胞毒作用,而另一种单克隆抗体3G9则不能。空靶向和空非靶向脂质体对M85细胞生长均无影响。因此,靶向脂质体可以把包裹的抗癌药物专一地送给胃癌细胞,井杀伤它们。

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视黄酸和亚硒酸钠对肝癌细胞某些表型逆转的加和作用

秦锁富,查锡良,陈惠黎

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 613-617.

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人肝癌细胞株SMMC-7721经1μmol/L视黄酸和或2.5μmol/L亚硒酸钠处理后,膜上纤维连接蛋白沉着量逐日上升,且较相应天数的对照组细胞增加,而甲胎蛋白分泌量和~3H-TdR参入率被明显抑制。视黄酸和亚硒酸钠同时处理的联合组作用强度接近于两者单独使用时作用强度的加和。对以上结果和视黄酸及亚硒酸钠使肝癌细胞接触抑制恢复及表型逆转的关系作了讨论。

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c-kit原癌基因两个相邻EcoRI片段的核苷酸序列和结构特点

胡维新,F.Cornu,C.Andre,F.Galibert

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 618-629.

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c-kit原癌基因(Proto-oncogene)是猫逆转录病毒HZ4 FeSV v-kit癌基因的类似物,其结构与CSF-1R和PDGFR十分相似,基因产物是一种跨膜糖蛋白,具有酪氨酸蛋白激酶活性,细胞外部分则可能是一种受体,可接受细胞外信号的调节。本文报道人c-kit原癌基因两个相邻片段的核苷酸序列及其结构特点。

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心磷脂对细胞色素C氧化酶质子泵功能的影响

程伯基,窦毅,程昆蓉

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 630-634.

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用胆酸盐透析法将猪心线粒体细胞色素C氧化酶重组在含心磷脂和二肉豆寇磷脂酰胆碱的脂质体上,以还原态细胞色素C作为酶反应底物,记录脂酶体囊泡外介质液pH的变化,pH下降幅度可以反映细胞色素C氧化酶质子泵的功能。心磷脂含量不同的细胞色素C氧化酶脂酶体质子泵功能不同。心磷脂含量在10％—40％(w/w)范围内,随心磷脂含量增高,该酶质子泵功能增强;当心磷艏含量超过50％时,该酶质子泵功能却随心磷脂含量的增加表现出下降的趋势。阿霉素可以与心磷脂紧密结合,抑制细胞色素C氧化酶的质子泵功能。然而,少量阿霉素却能增强含70％心磷脂的脂酶体的质子泵功能。

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油桐尺蠖核多角体病毒多角体蛋白双向电泳分析

刘明富,谢天恩

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 635-637.

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<正> 油桐尺蠖核多角体病毒(Buzura suppressaria Nuclear Polyhedrosis Virus,BsNPV)是茶树、油桐等的一种主要害虫——油桐尺蠖的病原体,我国首次分离,并已对其进行了广泛的研究。这种病毒的多角体蛋白在单相SDS-PAGE中分子量显示为31 kD的单一多

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三碘甲腺原氨酸不能与蛋白质二硫键异构酶特异结合

唐建国

中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(05): 638-640.

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<正> 蛋白质二硫键异构酶(PDI)是由两个相同亚基组成的蛋白质,分子量约107000,能够催化蛋白质天然二硫键的形成。Edman等在1985年已阐明了鼠PDI的一级结构,近二、三年,又相继报道了三种蛋白的一级结构,它们是脯氨酰-4-羟化酶的β亚基、三碘甲腺原氨酸(T_3)结合蛋白(T_3BP)和蛋白质糖基化部位结合蛋白(GSBP),在氨基酸水平上与PDl分

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