中国生物化学与分子生物学报

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曾桂超

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 1-8.

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<正> 七十年代以来,发现了一类能改变DNA拓扑性质的酶,称之为拓扑异构酶(简称拓扑酶)。拓扑酶在许多与DNA有关的遗传功能中具有重要的作用。因此,对拓扑酶的研究一直非常活跃。这类酶的活性表现在体外系统中催化DNA的各种拓扑异构化反应。然而在体内,特别在动物细胞中,拓扑酶的生物学功能仍不清楚。虽然在体外测定系统中,拓扑酶可以单独催化DNA的各种拓扑异构化反应,但近年来的结果显示,其体内活性似乎需要其他蛋白的参与,同时可能存在共价修饰的调控机制。笔者的工作涉及一种动物温度敏感变

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B-DNA的深沟是蛋白质“识别螺旋”的最佳结合部位

王家槐

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 9-13.

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<正> 蛋白质识别有特定序列结构的DNA片段,是基因表达调控机构中最根本的分子事件,也是细胞内一些重要的酶对DNA特定部件进行催化加工的专一性的基础。早年的模型研究曾一般地假发,蛋白质的α—螺旋可以嵌入DNA的深沟内,平行或反平行的两条β—链可以结合到浅沟区。随后,生物化学实险证明,许多序列专一性DNA—结合蛋白的结合区是在DNA的深沟而不是浅沟。最近,第一批这一类蛋白质以及它们与DNA复合物的三维结构已由X射线晶体学方法获得测定。结果表明,蛋白质利用所谓“识别螺旋”结合到B-DNA

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一次密度梯度超速离心分离人血清的VLDL、LDL、HDL_2、HDL_3及无脂血清

王克勤,何锦麟

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 15-23.

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本文将密度梯度、离心力和离心时间作适当的组合和配比:即不连续密度梯度1.000—1,400g/mlNaBr溶液、离心力168,000g、22小时,10℃,在Beckman L8-80型、区带头Ti-14一次超速离心将血清中四种主要脂蛋白和无脂血清相互分开,获得五个明显的蛋白峰。前四个峰经琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺电泳,免疫双扩散和分析超速离心鉴定分别为VLDL、LDL、HDL_2和HDL_3,不含清蛋白。峰五为无脂血清,仅含0.046mg/dl胆固醇和0.2mg/dl甘油三酯,本法重复性佳,分离样品多(50ml),效果好,操作简单,并可延长离心机头的使用期限。已用于研究各种因素对脂蛋白含量的影响及其代谢间的相互关系。

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人红细胞膜带3蛋白重组人脂质体及其~(35)SO_4~(2-)运输活性

范培昌,王灵宝,吴玲,赵海燕,李立

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 25-32.

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用Triton X-100选择性抽提法,部分提纯了人红细胞膜带3蛋白。在除去去污剂后,带3蛋白被插入由磷脂酰胆碱/胆固醇组成的脂质体中。研究表明,用0.05％Triton抽提膜能除去大部分唾液酸糖蛋白,不会损失太多的带3蛋白。再用0.5％Triton抽提,可增溶出大量带3蛋白和少量其它膜蛋白。把它重组入脂质体后,在最后超离心步骤中得到了小的单层囊泡和大的多层囊泡。本文研究了单层重组囊泡输入~(35)SO_4~(2-)的功能,并和那些由人红细胞“发芽”得到的天然囊泡输入~(35)SO_肋~(2-)的功能作了比较。

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河蚌C-反应蛋白的分离纯化及其性质研究

夏东元,杜锦珠

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 33-40.

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用合成的CDPC-Sepharose-6B亲和层析吸附剂一步提纯河蚌C-反应蛋白(CRP)。纯化的CRP在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦电泳鉴定时均显示为一条区带。其等电点(pI)为5.2,分子量约为310,000道尔顿,由六个亚基组成,亚基分子量约为51,000道尔顿。在280nm处的消光系数E_(1cm)~(1mg)/ml=1.2。河蚌CRP与C_多糖(CPS)发生的沉淀反应是钙依赖性的。本文对河蚌CRP的氨基酸组成及其它性质也作了研究。

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利用单克隆抗体鉴定人甲胎蛋白(HAFP)抗原结构可分性

虞伟,麦荫乔

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 41-46.

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本文利用两株针对HAFP分子不同抗原决定簇的单克隆抗体,鉴定HAFP酶解片断的抗原抗体反应性质,并同完整HAFP分子进行比较。结果表明,酶解片断上失去了一株单克隆抗体所对应的分子部份,完整保留着另一株单克隆抗体所识别的抗原决定簇,从而证实HAFP分子某些抗原结构之间具有可分割性。

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小麦丛矮病毒N蛋白的酶加工现象

龚祖埙,郑巧兮

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 47-52.

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经SDS-聚丙烯酰胺梯度电泳可以从提纯的小麦丛矮病毒中分离出五种结构蛋白。其中,在N蛋白区域又可分辨出分子量相差2KD的两条蛋白蒂,N_1=46K,N_2=44K。从电泳中分离得到的N_1及N_2蛋白经同位素~(125)I标记后的双向指纹图谱证明没有明显差异,为同一种蛋白质。又通过N末端分析证明N_1的末端为Ser.,N_2为His,初步断定N_1与N_2是前体与酶解产物之间的关系。实验还证明小麦丛矮病毒的核衣壳制剂具有专一酶解N_1至N_2的能力,首次证明了植物弹状病毒的核衣壳具有蛋白水解酶的活力。本文还提出了N蛋白的酶加工现象在弹状病毒的复制和转录的调控过程中可能起重要作用的设想。

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超氧化物歧化酶的自旋标记研究

李益新,方允中,刘智峰

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 53-58.

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本文应用对-SH基特异性结合的自旋标记物对Cu_2Zn_2-SOD进行自旋标记研究,进一步观察了电离辐射对-SH基部位的影响,实验结果:(1)自旋标记后的Cu_2Zn_2-SOD表现出典型的弱固定化的ESR波谱信号特征。标记对Cu_2Zn_2-SOD的UV谱无明显影响。这表明该游离-SH基是位于酶蛋白分子的相对表层而不是包埋在疏水内部。(2)标记保温后立即取样及保温后17小时取样测酶活力,发现与未标记酶的活力相同。这表明该-SH基与酶的催化活性无直接关系。(3)在10—100Krad γ-射线照射下,酶活性及ESR信号幅度均随照射剂量增加而下降,两者之间有一定的相关性。

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七星瓢虫卵黄原蛋白基因的表达mRNA的体外转译

翟启慧,张建中,袁凌

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 59-66.

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七星瓢虫成熟雌虫脂肪体总RNA和poly(A)~+RNA中可转译mRNA的水平约为雄虫和不成熟雌虫的两倍,其中所含的卵黄原蛋白mRNA可在体外转译系统中指导卵黄原蛋白多肽的合成。雌虫取食人工饲料时,其脂肪体RNA中可转译mRNA的水平很低,不能指导卵黄原蛋白多肽的合成。保幼激素类似物能诱导可转译卵黄原蛋白mRNA的出现。

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大熊猫乳酸脱氢酶同工酶M_4的纯化与某些性质的研究

梁宋平,张龙翔

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 67-74.

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利用8-(6-氨已基)-氨基-5’-AMP Sepharose亲和层析和DEAE-Sephadex A50离子交换层析纯化了大熊猫LDH-M_4。纯化的大熊猫LDH-M_4呈针状晶体,比活为412单位/毫克。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为一条区带。SDS凝胶电泳测得其亚基分子量为35,900;等电聚焦电泳测得其等电点为8.05。经氨基酸组成分析,得出每个大熊猫LDH-M亚基含有5个Cys,26个Lys和10个Arg。其N-末端氨基酸残基可能为封闭的,C末端氨基酸残基经测定为Phe。大熊猫LDH-M_4的TPCK-胰蛋白酶水解物在纤维素膜指纹图谱上呈现35个肽斑,与已知序列的猪LDH-M_4的指纹图谱相比较,多数肽斑位置相同,约有10个肽斑在两者指纹图谱上有差异。

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在AppleⅡ型微机上实现核酸数据处理的工作程序

钱苏雯,乐树云,张爱宝,李载平

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 75-82.

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本文报道了在AppleⅡ型微机上实现核酸数据处理的一系列工作程序。应用这些程序,可进行核酸数据的贮存、对指定的核酸数据结构的改造、限制性内切酶识别位点的检索、核酸序列至蛋白序列的翻译、相关核酸序列及蛋白序列的同源性比较、氨基酸密码使用频率的统计和基因的启动子结构的初步探索等方面的工作。

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pBR322DNA与8-甲氧补骨脂素光化学反应部位的碱基顺序特异性

魏康,铃木孯之

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 83-88.

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用限制性核酸内切酶酶切试验研究了质粒pBR322 DNA经8-MOP及近紫外线作用后损伤部位的碱基顺序特异性。实验研究发现PUVA损伤的DNA在HindⅢ及RsaⅠ识别位置上酶切反应受到严重抑制,而在SphⅠ,EcoRⅠ,PvuⅡ,BamHI,PstⅠ识到位置上抑制轻微。通过对不同识别位置上碱基顺序及其光化学反应敏感性的分析,推断出DNA的TpA顺序可能是最易接受8-MOP光化学反应的部位。

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应用长度多态性对非缺失型Hb H病进行产前基因诊断

王黎明,王申五,吴冠芸,王荣新,黄有文,赵乐天,苏继东,张尼佳

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 89-93.

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利用ζ珠蛋白基因的限制性内切酶HindⅢ特异片段长度多态性分析,鉴别了一个非缺失型HbH病患儿及其父母的单体型,并对该家系正在妊娠中的重型HbH危险胎儿进行了早期产前诊断,确定其基因型为(αα/αα~T)。

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用微型计算机在TSr(Bg1Ⅱ)-1核苷酸顺序中寻找相似序列

王鹰翔,王丹平,蔡良婉

中国生物化学与分子生物学报. 1986, 2(01): 94-95.

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<正> 为了在TSr(Bgl Ⅱ-1)核苷酸顺序中寻找有无类似α—顺序的冷点区顺序,我们在微型电子计算机上编制了查找相似序列顺序(WSS程序)。本程序的特点是运行速度快,无重复扫描,可自行选择欲查找的相似百分比和百分比精度,它不仅适用于寻找内切酶的酶切点,而且可以在相当长度的已测序DNA顺序中快速准确地检出碱基位置和数量发生随机变异的DNA相似片段,并直接计算、打印出相似百分比值。

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