中国生物化学与分子生物学报

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黄莉莉,贾维红,张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 385-389.

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观察了AC1和AC3对抗亚硒酸钠性白内障形成过程中晶状体的脂类过氧化作用,非蛋白质疏基水平及硒含量。结果表明,亚硒酸钠组大鼠,在晶状体混浊出现前已发生脂类过氧化作用及硒含量的明显增加,非蛋白质巯基含量的显著降低,并持续至核混浊期;而同时接受AC1或AC3的大鼠,晶状体非蛋白质巯基水平初期降低,然后逐渐恢复至正常。AC1可有效的对抗亚硒酸钠所致的脂类过氧化作用增加,而AC3的对抗效应需一定剂量及时程,两者对晶状体硒含量均无明显影响。

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AC1及AC3抗白内障形成中晶状体谷胱甘肽代谢相关酶活性的变化

黄莉莉,贾维红,张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 390-394.

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观察了亚硒酸钠,AC1,AC3对大鼠晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),谷胱甘肽还原酶(GR)及谷胱甘肽硫转移酶(GST)的影响。结果表明,亚硒酸钠组大鼠的晶状体尚未混浊前已出现GSH-Px活性增高及GR和GST的活性降低。GR活性下降随白内障进展而加重。AC1及AC3均可使亚硒酸钠所致的酶活性变化逆转,但对正常晶状体的酶活性没有影响。

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竹红菌甲素敏化DNA的光氧化——甲素与DNA的结合及DNA某些理化性质变化

傅毅平,贾弘禔,董苍玉

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 395-400.

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本文研究了光敏氧化前后甲素与DNA的结合以及这种结合对DNA-EB复合物荧光强度、DNA融解温度和圆二色谱的影响。利用Sephadex G-150凝胶过滤和同位素技术分离甲素-DNA复合物,测得光照前后甲素与DNA的结合率分别为15.2％和27.8％。荧光测定和琼脂糖凝胶电泳结果显示:甲素可阻碍DNA-EB复合物的形成、使DNA-EB复合物的荧光强度减弱,光照甲素对DNA-EB复合物的荧光淬灭作用较未光照者为强。甲素敏化DNA光氧化后的荧光淬灭、DNA融解温度降低和CD谱变化提示:甲素敏化DNA光氧化涉及碱基破坏及DNA双螺旋结构改变。

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溴氰菊酯对鼠脑蛋白质磷酸化作用的影响

姜建成,冷欣夫

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 401-405.

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以小鼠大脑碎片与[γ-~(32)P]ATP一起保温,观察到溴氰菊酯对蛋白1—3磷酸化的刺激作用和对4、5磷酸化的抑制作用,表明溴氰菊酯对大脑蛋白质磷酸化产生了影响。从鼠脑分离了C、D、S三个组分,分别进行的蛋白质磷酸化试验结果表明,C、D组分可能是重要的磷酸化部位。蛋白1、2、3的磷酸化明显地受到溴氰菊酯的刺激,这三个蛋白质可能是“蛋白Ⅲb”的几种形式。溴氰菊酯对“蛋白Ⅲb”磷酸化的刺激,可能会影响神经末梢的神经激素释放,从而影响到与其相关的某些神经功能。

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γ-射线对大鼠小肠粘膜上皮细胞RNA合成的影响及其机理的研究

杨文学,易禄康

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 406-410.

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本文观察了15戈瑞γ-射线全身照射后,大鼠小肠粘膜上皮细胞核体外转录活性,从染色质结合的RNA聚合酶和可溶性RNA聚合酶活性变化探讨辐射对核转录活性的抑制机理。实验结果表明:(1)照后2小时、8小时和24小时,核转录活性分别下降22.7％、20.8％和28.2％;(2)染色质结合的RNA聚合酶活性变化与细胞核转录活性变化基本平行,提示核转录活性降低与核内染色质损伤有关;(3)照后24小时,核分离的可溶性RNA聚合酶抑制58％,提示辐射至少部分是通过抑制RNA聚合酶而影响细胞核转录活性;(4)在细胞核和分离的RNA聚合酶都观察到RNA聚合酶Ⅱ抑制程度大于RNA聚合酶Ⅰ和酶Ⅲ,酶活性下降主要表现在RNA聚合酶Ⅱ提示不同类RNA聚合酶对辐射的敏感性不同,酶Ⅱ对辐射更敏感。

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棕色固氮菌含铁超氧化物歧化酶重组研究

陈惠鹏,罗贵民,李惟,程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 411-416.

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将棕色固氮菌230含铁超氧化物歧化酶对8mol/L脲,10mmol/L EDTA透析制备无活性缺辅基蛋白;将其在8mol/L脲中对10mmol/L硫酸亚铁铵透析得到重组超氧化物歧化酶。重组酶含有与天然酶相近的铁含量,活性为天然酶的89.1％。缺辅基蛋白,重组酶与天然酶都是由二个相同的亚基组成;重组酶的吸收光谱与荧光光谱与天然酶几乎一样,而缺辅基蛋白则有较大的差异;从园二色谱的分析得知,缺辅基蛋白不含有α—螺旋,而天然酶和重组酶中α螺旋的含量分别为21％和20％;缺辅基蛋白比天然酶或重组酶具有更大的巯基反应性。

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E.coli galk和gpt基因重组质粒(pIDB103)导入金鱼受精卵内的研究

于建康,王亚平,黄河,杜淼,李光三,张玉廉,陆德裕

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 417-422.

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用显微注射法把含有E.coli galk和gpt基因的环状和线状重组DNApIDB103分别导入金鱼受精卵的细胞质内。这些注射过的卵子一般都能正常发育。从各不同发育时期的胚胎分离DNA与~(32)P标记的pIDB103探针杂交表明,导入的环状外源重组DNA在胚胎发育的早期,绝大部分以各种环状构型存在。从原肠胚晚期开始,它们逐渐形成串联状高分子量DNA。在尾芽期仍能检测到它们的序列。但尚未证明,它们是否与受体的染色体DNA发生整合。我们从囊胚期的胚胎中回收到了能转化大肠杆菌的环状重组DNA,它的酶切图谱和pIDB103极其相似。导入金鱼受精卵内的线状重组质粒pIDB103,除少量DNA与金鱼的染色体DNA可能发生整合外,其余绝大部分也形成高分子量DNA。

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人脑神经特异性烯醇化酶的纯化及其性质研究

孙志贤,党进军,陈惠鹏,姜国芝

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 423-427.

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本研究设计了利用DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-150凝胶过滤、以及经Ultrogel和DEAE-Sepharose CL-6B柱进一步层析分离获得高纯度人脑神经特异性烯醇化酶(NSE)的纯化方案。纯化的酶经SDS电泳鉴定为单一亚基区带,其亚基分子量约为45,000。NSE的等电点约为4.7。该酶作用2-磷酸甘油酸的km值为0.7mmol/L,对Mg~++的km值为0.7mmol/L。Mg~++为烯醇化酶必不可少的辅助因子。在50℃以下,NSE具有一定的热稳定性。

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克山病病区粮喂养大鼠红细胞膜脂流动性的变化

卜昕,李广元

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 428-432.

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本文观察了低硒的克山病病区粮和克山病病区粮补硒后喂养大鼠对其红细胞膜脂流动性的影响。实验结果表明克山病病区粮喂养的大鼠红细胞膜脂流动性较正常对照降低,其原因可能与机体处于低硒状态下红细胞膜结合硒含量降低、红细胞膜胆固醇含量及脂质过氧化产物升高有关,克山病病区粮补硒后喂养大鼠,其红细胞膜脂流动性恢复至正常对照。

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西藏拉萨地区藏族儿童血红蛋白类型和一例血红蛋白E的化学结构分析

宋良权,郑元明,葛向明,陈星林,叶如陵,冯尚文,陈松森,敖朝晖,贾佩臣,梁植权

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 433-435.

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本文报道480例西藏拉萨地区藏族儿童的血红蛋白类型,除发现一例慢速β链Hb变异体之外,其余均无异常。对该异常者Hb的化学结构进行分析,确证为HbE[β~(26(B8))Glu→Lys]。此为我国藏族人群中首次发现。

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壮族新生儿胎儿血红蛋白中G_γ与A_γ比值测定及其异常者基因图谱分析

敖朝晖,陈松森,贾佩臣,梁植权,王荣新,黄有文,查丹玉,Huisman.T.H.J.,Kutlar.F.

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 436-440.

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本文叙述聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定449例广西壮族新生儿脐带血中Gγ/Aγ比值,其中部分采用HPLC方法进行比较分析。结果显示低Gγ值(20—48％)和高Gγ值(81—85％)比例相同,占2.45％。对其中两例低Gγ值和两例高Gγ值者的杂色体DNA进行基因图谱分析,确定其基因型分别为-GAγ-/-Gγ-Aγ-,-Gγ-AGγ-Aγ-/-Gγ-Aγ-。

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癌基因Ha-ras在转化和未转化细胞中表达和调控的差异

韩复生,刘淑萍,宋建国,袁艳华,张维,邓国仁,刘培楠

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 441-445.

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以前的工作曾用人胃癌基因Ha-ras转化了大鼠全胚细胞系Ratl细胞,得到转化细胞Rat3-3。克隆了Ha-ras癌基因6.6kb及其上游区2.5kb DNA片段,并发现2.5kb有Alu重复顺序,说明这个片段是来源于人胃癌细胞,虽族观察到p21蛋白编码12位点突变,我们又发现转化的Rat3-3细胞的Ha-ras mRNA水平比未转化的Rat1高大约五倍;通过DNase I超敏感实验证明只有转化细胞核中的Ha-ras基因对DNaseI敏感,1μg/mL的DNaseI就有明显的降解,而未转化细胞Rat1细胞核的Ha-ras基因在15μg/mL的DNaseI中也未发现有任何降解;另外还发现转化细胞核有一种能为Ha-ras基因上游区2.5kb特异结合的核蛋白,分子量大约35kD,此核蛋白不能与6.6kb Ha-ras基因本身结合,在未转化细胞中未发现此蛋白。从这些结果推测,癌基因Ha-ras的活化,除了点突变外,还可能存在另一条活化途径,即它的上游区可能有类似增强子的调控区。

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北京鸭脑钙调素的分离纯化和性质的研究

钟琦,杜锦珠

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 446-450.

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钙调素(Calmodulin,简称CaM)是一种多生理功能的调节蛋白,在脑的功能活动中有重要作用。本文采用苯基琼脂糖(phenyl-Sepharose CL 4B)层析和葡聚糖凝胶(Sephadex G-50)过滤法,从北京鸭脑中分离纯化出CaM。纯化的CaM经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦(IEF)电泳鉴定均为一条区带。分子量为19kD,等电点(pI)为4.15,消光系数为1.83。对纯化的鸭脑CaM的活性和性质进行了研究。它可明显地激活牛环核苷酸磷酸二酯酶活性,在有Ca~(2+)存在的条件下,SDS-PAGE中出现电泳迁移速度的改变,紫外吸收光谱具有已知CaM特有的吸收多峰形,并观察了Ca~(2+)对荧光发射光谱的影响。其氨基酸组成中,1/3是酸性氨基酸,苯丙氨酸和酪氨酸的比例为8:2。与猪CaM和牛CaM的物理化学性质作了比较。

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天南星生物碱对鼠肝线粒体膜的作用

刘春梅,陈文为

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 451-455.

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本文观察到天南星中两种生物碱(201与202)均有不同程度的清除超氧阴离子自由基(O_2~- )、抑制鼠肝线粒体脂质过氧化反应、异常膨胀和膜ATP酶活性,除202对膜流动性没有明显的作用外,上述各项指标202较201的作用强度更为显著。因此可以推测该生物碱具有治疗心血管疾病和肝脏病的作用。

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生物素-氨基丁基乙基异鲁米诺与亲和素的结合特性及其在发光免疫中的应用

蒋滋慧,田亚平

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 456-460.

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本文合成了生物素—氨基丁基乙基异鲁米诺偶联物,此物与亲和素结合后,降低了发光强度,亲和素含量与发光强度的变化有定量关系。因此,利用此特性于C—反应蛋白(CRP)发光免疫测定中。CRP标准曲线范围为1.25到160ng/mL。批内和批间变异系数分别为4.8％及14.8％。60名献血员血清CRP平均值为1.3μg/mL。此法与火箭电泳法测定同一血清CRP,相关性很好,r=0.96(n=20)。

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还原型胰岛素A、B链相互作用的初步研究

华庆新

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 461-466.

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本文报道在chance所用“一步法”重组胰岛素的类似条件下,还原型A、B链相互作用研究的初步结果。在pH10.6对S—磺酸型A及B链加入1.2倍SH/SSO_3—的二巯基苏糖醇,在一小时内A、B链与DTT的混合物较之单独的A、B链与DTT的混合物,紫外差光谱显示295、245nm负差峰,峰值随时间增大;园二色性测定观察到混合链的α螺旋含量比单独的A、B链有所增加。这表明在A、B链的巯基氧化生成二硫链前,还原型A、B链间的相互作用导致Tyr残基逐渐内埋,肽链构象的调整使有序二级结构增加。根据此时还原程度的测定,讨论了DTT与S—磺酸型A、B链作巯基交换的可能机制,过多的还原试剂易破坏已正确配对的二硫键,也妨碍肽链构象的调整。

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马氏钳蝎毒昆虫类神经毒素的分离、纯化及性质研究

董北,胡纫秋,王锦兰,雷克健,罗林儿,程会文,周培爱

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 467-473.

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经Sephadex G-50,sp-Sephadex C-25二步柱层析法,从山东马氏钳蝎(Bu-thus martensii Karch)粗毒中分离出四种对美洲(虫非)蠊有强直麻痹反应的毒性蛋白组份。其中二个组分在SDS聚丙烯酰胺电泳和等电聚焦电泳上均呈现单一区带,命名为BmK IT-Ⅰ,BmK IT-Ⅱ其pI分别为8.2和8.4,分子量分别为8400和7560。同时还分析了二个组份的氨基酸组成。经DABITC/PITC双偶合法测定了BmKIT-Ⅰ和BmK IT-Ⅱ的N端部份氨基酸排列顺序,它们分别为H_2NVal.Arg.Asp.Ala……H_2NVal.Arg.Asp.Gly……。电生理学研究表明,纯化的BmK IT-I(1×10~(-5)g/ml)对(虫非)蠊腹Ⅵ神经节的突触传递有阻断作用,阻断后用生理溶液洗,则突触传递可恢复。从同一蝎毒粗毒中分离纯化的哺乳动物类神经毒素BmKⅢ在浓度高出100倍(1×10~(-3)g/ml)时也可以阻断(虫非)蠊腹Ⅵ神经节的突触传递,但用生理溶液冲洗没有观察到恢复。

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广西眼镜王蛇毒碱性磷脂酶A_2(PLA_2)的分离纯化及其性质的研究

舒雨雁,庄茂辛,周陆生,李曼玲,魏琦

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(05): 474-480.

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广西眼镜王蛇毒用羧甲基纤维素CM-52、磷酸纤维素P-11和Sepharose CL-6B柱层析纯化,得到一个在聚丙烯酰胺凝胶电泳上为单一蛋白带,PLA_2的比活性较原蛇毒提高3.6倍,分子量的为13000,由122个氨基酸组成,_pI为8.9,具有良好的热稳定性。从碱性PLA_2对红细胞影响的电镜观察可见,对人的红细胞膜有明显的作用,而对山羊红细胞作用不明显。PLA_2无论对人还是对山羊、兔和豚鼠红细胞电泳速度都有明显的迟缓作用。

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