SPLUNC1多肽抗体的设计、制备与鉴定
周后德,赵瑾,张晋,欧阳珏,周鸣,彭淑平,李小玲,李桂源*
中南大学肿瘤研究所，长沙 410078
Design,Preparation and Identification of SPLUNC1 Peptide Antibody
ZHOUHou-De,ZHAOJin,ZHANGJin,OUYANGJue,ZHOUMing,PENGShu-Ping,LIXiao-Ling,LIGui-Yuan*
Cancer Research Institute,Central-Southern University,Changsha 410078，China
摘要 通过设计SPLUNC1蛋白的一段多肽，快速制备抗SPLUNC1的多肽抗体，检测多肽抗体的性能，为SPLUNC1的功能研究提供可靠的平台. 用DS Gene1.1软件分析SPLUNC1蛋白的跨膜结构域、二级结构、疏水性、亲水性以及抗原性等，综合考虑抗体设计的其它因素，设计出两段15～20个氨基酸的多肽.将合成后的多肽与钥孔戚血蓝素（keyhole limpet hemocyanin，KLH）偶联，同时初筛出宿主血清与SPLUNC1无交叉反应的新西兰家兔，用与KLH相连的SPLUNC1多肽免疫家兔，2个月后获取血清，亲和纯化出抗SPLUNC1多肽抗体，通过ELISA法检测其效价，免疫印迹与免疫组化检测其特异性与适用范围.通过该方法得到了高效价与高特异性的SPLUNC1多克隆特异性抗体，ELISA法测定其效价可达到1∶105 ，通过对包含有PLUNC家族不同成员的蛋白混合物进行Western印迹检测证明，该多肽抗体具有较高的特异性，不与同一家族中的其它蛋白发生交叉反应，而且该抗体可用于免疫组化，说明所制备的分泌性蛋白SPLUNC1抗体具有高特异、高效价等特点，将为SPLUNC1基因的功能研究提供有用的研究材料.
关键词 ：
SPLUNC1 ,
多肽抗体 ,
特异性
收稿日期: 2005-11-30
通讯作者:
李桂源
引用本文:
周后德,赵瑾,张晋,欧阳珏,周鸣,彭淑平,李小玲,李桂源. SPLUNC1多肽抗体的设计、制备与鉴定[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2006, 22(06): 513-.
ZHOUHou-De,ZHAOJin,ZHANGJin,OUYANGJue,ZHOUMing,PENGShu-Ping,LIXiao-Ling,LIGui-Yuan. Design,Preparation and Identification of SPLUNC1 Peptide Antibody. Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biol, 2006, 22(06): 513-.
链接本文:
http://cjbmb.bjmu.edu.cn/CN/ 或 http://cjbmb.bjmu.edu.cn/CN/Y2006/V22/I06/513
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